目的探討Notch信號通路重要靶點Hey1表達水平改變對BMP-9誘導C3H10T1/2細胞成骨分化與增殖的影響。 方法構建過表達Hey1慢病毒LV-Hey1、抑制Hey1表達慢病毒LV-shHey1，分別感染C3H10T1/2細胞干預Hey1表達水平，以LV-Blank（空質粒）感染C3H10T1/2細胞作為對照；以熒光顯微鏡對慢病毒感染效果、實時熒光定量PCR以及Western blot對Hey1表達水平進行驗證，篩選不同Hey1表達水平的穩定細胞系。用含BMP-9的條件培養基誘導不同Hey1表達水平的C3H10T1/2細胞（分別為BMP-9+C3H10T1/2組、BMP-9+C3H10T1/2-Hey1組、BMP-9+C3H10T1/2-shHey1組），以正常培養基培養的細胞作為對照（C3H10T1/2組、C3H10T1/2-Blank組）。培養后48 h，實時熒光定量PCR及Western blot測定成骨分化相關轉錄因子Runx2、骨橋蛋白、骨鈣素mRNA及蛋白表達水平；4、5、6、7 d行MTT檢測及4、5、10 d行流式細胞儀測定細胞增殖能力；4、7 d時ELISA測定細胞ALP表達水平并行染色觀察。 結果成功建立不同Hey1表達水平穩定細胞系。成骨方面，各時間點與BMP-9+C3H10T1/2組比較，BMP-9誘導下Hey1過表達的BMP-9+C3H10T1/2-Hey1組細胞Runx2、骨橋蛋白、骨鈣素mRNA及蛋白表達水平以及成骨分化標志物ALP含量均顯著增加（P < 0.05），抑制Hey1表達的BMP-9+C3H10T1/2-shHey1組細胞以上指標均顯著降低（P < 0.05）。對細胞增殖活力影響方面，與BMP-9+C3H10T1/2組比較，BMP-9+C3H10T1/2-Hey1組MTT檢測吸光度（A）值及細胞G2+S期百分比均提高（P < 0.05）；而抑制Hey1表達BMP-9+C3H10T1/2-shHey1組以上指標均降低（P < 0.05）。 結論Hey1表達是BMP-9誘導C3H10T1/2細胞成骨分化重要環節，同時影響細胞早期增殖。
目的探討重組腺病毒介導BMP-9及促紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）雙基因共轉染對脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）體外成骨分化的影響。 方法取4月齡新西蘭兔腹股溝脂肪組織，采用酶消化法與貼壁法分離培養ADSCs并鑒定其多向分化能力。將第3代ADSCs分為5組：A組為正常細胞，B組為空質粒轉染細胞作為對照，C、D組分別采用BMP-9、EPO重組腺病毒轉染細胞，E組采用BMP-9、EPO重組腺病毒共轉染細胞。轉染培養7 d后倒置相差顯微鏡觀察各組細胞生長變化；計算48 h時病毒轉染效率，14 d熒光顯微鏡下觀察各組細胞熒光表達情況；14 d時Western blot檢測各組細胞BMP-9及EPO蛋白表達。取轉染培養14 d的5組細胞進行成骨誘導培養，于誘導培養3、7、14 d檢測各組細胞ALP活性；3周時茜素紅染色觀察鈣結節形成情況，實時熒光定量PCR檢測骨橋蛋白（osteopontin，OPN）、骨鈣素（osteocalcin，OCN）基因表達。 結果轉染培養7 d后倒置相差顯微鏡下見A、B組部分細胞變為橢圓形、圓形和不規則形；C、D組可見少量長梭形細胞；E組長梭形細胞明顯增多，僅見少量圓形細胞。熒光顯微鏡下觀察BMP-9、EPO及BMP-9/EPO重組腺病毒均能穩定轉染ADSCs，轉染效率為80%～93%。Western blot檢測示E組BMP-9及EPO蛋白相對表達量顯著高于其他組，差異有統計學意義（P < 0.05）。成骨誘導培養3、7、14 d時各組細胞ALP活性明顯升高，E組優于其余各組（P < 0.05）；3周時茜素紅染色示E組鈣結節數亦顯著高于其余各組（P < 0.05），實時熒光定量PCR示E組OPN和OCN基因相對表達量明顯高于其他組，C、D組高于A、B組，比較差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論重組腺病毒介導BMP-9及EPO基因均可轉染ADSCs并穩定表達，雙基因共轉染后能顯著促進成骨相關基因和蛋白的表達。