非小細胞肺癌對表皮生長因子受體-酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKIs）的耐藥問題已成為研究的熱點。最近研究發現EGFR和COX-2信號通路之間存在著復雜的相互聯系和作用，抑制COX-2信號通路能否提高EGFR-TKIs的治療效果成為目前的熱點。本文以此為基礎，全面介紹聯合抑制COX-2與EGFR信號通路在晚期非小細胞肺癌治療中應用的研究進展。
目的 通過特異性微小干擾RNA( siRNA) 靶向抑制小鼠骨髓來源樹突狀細胞( DC) 的酪氨酸蛋白激酶( Syk) 的基因表達, 阻斷樹突狀細胞的成熟, 從而阻斷Syk 所介導的細胞內及細胞間的信號傳導通路, 研究Syk 與DC 之間的關系。方法 化學法合成21 ～23 bp 的小鼠樹突狀細胞Syk 基因siRNA 片段A、B、C、D, 用Lipofectamine 2000 作為轉染試劑, 將siRNA 片段轉染哮喘小鼠骨髓來源DC, 作用48 h 后再與正常小鼠脾臟來源T淋巴細胞混合反應48 h, 之后用ELISA 法檢測T 淋巴細胞分泌細胞因子( IL-4、IL-13、IL-2 和INF-γ) 的水平。用Western Blot 檢測DC 表達Syk 蛋白的量, 判斷Syk 基因是否被沉默, 剔除無效片段。結果 siRNA 片段A、C、D 干擾組小鼠DC 細胞Syk 蛋白表達減少; B組沒有明顯變化, 為無效片段。siRNA 干擾組IL-4、IL-13 的水平較未干擾組明顯下降( P 均lt;0. 05) , IL-2 和INF-γ水平無顯著差異( P gt;0. 05) 。結論 特異性SiRNA 能夠有效抑制Syk 基因表達, 可阻遏DC 的抗原遞呈作用以及活化、分化T 淋巴細胞的功能
目的 探討酶切富集PCR 法檢測非小細胞肺癌( NSCLC) 患者胸腔積液表皮生長因子受體基因( EGFR) 外顯子19 缺失和外顯子21 L858R 突變的臨床意義。方法 采用EGFR 基因突變酶切富集及非酶切富集PCR 法對30 例NSCLC 患者胸腔積液游離核酸EGFR 基因外顯子19 缺失和外顯子21 L858R 突變進行分析。結果 30 例NSCLC 患者中, 酶切富集PCR 法分別檢出EGFR 基因外顯子19 缺失10 例( 33. 3% ) 和外顯子21 L858R 突變5 例( 1. 7% ) , 非酶切富集PCR 法則僅能分別檢出6 例( 20. 0%) 和1 例( 3. 3% ) ; 兩種方法檢出率差異有統計學意義( P = 0. 032) 。在接受吉非替尼治療的4 例患者中, 2 例檢出EGFR 基因突變患者治療后腫瘤均部分緩解。結論 酶切富集PCR 法可以高效、經濟、準確地檢測NSCLC 患者胸腔積液游離核酸EGFR 基因突變, 可能成為臨床NSCLC 患者選擇EGFR 酪氨酸激酶抑制劑治療的預測方法。
目的 比較兩種表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑( EGFR-TKI) 吉非替尼與厄羅替尼對博萊霉素致小鼠肺纖維化的干預作用。方法 40 只雌性BALB/ c 小鼠分為對照組( NS 組) 、博萊霉素纖維化組( BLM組) 、吉非替尼組( GE 組) 和厄羅替尼組( ER 組) 。實驗第1 d, BLM組、GE 組和ER 組小鼠經氣管滴入博萊霉素致肺纖維化, NS 組氣管內滴入生理鹽水; 同時, GE 組及ER 組分別口服吉非替尼( 20 mg·kg- 1·d - 1 ) 和厄羅替尼( 25 mg·kg- 1· d- 1 ) , 余兩組口服生理鹽水。持續給藥2 周后殺鼠取肺, 左肺石蠟包埋切片行HE 染色與Masson 染色, 免疫組化檢測總EGFR 及磷酸化EGFR; 右肺勻漿檢測羥脯氨酸含量。結果 吉非替尼與厄羅替尼均能明顯減輕博萊霉素引起的肺結構破壞、膠原沉積, 降低磷酸化EGFR 表達及纖維化小鼠肺羥脯氨酸含量( P lt;0. 05) , 兩者的上述作用無明顯差異( P gt;0. 05) 。結論 EGFR-TKI 通過抑制EGFR 磷酸化, 有效減輕博萊霉素誘導的肺纖維化形成, 為肺纖維化的靶向治療提供了新思路。
目的觀察鈣依賴性酪氨酸激酶2（Pyk2）在風濕性心臟病患者中的表達，與心肌纖維化指標的關系及臨床意義。方法30例風濕性心臟病患者心肌組織（實驗組）和6例正常心肌標本（對照組）行Masson染色測定心肌藍色膠原灰度值，采用放射免疫法檢測血清透明質酸（HA）、層粘連蛋白（LN）和Ⅳ型膠原（IV—C）含量，并通過免疫組織化學法和逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT—PCR）法觀察Pyk2蛋白和信使核糖核酸（mRNA）的表達，以及Pyk2表達與心肌纖維化指標的相關性。結果實驗組血清HA，LN和IV-C均較對照組高（174．95±76．14vg／K vs．70．06±15．63μg／L，153．86±20．72μg／L vs．90．01±14．11μg／L，95．26±7．66μg／L vs．63．21±10．62μg／L；P=0．003，0．013，0．035）。實驗組Pyk2蛋白吸光度和Pyk2 mRNA／磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）明顯高于對照組（0．325±0．032VS．0．106±0．013，0．870±0．085VS．0．573±0．042；P=0．048，0．006）。心肌Pyk2蛋白表達與心肌纖維化指標HA、LN和IV—C含量呈明顯正相關（r=0．611，0．743，0．829，P〈0．01），心肌Pyk2 mRNA表達與LN，IV—C含量呈正相關（r=0．794，0．766，P〈0．05）。結論Pyk2可能通過增加風濕性心臟病心肌膠原合成在風濕性心臟病心肌間質纖維化的發生、發展進程中發揮重要作用。
目的 觀察ephrin A家族的基因是否參與氧誘導的小鼠視網膜新生血管（RNV）形成。方法 利用氧誘導新生小鼠C57BL/6J制備氧誘RNV模型，用逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCT）檢測ephrin A1～A5在模型組小鼠視網膜和同齡正常小鼠（對照組）視網膜中的表達。結果 ephrin A1~A5 mRNA均在正常視網膜發育的某一階段或者發育的全程表達。在模型組小鼠視網膜中，ephrin A1 mRNA的表達量相對于對照組小鼠明顯上調（t=3.19, P=0.019）；ephrin A2 mRNA的表達量在15日齡的模型組小鼠中相對于對照組小鼠顯著上調（t=3.71, P=0.033）；ephrin A3～A5 mRNA在12、13日齡的模型組小鼠視網膜中相對于對照組小鼠表達下調或者缺失，而在15日齡的模型組小鼠視網膜相對于對照組小鼠視網膜顯著上調（t=3.785, P=0.002）。結論 ephrin A家族的基因參與視網膜的發育和視網膜病理性血管生成等重要的生理和病理過程。
蛋白酪氨酸激酶介導的信號傳導通路是目前研究較多且效果明顯的抗腫瘤藥物靶點，多靶點酪氨酸激酶抑制劑能夠抑制多個信號傳導通路，誘導腫瘤細胞的凋亡，阻斷新生血管的生成，抑制腫瘤細胞的增殖，是近幾年上市的主要抗腫瘤藥物。現對多靶點酪氨酸激酶抑制劑的臨床應用、注意事項及目前研究進展進行綜述。
目的 構建轉谷氨酰胺酶2 （TG2）和Mer受體酪氨酸激酶（Mertk）基因共沉默腺病毒干擾載體，并檢測其基因沉默作用。方法 首先構建能干擾TG2和Mertk蛋白表達的質粒載體pSUPER/TG2及pSUPER/Mertk，再將其干擾序列和H1啟動子序列切下并連接到pAdTrack上，構建成pAdTrack/TG2/Mertk載體。將其轉入含有pAdEasy-1的BJ5183感受態細菌中，回收并酶切鑒定重組腺病毒載體。將陽性腺病毒載體感染HEK293細胞，收集病毒，反復擴增后測定病毒滴度。分別以pAdTrack/TG2/Mertk、pAdTrack/TG2、pAdTrack/Mertk及pAdTrack/綠色熒光蛋白（GFP）感染RAW264.7細胞，采用免疫印跡法檢測其TG2蛋白和Mertk蛋白的表達水平。結果 pAdTrack/TG2/Mertk載體的病毒滴度為6.13×1010GFU/mL。經酶切鑒定，pAdTrack/TG2/Mertk含有插入的2個啟動子和2個干擾序列，載體構建成功。pAdTrack/TG2和pAdTrack/TG2/Mertk組TG2蛋白的表達水平比較差異無統計學意義（P＞0.05），但均低于pAdTrack/GFP和pAdTrack/Mertk組（P＜0.01），后兩者比較差異無統計學意義（P＞0.05）。pAdTrack/Mertk和pAdTrack/TG2/Mertk組Mertk蛋白的表達水平比較差異無統計學意義（P＞0.05），但均低于pAdTrack/GFP和pAdTrack/TG2組（P＜0.01），后兩者比較差異無統計學意義（P＞0.05）。結論 TG2和Mertk基因共沉默腺病毒干擾載體pAdTrack/TG2/Mertk構建成功，其能顯著降低小鼠巨噬細胞樣RAW246.7細胞中TG2蛋白和Mertk蛋白的表達水平。