目的 運用Cochrane系統評價的方法評價不同部位和不同途徑注射膠原酶治療腰椎間盤突出癥的有效性和安全性，以期為臨床合理選擇注射部位和途徑提供依據。方法 計算機檢索PubMed（1966-2006.5）、EMbase（1966~2006.5）、Cochrane圖書館（2006年第2期）、CRD（Center for Reviews and Dissemination，York University）和CBM（1978~2006.5)、CNKI（1994~2006）、VIP（1989~2006），同時篩檢了納入文獻的參考文獻。收集有關不同部位和途徑注射膠原酶治療腰椎間盤突出癥的隨機和半隨機對照試驗，由兩名評價員獨立評價文獻質量。結果 共納入8個研究，1 035例患者。由于納入研究間存在異質性，未能進行合并分析。其中，4個研究為比較盤內﹑盤外及盤內外注射，結果顯示膠原酶盤內、盤外和盤內外注射的近、遠期有效率的差異均無統計學意義。另4個研究（436例）為盤外法注射中各間隙比較，其中1個研究結果（100例）顯示，前間隙與側間隙注射膠原酶均優于后間隙注射；其余研究（納入病例數均小于50例）顯示，三個間隙注射療效相似（P值均大于0.05)。 結論 目前尚無證據證明不同部位注射膠原酶治療腰椎間盤突出癥的效果有何差異，但不同間隙注射的研究顯示注射到前間隙與側間隙均優于后間隙。由于每種注射部位和途徑納入的研究數少，質量不高，且診斷標準、隨訪時間、結果測量指標和判效標準等均不一致，因此需要開展大樣本、多中心、方法科學、規范的高質量隨機對照試驗進一步驗證。
目的探討體外轉染人IGF-1（human IGF-1，hIGF-1）基因腺病毒載體（Ad-hIGF-1）對TNF-α誘導的兔椎間盤髓核細胞凋亡的影響。 方法取8只健康成年家兔（雌雄不限，體重2.0～2.5 kg）椎間盤髓核，以Ⅱ型膠原酶消化法分離培養髓核細胞。取第2代對數生長期髓核細胞，根據培養條件不同分為3組。空白組：以含10%PBS的DMEM/F12培養基培養；TNF-α組：在空白組培養基中加入100 ng/mL TNF-α；Ad-hIGF-1組：在TNF-α組培養基中加入感染復數為50的Ad-hIGF-1。熒光顯微鏡下觀察Ad-hIGF-1組病毒轉染情況。各組培養48 h后，行RT-PCR及Western blot檢測hIGF-1 mRNA和蛋白表達，TUNEL法及流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。 結果熒光顯微鏡下觀察示，Ad-hIGF-1組細胞發出綠色熒光，提示轉染成功。RT-PCR及Western blot檢測示，Ad-hIGF-1組可見hIGF-1 mRNA及蛋白表達條帶，而空白組和TNF-α組均未見。TUNEL法檢測示，TNF-α組、Ad-hIGF-1組及空白組細胞凋亡率分別為34.24% ± 4.60%、6.59% ± 1.03%、0.40% ± 0.15%；流式細胞儀檢測示，TNF-α組、Ad-hIGF-1組、空白組早期凋亡率分別為22.16% ± 2.69%、5.03% ± 0.96%、0.49% ± 0.05%，晚期凋亡率分別為13.96% ± 4.86%、10.68% ± 3.42%、0.29% ± 0.06%；以上檢測指標TNF-α組均顯著高于空白組、Ad-hIGF-1組（P lt; 0.05），Ad-hIGF-1組高于空白組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論hIGF-1基因對TNF-α體外誘導的兔髓核細胞凋亡有抑制作用。
目的研究體外單層培養與藻酸鹽微球立體培養對人正常髓核細胞分化的影響，并探討白藜蘆醇（resveratrol，RES）恢復藻酸鹽微球立體培養下去分化髓核細胞表型的調節機制。 方法取6例腰椎爆裂骨折患者自愿捐贈的正常髓核組織分離培養髓核細胞，并行細胞鑒定；取單層培養的第1、3、5、7代髓核細胞分別行形態學觀察、β-半乳糖苷酶（senescence-associated β-galactosidase，SA-β-gal）染色觀察細胞衰老情況及甲苯胺藍染色觀察蛋白多糖表達。分別取單層培養和藻酸鹽微球立體培養的第1代髓核細胞檢測細胞增殖情況。取立體培養1周的第7代髓核細胞隨機分為立體培養空白組（A組）、RES組（B組）、沉默交配型信息調節因子2同源蛋白1（silent mating type information regulation 2 homolog 1，SIRT1）-小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）+ RES組（C組）、陰性對照-siRNA+RES組（D組），另設置髓核細胞單層培養空白組（E組），行相應培養后采用Western blot檢測SIRT1、聚蛋白多糖（Aggrecan）和Ⅱ型膠原蛋白表達，實時熒光定量PCR檢測SIRT1 mRNA表達水平。 結果細胞鑒定提示培養細胞為髓核細胞。形態學觀察及SA-β-gal、甲苯胺藍染色示，在體外連續單層培養條件下，正常髓核細胞易發生去分化，且隨著傳代次數增加趨勢愈明顯。藻酸鹽微球立體培養48 h內髓核細胞增殖顯著低于單層培養（P lt; 0.05），但能顯著提高去分化髓核細胞SIRT1、Ⅱ型膠原與Aggrecan蛋白的表達，E組與A組比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）；與A組相比，B組3種蛋白表達顯著提高（P lt; 0.05）。C組SIRT1 mRNA和蛋白表達均受明顯抑制，顯著低于B、D組（P lt; 0.05），Ⅱ型膠原與Aggrecan蛋白表達也顯著低于B、D組（P lt; 0.05）。 結論連續體外單層培養條件下，髓核細胞增殖速度較快，但在培養過程中易發生去分化現象；而在藻酸鹽微球立體培養條件下，RES可以恢復去分化髓核細胞表型，合成更多細胞外基質，這一機制與SIRT1的調節有關。
目的 用脫細胞脫鈣骨基質和脫細胞髓核基質構建新型一體化纖維環-髓核雙相支架，并進行理化檢測，探討其作為組織工程椎間盤支架的可行性。 方法 取豬股骨近端松質骨，塑形成外徑10 mm、內徑5 mm、厚3 mm的骨環，經脫脂、脫鈣、脫細胞處理制備成纖維環相支架；取豬尾髓核組織，Triton X-100和脫氧膽酸聯合脫細胞后粉碎、離心，制備脫細胞髓核基質；將制備的脫細胞髓核基質注入纖維環相支架中央，冷凍干燥，聯合應用紫外照射和碳化二亞胺進行交聯，制備一體化纖維環-髓核雙相支架。通過大體觀察、HE染色、掃描電鏡觀察支架結構；測定支架的孔隙率、吸水率、壓縮彈性模量；MTT法檢測25%、50%、100%支架浸提液對新西蘭大白兔脂肪來源干細胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）增殖的影響；將ADSCs接種到支架上，活/死細胞染色觀察細胞在支架上的活性。 結果 大體觀察支架呈乳白色；HE染色可見支架均質紅染，無細胞成分殘留；掃描電鏡可見外層纖維環相支架孔徑大小均勻一致，孔隙相互貫通，中央脫細胞髓核基質微絲相互連接，形成均勻網狀結構，交界處連接緊密。纖維環相支架孔徑為（343.00± 88.25）μm，一體化纖維環-髓核雙相支架孔隙率為82.98% ± 7.02%、吸水率為621.53% ± 53.31%，壓縮彈性模量為（89.07± 8.73）kPa。經MTT測定支架浸提液對ADSCs增殖無影響；活/死細胞染色可見細胞在支架上生長良好，無死細胞。 結論 用脫細胞脫鈣骨基質和脫細胞髓核基質構建的一體化纖維環-髓核雙相支架具有合適的孔徑和孔隙率且無毒，力學性能與人正常椎間盤接近，是構建組織工程椎間盤的理想支架載體。
【摘 要】 目的 通過營養剝奪模擬體內髓核細胞退變微環境，檢測Bcl-2/ 腺病毒干擾蛋白3（Bcl-2/adenovirusE1B 19-kDa-interacting protein 3，BNIP3）表達及線粒體轉位情況，為進一步探索髓核細胞退變死亡機制提供實驗依據。 方法 成年清潔級SD 大鼠2 只，雌雄不限，體重150 ～ 200 g。體外分離獲取鼠尾椎間盤髓核細胞，將傳代后細胞分別置入正常環境（對照組：L-DMEM 培養基、10%FBS、21%O2）和營養剝奪環境（實驗組：DMEM 無糖無血清培養基、 1% O2）培養24、48、72 h 后，實時熒光定量PCR、細胞免疫熒光染色及Western blot 檢測BNIP3 基因及蛋白表達，流式細胞儀檢測凋亡率及線粒體膜電位。 結果 實時熒光定量PCR、細胞免疫熒光染色及Western blot 檢測顯示對照組細胞低表達BNIP3；實驗組隨培養時間延長，BNIP3 表達呈上升趨勢，且BNIP3 與線粒體相結合；除培養后24 h 實驗組BNIP3 基因表達與對照組比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）外，其余各時間點實驗組BNIP3 基因及蛋白表達與對照組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。流式細胞儀檢測顯示，對照組細胞凋亡率較低，且細胞保持較高的線粒體膜電位；而實驗組隨培養時間延長細胞凋亡率增加、線粒體膜電位降低，與對照組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 營養剝奪可能通過誘導BNIP3 表達增加并結合線粒體導致線粒體功能障礙，最終導致髓核細胞死亡。
目的 探討在非接觸性共培養環境下，BMSCs定向分化為類髓核細胞在共培養時間上的差異性，尋找適合體內移植的最佳時間。 方法取6只8周齡健康新西蘭大白兔（體重1.5～2.0 kg）骨髓及椎間盤髓核，分離、培養BMSCs和髓核細胞并進行免疫細胞化學鑒定。取原代髓核細胞和第2代生長良好的BMSCs體外建立非接觸性共培養模型。觀察共培養后第1、3、5代BMSCs的形態學變化并繪制生長曲線；RT-PCR檢測共培養5、10、15 d BMSCsⅡ型膠原和蛋白聚糖mRNA表達；Western blot檢測共培養5、10、15、20、25、30 d BMSCs Ⅱ型膠原和蛋白聚糖蛋白的表達。 結果BMSCs相對特異性標記物CD44、CD90表達陽性，造血細胞表面標記物CD34、CD45表達陰性。髓核細胞Ⅱ型膠原、蛋白聚糖表達陽性。共培養后2周BMSCs形態發生明顯變化，呈多角形、不規則形；共培養后3代內，BMSCs生長速度無明顯差異，隨著傳代次數增加，細胞增殖明顯減慢。RT-PCR檢測示共培養后10、15 d BMSCs蛋白聚糖和Ⅱ型膠原mRNA表達明顯高于5 d時（P lt; 0.05），而10 d與15 d時差異無統計學意義（P gt; 0.05）。Western blot檢測示共培養后隨時間延長細胞表達Ⅱ型膠原和蛋白聚糖蛋白逐漸增加，5、10、15 d間差異有統計學意義（P lt; 0.05），15 d后各時間點間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。 結論在非接觸性共培養環境下，BMSCs在髓核細胞誘導下可向類髓核細胞分化，表達Ⅱ型膠原和蛋白聚糖，在共培養15 d時達到相對穩定，此時較適合進行體內移植。
目的 探討TGF-β3 基因修飾后退變髓核細胞生物學效應以及植入兔退變椎間盤后對退變椎間盤的影響。 方法 將重組腺病毒載體Ad-TGF-β3 與第2 代退變髓核細胞按10 ∶ 1 比例混合培養轉染（Ad-TGF-β3 組），待細胞融合后傳代，MTT 檢測轉染細胞增殖活性，Western blot 檢測TGF-β3 蛋白含量，免疫細胞化學染色觀察對數生長期轉染細胞Ⅱ型膠原染色陽性率；采用病毒空載體轉染髓核細胞（Adv 組）和未經轉染髓核細胞（空白組）作為對照。取30 只新西蘭兔，體重3.2 ～ 3.5 kg，雌雄不限，通過針刺L3、4、L4、5 和L5、6 椎間盤制備椎間盤退變模型。將實驗動物按照隨機數字法分為3 組，轉染細胞組（A 組，n=12）、退變細胞組（B 組，n=12）和空白對照組（C 組，n=6）。A、B 組將100 μL 濃度為1 × 105 個/mL 對應細胞懸液注射入退變椎間盤，C 組同法注入等量PBS。注射后6、10、14 周取A、B 組各4 只、C 組2 只實驗動物處死，取L3、4、L4、5 和L5、6 椎間盤行組織學觀察，RT-PCR 檢測Ⅱ型膠原和蛋白多糖mRNA 表達。 結果 Ad-TGF-β3轉染后髓核細胞活性明顯改善；轉染后3、7、14 d，TGF-β3在髓核細胞內表達逐漸升高；Ad-TGF-β3 組髓核細胞細胞質內見棕黃色Ⅱ型膠原陽性染色，陽性率顯著高于Adv 組及空白組（P lt; 0.05）。組織學觀察示，A 組椎間盤退變程度較B、C組明顯減輕。6、10、14 周A組Ⅱ型膠原和蛋白多糖mRNA表達顯著高于B、C組，差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 TGF-β3 基因修飾退變髓核細胞后可明顯改善細胞生物活性，轉染后髓核細胞植入兔體內可明顯增加退變椎間盤的基質分泌。
目的 髓核細胞衰老凋亡是椎間盤退行性變的病理基礎，探討髓核細胞表型分子及延緩髓核細胞衰老退變的機制。 方法 原代培養8 ～ 10 周齡雄性SD 大鼠髓核細胞，免疫細胞化學染色鑒定髓核細胞表型分子低氧誘導因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）、HIF-1β、基質金屬蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2，MMP-2）及Ⅱ型膠原表達。小干擾RNA（small interference RNA，siRNA）瞬時轉染髓核細胞沉默p53、p21 后行RT-PCR 及Western blot檢測沉默效率，siRNA 轉染前后細胞衰老相關β 半乳糖苷酶（senescence associated-β-galactosidase，SA-β-gal）染色檢測髓核細胞衰老變化，流式細胞儀檢測髓核細胞周期變化，MTT 法生長曲線分析髓核細胞增殖變化。 結果 免疫細胞化學染色顯示髓核細胞表達HIF-1α、HIF-1β、MMP-2 及Ⅱ型膠原。第35 代髓核細胞轉染p53、p21 siRNA 后RT-PCR 及Western blot 檢測示p53、p21 表達明顯受到抑制。第35 代髓核細胞SA-β-gal 染色陽性率明顯高于第1 代髓核細胞（P lt; 0.001）；正常第35 代髓核細胞經p53 siRNA（p53 轉染組）和p21 siRNA（p21 轉染組）轉染后，SA-β-gal 陽性率明顯低于正常第35 代髓核細胞（正常組）和加入脂質體LipofectaminTM 2000 而無siRNA 的第35 代髓核細胞（陰性對照組），差異有統計學意義（P lt; 0.001）。細胞周期分析顯示，p53 轉染組及p21 轉染組G1 期百分比均明顯低于正常組和陰性對照組（P lt; 0.05），S 期百分比明顯高于正常組和陰性對照組（P lt; 0.05）。MTT 生長曲線顯示轉染p53、p21 siRNA 后可促進髓核細胞增殖。 結論 沉默p53、p21 基因可通過調節細胞周期而抑制髓核細胞衰老退變，改善椎間盤退變過程；沉默p53、p21基因可能是潛在的治療椎間盤退行性變的方法。
目的 評價髓核摘除聯合Isobar 非融合內固定治療腰椎間盤突出癥的近期療效。 方法 2006 年5 月－ 2008 年5 月，對65 例單間隙腰椎間盤突出癥患者分別采用髓核摘除聯合Isobar 非融合內固定（A 組，34 例）和單獨髓核摘除（B 組，31 例）治療。A 組男18 例，女16 例；年齡23 ～ 51 歲，平均38.8 歲。責任節段：L2、3 1 例，L3、4 4 例，L4、 5 20 例，L5、S1 9 例。分型：突出型11 例，脫出型16 例，游離型7 例。病程1 ～ 66 個月，平均7.2 個月。B 組男19 例，女12 例；年齡21 ～ 49 歲，平均39.2 歲。責任節段：L3、4 2 例，L4、5 24 例，L5、S1 5 例。分型：突出型13 例，脫出型15 例，游離型3 例。病程3 周～ 72 個月，平均6.5 個月。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義（P gt; 0.05），有可比性。手術前后采用疼痛視覺模擬評分（VAS）及Oswestry 功能障礙指數（ODI）進行比較評價，并動態觀察術后責任椎間隙高度變化情況。 結 果 兩組患者均獲隨訪，隨訪時間24 ～ 49 個月，平均32 個月。術后A、B 組患者腰、腿痛癥狀均明顯改善，B 組1 例發生術后腦脊液漏，經處理后治愈。隨訪期間兩組均無內固定物松動、斷裂等并發癥發生。A、B 組術后3 周、3、6 個月和1、2 年腰、腿痛VAS 均較術前顯著改善（P lt; 0.05）；術后1、2 年，A、B 組間腰痛VAS 比較差異有統計學意義（P lt; 0.05），其余各時間點腰痛VAS 及手術前后各時間點腿痛VAS A、B 組間比較差異均無統計學意義（P gt; 0.05）。術后2 年兩組ODI 與術前比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05），但A、B 組間比較差異無統計學意義（P gt; 0.05）。術后各時間點A組責任椎間隙高度均較術前增加（P lt; 0.05）；B組較術前下降，術后3 周及3 個月與術前比較差異無統計學意義（P gt; 0.05），術后6 個月、1 年及2 年與術前比較差異有統計學意義（P lt; 0.05）。A、B 組間術后各時間點責任椎間隙高度比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。 結論 髓核摘除聯合Isobar 非融合內固定治療節段隙腰椎間盤突出癥的近期療效滿意，患者術后腰痛緩解程度較單獨髓核摘除術更明顯，可能與其能維持術后責任椎間隙高度有關。
目的 評價Quadrant 通道下微創治療復發性腰椎間盤突出癥的療效。 方法 2008 年7 月－ 2010年3 月，對18 例復發性腰椎間盤突出癥患者采用Quadrant 通道下椎間盤突出髓核摘除術治療。其中男13 例，女5 例；年齡35 ～ 67 歲，平均43 歲。手術節段：L4、5 6 例，L5、S1 12 例。首次手術至復發時間為12 ～ 120 個月，平均42.8 個月。患者均行X 線片、CT 及MRI 檢查確診原椎間盤再次突出。末次隨訪時采用疼痛視覺模擬評分（VAS）和改良MacNab 標準評定患者癥狀改善情況。 結果 手術時間40 ～ 80 min，平均60 min；術中出血量80 ～ 120 mL，平均100 mL。手術切口均Ⅰ期愈合；術中2 例發生腦脊液漏，未行修補，術后3 d 拔除引流片后切口愈合。術后無椎間隙感染、神經損傷、定位錯誤等并發癥發生。18 例均獲隨訪，隨訪時間12 ～ 30 個月，平均22 個月。末次隨訪時按改良MacNab 標準評價療效，獲優12 例，良6 例。末次隨訪時，腿痛VAS 評分由術前的（7.3 ± 2.2）分降至（2.0 ± 1.3）分，差異有統計學意義（t=11.08，P=0.00）。隨訪期間無復發。 結論 Quadrant 通道下椎間盤突出髓核摘除術具有創傷小、并發癥少等優點，是治療復發性腰椎間盤突出癥的一種安全有效的微創手術方法。