目的 椎間盤退行性變的生物學治療方法是骨科學研究熱點，尋找一種有效誘導BMSCs 向椎間盤細胞分化的方法成為應用細胞移植治療椎間盤退變的必要前提。探討重組質粒 pcDNA3.1IE-SOX9Flag 體外轉染誘導兔BMSCs 向類髓核細胞分化的影響。 方法 構建真核表達載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。取1 月齡新西蘭大白兔骨髓分離培養BMSCs，體外誘導BMSCs 向成骨細胞分化并鑒定；流式細胞儀檢測細胞表面標記。將第3 代BMSCs 隨機分為轉染組、陰性對照組和空白對照組。轉染組轉染pcDNA3.1IE-SOX9Flag 重組質粒，陰性對照組轉染質粒pcDNA3.1，空白對照組不轉染任何質粒。將構建好的重組質粒pcDNA3.1IE-SOX9Flag 轉染第3 代BMSCs，72 h 后加入濃度為500 mg/L 的G418 篩選7 d 后，改為濃度200 mg/L 的G418 維持篩選壓力并培養轉染細胞。取各組BMSCs 采用RT-PCR 檢測SOX9和Ⅱ型膠原基因（Col2al）的mRNA 表達，Western blot 檢測SOX9 蛋白的表達，免疫組織化學染色觀察Ⅱ型膠原的表達。 結果 BMSCs 成骨誘導7 d 后ALP 染色呈陽性；CD44 表達陽性，CD34 和CD45 表達陰性。成功構建了真核表達載體pcDNA3.1IE-SOX9Flag。將重組質粒轉染兔BMSCs，72 h 后轉染效率為34.32% ± 1.75%；轉染2 周后BMSCs 形態改變，呈多角形或橢圓形，細胞體積增大，增殖速度減緩，與椎間盤髓核細胞生長特點十分接近。RT-PCR 鑒定發現轉染組細胞SOX9 mRNA 和Col2al mRNA 表達陽性，對照組均為陰性。Western blot 檢測發現轉染組SOX9 基因蛋白表達陽性，對照組未見表達。轉染組BMSCs 的Ⅱ型膠原免疫組織化學染色呈陽性。 結論 SOX9 基因真核表達載體成功轉染兔BMSCs，被轉染的干細胞向類髓核細胞分化，為進一步研究應用BMSCs 移植治療椎間盤退行性變奠定了理論基礎。
引用本文： 張琦,錢濟先,文艷華,裘秀春,馬保安,范清宇. SOX9 基因真核表達載體轉染誘導BMSCs分化為類髓核細胞. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(7): 811-816. doi: 復制