目的 客觀評價PCR技術在人類免疫缺陷病毒(human immune-deficiency virus, HIV)檢測中的性能,了解聚合酶鏈技術(polymerase chain reaction,PCR)PCR技術作為艾滋病篩查方法的臨床應用價值.方法 以diagnosis Tests(診斷性試驗),AIDS(艾滋病),PCR(聚合酶鏈反應),HIV(人類免疫缺陷病毒)為檢索詞,對1991年～2001年的MEDLINE和CBM進行了回顧性機檢,并根據國際公認標準對納入文獻進行分析.結果 共檢索到567篇論著性文章,納入53篇.其中與金標準進行對比的有47%,同時計算了和能計算出敏感度、特異度、預測值等統計學指標的文章數量分別為25%、23%和23%.沒有文章計算似然比.結論 PCR技術在HIV檢測特別是篩查中的應用還處在探索階段,有待于提高研究方案的總體設計水平.
目的 使用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測胃癌淋巴結的微轉移情況，并探討微轉移的臨床意義。方法 收集我院2010年1～6月期間40例行胃癌根治術切除的281枚和10例行胃十二指腸潰瘍手術切除的39枚，共計320枚淋巴結標本，以CEA、CK-19和CK-20為引物進行qRT-PCR檢測其微轉移情況，并分析微轉移的臨床病理特點。結果 40例胃癌患者中有28例(70.00%)、31枚(15.35%，31/202)淋巴結檢測出有微轉移。10例胃潰瘍的39枚淋巴結標本，HE染色檢測和qRT-PCR檢測均為陰性。淋巴結微轉移的陽性率與腫瘤分化程度、浸潤深度和臨床分期有關(P＜0.05)。結論 qRT-PCR是檢測胃癌淋巴結微轉移敏感且特異的方法，對胃癌臨床分期、判斷預后以及治療方案選擇具有重要意義。
目的探討趨化因子受體CXCR4和CCR7在甲狀腺癌中的表達及其臨床病理意義。方法選取2006～2009年期間在我院行手術治療的甲狀腺癌患者55例和2009年在我院行手術治療的甲狀腺腺瘤患者30例，采用免疫組織化學染色SP法檢測甲狀腺癌及甲狀腺腺瘤組織中的CXCR4和CCR7的表達。結果CXCR4和CCR7在甲狀腺癌中的表達陽性率均明顯高于甲狀腺腺瘤(Plt;0.01)。CXCR4和CCR7在臨床分期為Ⅲ+Ⅳ期的甲狀腺癌患者中的表達陽性率均明顯高于臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期者(Plt;0.05); CCR7在有淋巴結轉移的甲狀腺癌中的表達陽性率明顯高于無淋巴結轉移者(Plt;0.05)，而CXCR4的表達陽性率與甲狀腺癌患者有無淋巴結轉移無關(Pgt;0.05); CXCR4和CCR7在甲狀腺癌組織中的表達陽性率與甲狀腺癌患者的年齡和性別均無關(Pgt;0.05)。在甲狀腺癌中，CXCR4陽性表達和CCR7陽性表達呈正相關(rs=0.491，P=0.000)。結論CXCR4和CCR7協同參與了甲狀腺癌的進展，可作為判斷甲狀腺癌預后的指標； CCR7高表達提示甲狀腺癌容易發生淋巴結轉移。
目的 探討HBsAg陽性肝細胞肝癌（HCC）患者乙型肝炎病毒（HBV）DNA基因型與其患HCC之間的關系。方法 運用PCR條帶分析與基因測序相結合的方法對我院500例HBsAg陽性患者（其中HCC患者150例）的HBV DNA進行分型，并對分型結果進行分析。結果 HBV DNA B型和C型基因型是HBsAg陽性HCC患者和非HCC患者的共同優勢基因型，但HCC患者中C型基因型所占比例為65.33%（98/150），明顯高于非HCC患者的25.14%（88/350），而B型則相反，分別為28.67%（43/150）與68.86%（241/350），χ2=75.45，Plt;0.05。HCC患者中，HBV的B型與C型基因型分布在不同性別及不同年齡段之間的差異無統計學意義（Pgt;0.05）。結論 HBV DNA C型基因型在HCC患者中多見，可能與HCC的發生有關。
目的 克隆和構建攜帶人低氧誘導因子-1α（HIF-1α）的Tet-on基因表達系統反應質粒PTRE-HIF-1α。方法 以缺氧的肝癌細胞株HepG2總RNA為模板，進行RT-巢式PCR，獲得HIF-1α的cDNA，克隆入Tet-on基因表達系統反應質粒PTRE2hyg，酶切重組子鑒定。將構建好的PTRE-HIF-1α用脂質體法轉入HepG2Tet-on細胞，在強力霉素的作用下，用RT-PCR及Western blot法鑒定重組質粒的表達。結果 擴增出HIF-1α的cDNA測序結果與Genbank記載完全一致，并成功克隆入PTRE2hyg，將反應質粒PTRE-HIF-1α轉入HepG2Tet-on細胞，可以完整有效表達HIF-1α且受強力霉素的調控。結論 成功克隆和構建攜帶HIF-1α基因的Tet-on基因表達系統反應質粒PTRE-HIF-1α，并證明其表達能在HepG2Tet-on細胞中受強力霉素調控。
目的 觀察小鼠肺組織中β-防御素-4（mBD-4）和mBD-6的基因表達水平，以及急性肺損傷（ALI）對其表達的影響。方法 將60只成年昆明小鼠隨機分為ALI組和對照組（每組30只），用脂多糖腹腔注射復制ALI模型，于不同時間點處死小鼠獲取肺組織，實時熒光定量PCR檢測肺組織mBD-4、mBD-6的基因表達水平，測序鑒定PCR產物的特異性。結果 對照組肺組織中各時間點及ALI組6 h點均無mBD-4、mBD-6基因表達，而ALI組12 h，1 d，3 d時點表達顯著升高（依次為mBD-4：0.0326±0.0104，0.0487±0.0126，0.0468±0.0092；mBD-6：0.0397±0.0083，0.0444±0.0072，0.0425±0.0113）。ALI組小鼠mBD-4表達在12 h時點顯著低于1 d，3 d時點（P均lt;0.05），在1 d與3 d時無顯著差異（Pgt;0.05）；ALI組mBD-6表達在12 h，1 d，3 d時間點無顯著差異（Pgt;0.05）。結論 mBD-4和mBD-6基因在昆明小鼠肺組織中沒有組成型表達，而ALI可以誘導其表達。
目的 探討酶切富集PCR 法檢測非小細胞肺癌( NSCLC) 患者胸腔積液表皮生長因子受體基因( EGFR) 外顯子19 缺失和外顯子21 L858R 突變的臨床意義。方法 采用EGFR 基因突變酶切富集及非酶切富集PCR 法對30 例NSCLC 患者胸腔積液游離核酸EGFR 基因外顯子19 缺失和外顯子21 L858R 突變進行分析。結果 30 例NSCLC 患者中, 酶切富集PCR 法分別檢出EGFR 基因外顯子19 缺失10 例( 33. 3% ) 和外顯子21 L858R 突變5 例( 1. 7% ) , 非酶切富集PCR 法則僅能分別檢出6 例( 20. 0%) 和1 例( 3. 3% ) ; 兩種方法檢出率差異有統計學意義( P = 0. 032) 。在接受吉非替尼治療的4 例患者中, 2 例檢出EGFR 基因突變患者治療后腫瘤均部分緩解。結論 酶切富集PCR 法可以高效、經濟、準確地檢測NSCLC 患者胸腔積液游離核酸EGFR 基因突變, 可能成為臨床NSCLC 患者選擇EGFR 酪氨酸激酶抑制劑治療的預測方法。
目的 探討外周血表皮生長因子受體( EGFR) 基因突變在非小細胞肺癌( NSCLC) 吉非替尼治療適宜患者篩選中的價值。方法 對2005 年12 月至2007 年12 月在廣州醫學院第一附屬醫院腫瘤血液中心治療的170 例NSCLC 患者, 應用EGFR 基因突變酶切富集PCR 法分析血漿游離核酸EGFR 基因外顯子19 缺失和外顯子21L858R 突變。分析血漿EGFR 基因突變與性別、吸煙史、病理類型、TNM分期、吉非替尼治療客觀緩解率和疾病無進展生存期間的關系。結果 170 例血漿標本共檢出血漿EGFR 基因突變77 例, 突變率為45. 3% 。血漿EGFR 基因突變主要見于肺腺癌患者( P lt;0. 001) 及非吸煙者( P =0. 001) 。在33 例接受吉非替尼治療的患者中, 血漿EGFR基因突變陽性患者的客觀有效率和中位疾病無進展生存期均顯著優于血漿EGFR 基因突變陰性患者( P = 0. 001) 。結論 血漿游離核酸酶切富集PCR 法能夠靈敏而特異地檢測NSCLC 的EGFR 基因突變。突變檢測陽性者對吉非替尼的反應率明顯高于野生型患者。
目的觀察人胎盤MSCs（placental-derived MSCs，PMSCs）對異基因小鼠皮膚移植的影響。 方法取自愿捐贈人胎盤胎兒側組織，分離培養PMSCs，并以第3代細胞進行實驗。選擇30只6～8周齡C57BL/6小鼠作為受體，背部制作直徑12 mm圓形皮膚缺損；以1～2日齡Vr∶CD1（ICR）乳鼠皮膚作為供體，建立小鼠異基因皮膚移植排斥模型。將30只受體小鼠隨機分為3組，每組10只。A組為自體皮膚移植組，B組為同種異體皮膚移植+ PBS尾靜脈注射組，C組為同種異體皮膚移植+人PMSCs（1 × 105個/只）尾靜脈注射組。觀察各組移植皮片成活情況，檢測術后7 d受體小鼠血液白細胞數量、腹腔液巨噬細胞活化率，采用ELISA、RT-PCR法檢測受體小鼠血液、脾臟中IL-4、IL-17及IFN-γ表達量的變化。 結果A、B、C組移植皮片成活時間分別為（58.33 ± 4.04）、（3.80 ± 0.92）、（6.80 ± 0.82） d，A組明顯優于B、C組，C組優于B組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。術后7 d，A、B、C組小鼠血液白細胞計數分別為（6.32 ± 0.45）× 109/L、（7.45 ± 0.52）× 109/L、（6.35 ± 0.39）×109/L ，A、C組顯著低于B組（P lt; 0.05），A、C組間差異無統計學意義（P gt; 0.05）。A、B、C組小鼠巨噬細胞活化率分別為6.87% ± 2.40%、7.84% ± 0.44%、15.98% ± 2.87%，C組顯著高于A、B組（P lt; 0.01）。ELISA檢測示，3組血液中IL-4含量差異無統計學意義（P gt; 0.05）；C組IL-17和IFN-γ含量顯著低于B組（P lt; 0.05）；B組IFN-γ含量明顯高于A組（P lt; 0.05）；其余各指標組間比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。RT-PCR檢測示， B、C組IL-4、IL-17和IFN-γ mRNA相對表達量與A組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）；C組IL-4和IFN-γ mRNA相對表達量明顯低于B組（P lt; 0.05），IL-17 mRNA相對表達量與B組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論異基因小鼠皮膚移植后尾靜脈注射人PMSCs可抑制免疫排斥反應，其機制可能與減少IL-17及IFN-γ等相關細胞因子分泌有關。
目的 探討殼聚糖（chitosan，CS）介導IGF-1 基因（igf-1）局部轉染對關節軟骨損傷修復的作用。 方 法 3 月齡健康雄性大耳白家兔12 只，體重2.0 ～ 2.5 kg，隨機分為對照組和干預組（n=6）。其中對照組實驗動物左側為正常對照組，右側為生理鹽水對照組；干預組實驗動物左側為CS 干預組，右側為CS/igf-1 干預組。后3 組實驗動物分別制備兔膝關節外側髁軟骨缺損模型，正常對照組不制備。CS/igf-1 干預組于術后當日關節腔內注射CS/igf-1 復合物0.5 mL，每周2 次，共4 周；CS 干預組注射等體積CS 溶液；正常對照組和生理鹽水對照組注射等體積生理鹽水。術后28 d，取關節軟骨組織，分別行組織學觀察和實時熒光定量PCR 檢測Ⅱ型膠原及聚集蛋白聚糖基因表達。 結果 HE染色及甲苯胺藍染色示，CS/igf-1 干預組及CS 干預組損傷部位均有明顯軟骨性修復，前者明顯優于后者，同時均可見纖維組織增生和炎性細胞浸潤；生理鹽水對照組僅見大量纖維組織增生和炎性細胞浸潤，未見明顯軟骨性修復。正常對照組、生理鹽水對照組、CS 干預組、CS/igf-1 干預組Ⅱ型膠原、聚集蛋白聚糖基因相對含量均依次增高，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 CS/igf-1 復合物可增加軟骨細胞中Ⅱ型膠原及聚集蛋白聚糖基因的表達，促進損傷軟骨修復。