TG2和Mertk基因共沉默腺病毒干擾載體的構建及其基因沉默作用△_《中國普外基礎與臨床雜志》

作者：

 鄭江華 ¹ , 陳競 ² , 陳開 ¹ , 朱彥彬 ¹ , 武國 ¹

1.川北醫學院附屬醫院血管外科（四川南充 637000）;;
2.川北醫學院生化研究室（四川南充 637000）;

關鍵詞：

轉谷氨酰胺酶2 Mer受體酪氨酸激酶 RNA干擾腺病毒 RAW264.7細胞

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目的　構建轉谷氨酰胺酶2 （TG2）和Mer受體酪氨酸激酶（Mertk）基因共沉默腺病毒干擾載體，并檢測其基因沉默作用。
方法　首先構建能干擾TG2和Mertk蛋白表達的質粒載體pSUPER/TG2及pSUPER/Mertk，再將其干擾序列和H1啟動子序列切下并連接到pAdTrack上，構建成pAdTrack/TG2/Mertk載體。將其轉入含有pAdEasy-1的BJ5183感受態細菌中，回收并酶切鑒定重組腺病毒載體。將陽性腺病毒載體感染HEK293細胞，收集病毒，反復擴增后測定病毒滴度。分別以pAdTrack/TG2/Mertk、pAdTrack/TG2、pAdTrack/Mertk及pAdTrack/綠色熒光蛋白（GFP）感染RAW264.7細胞，采用免疫印跡法檢測其TG2蛋白和Mertk蛋白的表達水平。
結果　pAdTrack/TG2/Mertk載體的病毒滴度為6.13×1010GFU/mL。經酶切鑒定，pAdTrack/TG2/Mertk含有插入的2個啟動子和2個干擾序列，載體構建成功。pAdTrack/TG2和pAdTrack/TG2/Mertk組TG2蛋白的表達水平比較差異無統計學意義（P＞0.05），但均低于pAdTrack/GFP和pAdTrack/Mertk組（P＜0.01），后兩者比較差異無統計學意義（P＞0.05）。pAdTrack/Mertk和pAdTrack/TG2/Mertk組Mertk蛋白的表達水平比較差異無統計學意義（P＞0.05），但均低于pAdTrack/GFP和pAdTrack/TG2組（P＜0.01），后兩者比較差異無統計學意義（P＞0.05）。
結論　TG2和Mertk基因共沉默腺病毒干擾載體pAdTrack/TG2/Mertk構建成功，其能顯著降低小鼠巨噬細胞樣RAW246.7細胞中TG2蛋白和Mertk蛋白的表達水平。

引用本文： 鄭江華,陳競,陳開,朱彥彬,武國. TG2和Mertk基因共沉默腺病毒干擾載體的構建及其基因沉默作用△. 中國普外基礎與臨床雜志, 2013, 20(4): 395-399. doi: 復制

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