目的探討 FTY720-P 對 MC3T3-E1 細胞分化成熟的作用。方法取 MC3T3-E1 細胞,分為實驗組和對照組。實驗組以 400 ng/mL FTY720-P(以氯仿為溶劑)作用于細胞,建立體外誘導成骨分化模型;對照組培養基中僅加入氯仿。培養 48 h 后,倒置相差顯微鏡觀察兩組細胞形態;免疫熒光染色檢測兩組成骨細胞相關蛋白Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的表達;ALP 染色及茜素紅染色觀察兩組成骨細胞形成情況及礦化結節形成情況;TUNEL 熒光法檢測兩組細胞凋亡情況。結果培養 48 h 后,可見兩組細胞均已長滿瓶底,呈梭形,細胞形態無明顯差異。免疫熒光染色顯示,實驗組Ⅰ型膠原蛋白表達呈陽性,對照組呈弱陽性;實驗組的 Ⅰ 型膠原蛋白積分吸光度(IA)值為 187 600±7 944,顯著高于對照組的 14 230±1 070,差異有統計學意義(t=43.680,P=0.001)。實驗組和對照組Ⅲ型膠原蛋白表達均呈弱陽性,兩組Ⅲ型膠原蛋白 IA 值比較差異無統計學意義(t=1.976,P=0.119)。實驗組細胞 ALP 染色和茜素紅染色均呈陽性,而對照組均呈陰性。實驗組 TUNEL 染色呈陽性,對照組呈陰性;實驗組 TUNEL 染色細胞陽性率為 35.82%±2.99%,顯著高于對照組的 2.28%±0.51%(t=23.420,P=0.002)。結論FTY720-P 可以促進 MC3T3-E1 細胞成骨分化,加快細胞外基質成熟和礦化,且能影響細胞凋亡。
目的探討 FTY720-P 對破骨細胞 EphA2-EphrinA2 雙向信號通路的影響。方法取小鼠巨噬細胞 RAW264.7,采用地塞米松及 1α,25-二羥維生素 D3 誘導分化為破骨細胞,并行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色鑒定。將誘導培養的破骨細胞分為兩組,實驗組給予 400 ng/mL 的 FTY720-P 處理,對照組不給予 FTY720-P。培養 48 h 后,取細胞行實時熒光定量 PCR 檢測、Western blot 檢測以及免疫熒光染色觀察,分析細胞中 EphA2、EphrinA2、RhoA,以及骨重建相關蛋白 BMP-2 及 TGF-β1 的表達。結果經 TRAP 染色鑒定,RAW264.7 細胞成功誘導成為破骨細胞。培養 48 h 后,與對照組相比,實驗組 EphA2 及 EphrinA2 mRNA 及蛋白相對表達量均明顯降低(P<0.05),RhoA 蛋白相對表達量也明顯降低(P<0.05);BMP-2 及 TGF-β1 mRNA 相對表達量明顯增高(P<0.05),蛋白表達增強。結論FTY720-P 能通過影響破骨細胞 EphA2-EphrinA2 雙向信號通路之間的傳導下調 RhoA,并促進 TGF-β1 和 BMP-2 表達,最終影響破骨細胞的破骨作用。