目的 研究嗅鞘細胞(olfactory ensheathing cells,OECs)培養液對正常及損傷脊髓神經元的影響,進一步探討OECs 促進及保護脊髓神經元的作用機制。 方法 取成年SD 大鼠OECs 制備OECs 培養液(OEC culturemedium,OECCM),倒置相差顯微鏡觀察細胞形態,行兔抗大鼠低親和力神經生長因子受體p75 抗體(nerve growth factorreceptor p75,NGFR p75)細胞免疫組織化學染色觀察及純度計算。取孕15 ~ 17 d SD 大鼠制備脊髓神經元,并以H2O2 制備損傷模型。觀察OECCM 對正常胚胎SD 大鼠脊髓神經元生長發育的影響實驗分為對照組(A 組)和實驗組(B 組), OECCM 對H2O2 致脊髓神經元損傷模型的影響實驗也分為對照組(C 組)和實驗組(D 組)。A、C 組每孔加200 μL 完全培養基,B、D 組每孔加100 μL OECCM 和100 μL 完全培養基。4 組細胞均作活性MTT 比色分析。 結果 OECs 培養6 ~ 9 d 后,細胞多呈雙極形或梭形;脊髓神經元胞體較大,多呈圓形,培養5 ~ 7 d 后,突起明顯生長,多為雙突起。NGFRp75 細胞免疫組織化學染色觀察示OECs 細胞膜棕色深染,胞體清晰,呈梭性或三角形;OECs 純度 gt; 90%。培養6 ~ 9 d 后,與A 組相比,B 組細胞生長旺盛,密度較高,胞體明顯增大。A 組胞體平均直徑、單個神經元突起數目及細胞突起長度分別為(33.38 ± 6.80)D/μm、(1.67 ± 0.80)個和(91.19 ± 62.64)L/μm,B 組分別為(37.39 ± 7.28)D/μm、(1.76 ± 0.82)個和(121.33 ± 81.13) L/μm,兩組比較差異均有統計學意義(P lt; 0.05)。A 組MTT 比色法所測吸光度(A)值為0.402 0 ±0.586 9,B 組為0.466 0 ± 0.479 0,兩組比較差異有統計學意義(P lt; 0.01)。損傷后2 h,C、D 組細胞數量明顯減少,存活的神經元胞體皺縮、胞膜不清楚,細胞突起明顯回縮或斷裂。C 組MTT 比色法所測A 值為0.149 0 ± 0.030 0,D 組為0.184 0 ±0.052 0,兩組比較差異有統計學意義(P lt; 0.01)。 結論 OECCM 可促進正常脊髓神經元生長,對損傷脊髓神經元有一定保護作用,OECs 分泌的促神經生長因子是OECs 發揮脊髓神經元保護作用的機制之一。
引用本文: 姬振偉,錢濟先,韓建偉,范清宇. 嗅鞘細胞對正常及損傷脊髓神經元的保護作用. 中國修復重建外科雜志, 2009, 23(1): 21-25. doi: 復制