目的 探討L-精氨酸(L-arginine, L-Arg)和左旋-硝基精氨酸甲酯(L-nitro-arginine-methylester, L-NAME)對純化培養的視網膜神經節細胞(retinal gangal cells, RGCs)凋亡的影響。 方法 同化培養液培養抗體純化的Sprague-Dawley(SD)系大鼠RGCs;在純化培養的RGCs中分組加入體積百分濃度為1×10-6、1×10-5、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1 mol/L的L-Arg及L-NAME,培養24 h后檢測各組培養上清液中硝酸鹽含量、細胞的活性;培養 48 h后檢測各組細胞的凋亡及細胞中bcl-2、bax及p53 mRNA的表達。 結果 培養上清液中硝酸鹽含量隨著L-Arg體積百分濃度的增高而增高,隨著L-NAME體積百分濃度的升高而降低。低體積百分濃度時,隨著L-Arg和L-NAME體積百分濃度的增加bcl-2 mRNA表達逐漸增高,bax及p53 mRNA的表達無明顯變化。而高體積百分濃度時則相反。 結論 L-Arg低體積百分濃度時能促進RGCs的生長,高體積百分濃度時則促進細胞凋亡;L-NAME對L-Arg的毒害作用則起抑制作用。 (中華眼底病雜志, 2002, 18: 137-139)
目的 觀察巢蛋白(nestin)和神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)在大鼠視網膜發育中的動態變化。方法 48只Wistar大鼠,其中24只大鼠分為出生后1 d,1、2、3、4、7、12、20周8組,每組3只。制作眼球矢狀位冰凍切片,采用共聚焦激光顯微鏡觀察nestin和谷氨酰胺合成酶(GS)以及GFAP和GS免疫熒光染色情況。18只大鼠分為出生后1d,1、2、3、4、12周,每組3只。提取大鼠視網膜總RNA,實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測nestin、GFAP和GS mRNA表達。選擇6只出生后7~12 d新生鼠,取眼球體外培養Müller細胞,行GS和(或)nestin免疫熒光染色,共聚焦激光顯微鏡觀察熒光染色情況。結果 出生后1 d, nestin免疫陽性細胞貫穿神經視網膜全層,主要定位于視網膜前體細胞放射狀排列的細長纖維中,在視網膜內側出現GFAP陽性的星形膠質細胞。出生后1周出現表達GS的Müller細胞,同時表達nestin,但不表達GFAP;GFAP陽性細胞仍然位于視網膜內側。出生后2~12周,nestin在Müller細胞上的表達逐漸減少直至消失,GFAP在星形膠質細胞中的表達強度沒有顯著變化。體外培養的Müller細胞表達nestin,不表達GFAP。Nestin和GFAP mRNA在視網膜中的表達與免疫熒光染色結果相一致。結論 隨大鼠視網膜不斷發育,Müller細胞上nestin表達逐漸減少,成年大鼠視網膜Müller細胞不再表達nestin;新生鼠和成年鼠Müller細胞均不表達GFAP。