目的 研究嗅鞘細胞（olfactory ensheathing cells，OECs）培養液對正常及損傷脊髓神經元的影響，進一步探討OECs 促進及保護脊髓神經元的作用機制。 方法 取成年SD 大鼠OECs 制備OECs 培養液（OEC culturemedium，OECCM），倒置相差顯微鏡觀察細胞形態，行兔抗大鼠低親和力神經生長因子受體p75 抗體（nerve growth factorreceptor p75，NGFR p75）細胞免疫組織化學染色觀察及純度計算。取孕15 ～ 17 d SD 大鼠制備脊髓神經元，并以H2O2 制備損傷模型。觀察OECCM 對正常胚胎SD 大鼠脊髓神經元生長發育的影響實驗分為對照組（A 組）和實驗組（B 組）， OECCM 對H2O2 致脊髓神經元損傷模型的影響實驗也分為對照組（C 組）和實驗組（D 組）。A、C 組每孔加200 μL 完全培養基，B、D 組每孔加100 μL OECCM 和100 μL 完全培養基。4 組細胞均作活性MTT 比色分析。 結果 OECs 培養6 ～ 9 d 后，細胞多呈雙極形或梭形；脊髓神經元胞體較大，多呈圓形，培養5 ～ 7 d 后，突起明顯生長，多為雙突起。NGFRp75 細胞免疫組織化學染色觀察示OECs 細胞膜棕色深染，胞體清晰，呈梭性或三角形；OECs 純度 gt; 90%。培養6 ～ 9 d 后，與A 組相比，B 組細胞生長旺盛，密度較高，胞體明顯增大。A 組胞體平均直徑、單個神經元突起數目及細胞突起長度分別為（33.38 ± 6.80）D/μm、（1.67 ± 0.80）個和（91.19 ± 62.64）L/μm，B 組分別為（37.39 ± 7.28）D/μm、（1.76 ± 0.82）個和（121.33 ± 81.13） L/μm，兩組比較差異均有統計學意義（P lt; 0.05）。A 組MTT 比色法所測吸光度（A）值為0.402 0 ±0.586 9，B 組為0.466 0 ± 0.479 0，兩組比較差異有統計學意義（P lt; 0.01）。損傷后2 h，C、D 組細胞數量明顯減少，存活的神經元胞體皺縮、胞膜不清楚，細胞突起明顯回縮或斷裂。C 組MTT 比色法所測A 值為0.149 0 ± 0.030 0，D 組為0.184 0 ±0.052 0，兩組比較差異有統計學意義（P lt; 0.01）。 結論 OECCM 可促進正常脊髓神經元生長，對損傷脊髓神經元有一定保護作用，OECs 分泌的促神經生長因子是OECs 發揮脊髓神經元保護作用的機制之一。
目的 椎間盤退行性變的生物學治療方法是骨科學研究熱點，尋找一種有效誘導BMSCs 向椎間盤細胞分化的方法成為應用細胞移植治療椎間盤退變的必要前提。探討重組質粒 pcDNA3.1IE-SOX9Flag 體外轉染誘導兔BMSCs 向類髓核細胞分化的影響。 方法 構建真核表達載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。取1 月齡新西蘭大白兔骨髓分離培養BMSCs，體外誘導BMSCs 向成骨細胞分化并鑒定；流式細胞儀檢測細胞表面標記。將第3 代BMSCs 隨機分為轉染組、陰性對照組和空白對照組。轉染組轉染pcDNA3.1IE-SOX9Flag 重組質粒，陰性對照組轉染質粒pcDNA3.1，空白對照組不轉染任何質粒。將構建好的重組質粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag 轉染第3 代BMSCs，72 h 后加入濃度為500 mg/L 的G418 篩選7 d 后，改為濃度200 mg/L 的G418 維持篩選壓力并培養轉染細胞。取各組BMSCs 采用RT-PCR 檢測SOX9和Ⅱ型膠原基因（Col2al）的mRNA 表達，Western blot 檢測SOX9 蛋白的表達，免疫組織化學染色觀察Ⅱ型膠原的表達。 結果 BMSCs 成骨誘導7 d 后ALP 染色呈陽性；CD44 表達陽性，CD34 和CD45 表達陰性。成功構建了真核表達載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。將重組質粒轉染兔BMSCs，72 h 后轉染效率為34.32% ± 1.75%；轉染2 周后BMSCs 形態改變，呈多角形或橢圓形，細胞體積增大，增殖速度減緩，與椎間盤髓核細胞生長特點十分接近。RT-PCR 鑒定發現轉染組細胞SOX9 mRNA 和Col2al mRNA 表達陽性，對照組均為陰性。Western blot 檢測發現轉染組SOX9 基因蛋白表達陽性，對照組未見表達。轉染組BMSCs 的Ⅱ型膠原免疫組織化學染色呈陽性。 結論 SOX9 基因真核表達載體成功轉染兔BMSCs，被轉染的干細胞向類髓核細胞分化，為進一步研究應用BMSCs 移植治療椎間盤退行性變奠定了理論基礎。
【摘 要】 目的 建立兔Perthes 病模型并探討Perthes 病程中股骨頭局部VEGF 表達的變化及意義。 方 法 3 月齡新西蘭大白兔24 只，體重1.6 ～ 1.8 kg。取16 只兔作為實驗組，手術切斷左側圓韌帶和股骨頭支持帶血供，建立兔Perthes 病模型；剩余8 只作為對照組，按照上述程序左側股骨頭進行手術，但不打開關節囊，保持股骨頭正常血供。于術后1、2、4、8 周分別處死動物，取出股骨頭，行大體觀察、X 線片、組織學、VEGF 免疫組織化學染色和VEGF mRNA 原位雜交觀察。 結果 實驗組動物模型均制備成功，術后5 d 感染1 例，退出實驗。大體觀察：對照組各時間點股骨頭未見壞死改變；實驗組股骨頭隨時間延長逐漸粗糙、失去光澤，變小，可見塌陷。X 線片觀察：術后1、2 周，兩組股骨頭無明顯差異；4、8 周，實驗組股骨頭較對照組密度增高。對照組各時間點HE 染色均未見股骨頭壞死及修復改變；實驗組術后4、8 周可見血管及肉芽組織侵入，新骨形成，參與修復。免疫組織化學：對照組股骨頭骺軟骨中，肥大區表現出較高的VEGF免疫反應性（VEGF immunoreactivity，VEGF-IR），而增殖區VEGF-IR 卻表現較低水平。術后1 周，實驗組股骨頭增殖區VEGF 陽性細胞率開始高于對照組，實驗組股骨頭肥大區VEGF 陽性細胞率明顯減少。術后8 周，實驗組股骨頭整個骺軟骨區均表現VEGF-IR，增殖區VEGF 陽性細胞率較對照組明顯增加；壞死股骨頭軟骨內骨化中心修復重建，肥大區VEGF陽性細胞率較正常接近。術后1、2、4、8 周，實驗組骺軟骨增殖區VEGF 陽性細胞率與對照組比較均有統計學意義（P lt;0.01） ；術后1、2、4 周，實驗組骺軟骨肥大區VEGF 陽性細胞率與對照組比較均有統計學意義（P lt; 0.01）。原位雜交觀察結果與免疫組織化學染色觀察相似。缺血性壞死后，實驗組肥大區VEGF mRNA 表達喪失，增殖區VEGF mRNA 表達升高。軟骨內骨化中心修復重建后，實驗組可見新形成的肥大區重新表達VEGF mRNA。 結論 VEGF 在壞死股骨頭骺軟骨促進血管發生、軟骨內骨化中心的修復重建方面起關鍵的調節作用。