目的觀察5-脂氧合酶(5-LOX)對缺氧誘導的視網膜新生血管形成的抑制作用, 探討視網膜新生血管形成的可能機制。 方法鼠齡為7 d的C57BL/6J幼鼠隨機分為正常組、氧誘導視網膜病變(OIR)模型組、大劑量干預組、小劑量干預組、干預對照組。各組分別為12只。除正常組外, 其余各組小鼠與哺乳母鼠共同置于氧濃度為(75±2)%的氧箱內飼養5 d后轉移至正常環境中飼養5 d, 建立OIR模型。12~17日齡時, 大劑量干預組、小劑量干預組小鼠腹腔每天分別注射100、50 mg/kg 5-LOX抑制劑去甲二氫愈創木酸; 干預對照組小鼠腹腔每天注射等體積1%二甲基亞砜; OIR模型組小鼠出氧箱后不作任何處理。石蠟切片蘇木精-伊紅染色并計數突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核, CD34標記鼠新生血管內皮細胞, 逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測視網膜中5-LOX、血管內皮生長因子(VEGF)-a、VEGF受體-2(VEGFR-2)的mRNA含量。蛋白質免疫印跡法(Western blot)檢測視網膜中5-LOX、VEGF-a、VEGFR-2、細胞外磷酸化信號調節蛋白激酶(P-ERK)1/2的蛋白表達含量。 結果不同劑量干預組突破內界膜的視網膜新生血管內皮細胞核數較OIR模型組、干預對照組明顯減少, 差異有統計學意義(F=73.390, P<0.05)。RT-PCR、Western blot檢測結果顯示, 不同劑量干預組小鼠視網膜5-LOX、VEGF-a、VEGFR-2的mRNA和蛋白表達均較OIR模型組、干預對照組減少, 差異有統計學意義(F=92.668, P<0.05);大劑量干預、小劑量干預組之間VEGFR-2蛋白相對表達量比較, 差異無統計學意義(F=2.118, P>0.05);5-LOX、VEGF-a、P-ERK 1/2相對蛋白表達比較, 差異均有統計學意義(F=86.490、165.128、139.424, P<0.05)。 結論缺氧可以誘導視網膜中5-LOX的高表達; 5-LOX選擇性抑制可以降低其表達并減少缺氧誘導的新生血管形成。
目的觀察探討鈣結合蛋白S100A4基因靜默對氧誘導視網膜新生血管(RNV)的抑制作用及其機制。 方法7日齡C57BL/6J小鼠150只隨機分為正常組、正常-病毒對照組、單純模型組、基因治療組、空白載體組, 每組30只。正常組、正常-病毒對照組小鼠在常氧環境下飼養; 其余3組小鼠建立氧誘導視網膜病變模型。小鼠12日齡時, 基因治療組及空白載體組小鼠雙眼玻璃體腔注射病毒滴度為1.0×109 PFU/ml的攜帶針對S100A4小干擾RNA的重組腺病毒載體(Ad-S100A4-RNAi)和帶綠色熒光蛋白的空白腺病毒載體各1.0μl; 正常-病毒對照組小鼠玻璃體腔注射同樣滴度的等量Ad-S100A4-RNAi。正常組及單純模型組小鼠不做任何處理。小鼠15日齡時, 基因治療組和正常組作視網膜組織冰凍切片觀察病毒轉染情況。小鼠17日齡時, 各組作視網膜組織切片, 計數突破視網膜內界膜的血管內皮細胞核; 作全視網膜鋪片免疫熒光染色, 觀察視網膜血管變化; 蛋白免疫印跡法(Western blot)及實時PCR檢測小鼠視網膜S100A4、B細胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)、半胱天冬酶(Caspase)-3及環磷腺苷效應元件結合蛋白(CREB)的蛋白和mRNA表達。 結果熒光顯微鏡觀察發現, 正常組小鼠視網膜未見病毒綠色熒光, 僅可見少量自身熒光; 基因治療組小鼠視網膜神經節細胞層、內叢狀層、內核層、外叢狀層可見病毒綠色強熒光, 外核層可見少量弱熒光。單純模型組突破內界膜的血管內皮細胞核計數較正常組明顯增加, 差異有統計學意義(t=15.68, P＜0.05);基因治療組突破內界膜的血管內皮細胞核計數較單純模型組、空白載體組明顯下降, 差異均有統計學意義(t=13.61、14.64, P＜0.05)。與單純模型組、空白載體組比較, 基因治療組小鼠RNV面積、無灌注區面積明顯減少, 差異均有統計學意義(P＜0.05)。Western blot及實時PCR檢測結果顯示, 與單純模型組、空白載體組比較, 基因治療組小鼠視網膜S100A4、bcl-2、CREB蛋白及mRNA表達明顯下調, 差異均有統計學意義(P＜0.05);Caspase-3蛋白及mRNA表達明顯上調, 差異有統計學意義(P＜0.05)。 結論S100A4基因靜默可抑制氧誘導RNV。其機制可能與S100A4基因靜默下調bcl-2、CREB表達, 上調Caspase-3表達作用有關。