目的探討大鼠纖維化肝組織勻漿上清液對人臍帶間充質干細胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，HUCMSCs）向肝細胞分化的誘導作用。 方法取健康SD大鼠（體重180～220 g），采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理鹽水溶液（200 mg/kg，2次/周，共4周）方法制備大鼠肝纖維化模型，取造模成功的纖維化肝組織用于制備肝纖維化誘導培養基。取第3代HUCMSCs進行分組培養7 d，對照組以含10% FBS的DMEM/F12培養基培養，實驗組以含10% FBS及50 g/L肝纖維化誘導培養基上清的DMEM/F12培養基培養。倒置顯微鏡下觀察兩組細胞形態學變化；取培養7 d的對照組及實驗組細胞，采用Western blot法檢測甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）、細胞角蛋白18（cytokeratin 18，CK18）、CYP3A4表達情況，采用糖原過碘酸-雪夫（periodic acid-schiff，PAS）染色檢測細胞儲存糖原的能力，分別采用二乙酰肟比色法及ELISA法測定兩組細胞培養液中尿素（blood urea nitrogen，BUN）和白蛋白（albumin，ALB）的含量。 結果與對照組長梭形細胞相比，實驗組細胞于誘導1 d時即可見到細胞兩極回縮，胞體變短；誘導7 d時，細胞呈不規則形或類圓形，胞體豐滿。Western blot檢測示，對照組細胞未見AFP、CK18、CYP3A4表達；實驗組細胞可表達肝細胞特異性標志物AFP、CK18及與代謝功能相關的重要蛋白CYP3A4。對照組上清液中BUN、ALB濃度分別為（0.43±0.07）mmol/L和（8.08±0.41）μg/mL，實驗組分別為（2.52±0.20）mmol/L和（41.48±4.11）μg/mL，比較差異均有統計學意義（t=24.160，P=0.000；t=19.810，P=0.000）。PAS染色示，對照組HUCMSCs細胞核呈深藍色，細胞質呈淡紫色；實驗組細胞整個胞體被染成深紫色，細胞核可見。 結論大鼠纖維化肝組織勻漿上清液可快速誘導HUCMSCs向肝細胞分化，形成的肝樣細胞不僅具備肝細胞表面標志物，同時有肝藥酶的表達，并具有儲存糖原、合成BUN及分泌ALB的能力，可部分替代肝細胞功能，這可能是干細胞移植改善肝功能的機制之一。
目的 探討肝纖維化大鼠血液微環境對人臍帶MSCs（human umbilical cord MSCs，HUCMSCs）向肝細胞分化的影響及作用機制。 方法 取成年清潔級雄性SD大鼠18只，體質量（200±20）g；其中12只采用腹腔注射硫代乙酰胺方法制備肝纖維化模型，組織學觀察確定模型制備成功后取大鼠全血分離血清；剩余6只正常大鼠同法分離血清。ELISA法檢測血清中EGF、bFGF、肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、抑瘤素（oncostatin M，OSM）含量。取第3代HUCMSCs分組培養7 d，其中肝纖維化血清組（A組）、正常血清組（B組）分別以含5 mL/L肝纖維化大鼠血清、正常大鼠血清的DMEM/F12培養基（含10%FBS）培養；對照組（C組）以DMEM/F12培養基（含10%FBS）培養。培養期間采用倒置顯微鏡觀察細胞形態變化；7 d后取各組細胞行免疫熒光檢測肝細胞表面標志物甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）、細胞角蛋白18（cytokeratin 18，CK18）表達，Western blot檢測肝細胞功能蛋白白蛋白（albumin，ALB）、色氨酸2，3-雙加氧酶（tryptophan 2，3-dioxygenase，TPH2）、CYP3A4及MAPK/ERK信號通路蛋白（P-ERK）表達，二乙酰肟法測定細胞上清液中尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）含量。 結果 組織學觀察示大鼠肝組織符合纖維化改變，模型制備成功。正常大鼠血清中EGF、OSM含量均高于纖維化大鼠，差異有統計學意義（t=14.989，P=0.000；t=37.172，P=0.000）；肝纖維化大鼠血清中HGF含量為（1.03±0.12）ng/mL，正常大鼠血清中未檢出；兩種血清中均未檢出bFGF。誘導培養后，倒置顯微鏡下觀察各組細胞形態均未見明顯變化且組間無明顯差異。培養7 d時，A組細胞可見AFP、CK18綠色熒光，B、C組染色均為陰性。Western blot檢測示A組細胞可表達肝細胞功能蛋白ALB、TPH2及CYP3A4，B、C組均未見上述蛋白表達。各組細胞均可表達P-ERK，其中A組P-ERK蛋白相對表達量顯著高于B、C組（P < 0.05）；B、C組間比較差異無統計學意義（P > 0.05）。A組細胞上清液中BUN含量亦顯著高于B、C組（P < 0.05），B、C組間比較差異無統計學意義（P > 0.05）。 結論 在肝纖維化條件下，大鼠血液中的HGF水平升高、EGF、OSM水平降低，形成的血液微環境會激活HUCMSCs的MAPK/ERK信號通路，使其向肝細胞分化。