目的 制備WO-1膠原生物衍生骨復合支架材料,檢測其理化性質及力學強度,為骨組織工程研究和應用提供可選擇的支架材料。方法 將同種異體骨、I型膠原、WO-1進行系列理化處理,制成單純生物衍生骨材料、膠原生物衍生骨復合材料及WO-1膠原生物衍生骨復合材料。制備后的材料行大體及掃描電鏡觀察其形貌特征,X線衍射分析材料成分,并對材料的力學性能進行分析測定。結果 單純生物衍生骨材料具有天然骨的網狀孔隙系統;膠原生物衍生骨復合材料具有天然骨的網狀孔隙系統,微孔表面覆蓋膠原膜;WO-1膠原生物衍生組織工程骨復合支架材料具有骨組織的天然網狀孔隙系統,微孔表面可見膠原膜覆蓋。3種材料的孔徑依次為90~700 μm、75~600 μm、80~600 μm;孔隙率依次為87.96%、80.47%、84.29%,差異無統計學意義(P>0.05);其主要成分為羥基磷灰石,彎曲強度和壓縮強度無統計學意義(P>0.05)。結論 WO.1膠原生物衍生骨復合材料與其它兩種材料相同,可作為一種有效的天然組織工程骨支架材料。
目的采用低溫沉積技術 3D 打印制備聚己內酯(polycaprolactone,PCL)/Ⅰ型膠原組織工程半月板支架(以下簡稱 PCL/Ⅰ型膠原半月板支架),探討其理化特性。方法制備 15%PCL/4%Ⅰ型膠原溶液及 15%PCL 溶液,利用低溫沉積技術 3D 打印制備 PCL/Ⅰ型膠原半月板支架及 PCL 半月板支架。大體及掃描電鏡觀察支架形態及微觀結構,生物力學試驗測量支架壓縮模量及拉伸模量,紅外光譜分析支架成分,測量支架表面接觸角;將兩種支架及其浸提液分別與兔半月板細胞復合培養,細胞計數試劑盒 8(cell counting kit 8,CCK-8)檢測細胞增殖,并以正常培養細胞作對照;掃描電鏡觀察支架-細胞復合物中細胞黏附及生長情況。結果大體及掃描電鏡觀察顯示,兩種支架均具有取向的三維微觀結構及孔隙,但 PCL/Ⅰ型膠原半月板支架表面更粗糙。生物力學測試,兩種支架壓縮模量及拉伸模量比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。紅外光譜分析提示,PCL/Ⅰ型膠原半月板支架中 PCL 和Ⅰ型膠原成功混合。PCL/Ⅰ型膠原半月板支架表面接觸角為(83.19±7.49)°,較 PCL 半月板支架(111.13±5.70)° 顯著減小(t=6.638,P=0.000)。CCK-8 檢測顯示,隨培養時間延長,兩種支架浸提液培養的細胞數量呈遞增趨勢,與對照組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。支架-細胞復合物掃描電鏡觀察示,PCL/Ⅰ型膠原半月板支架表面黏附細胞多于 PCL 半月板支架。結論低溫沉積技術 3D 打印制備的 PCL/Ⅰ型膠原半月板支架具有優良的理化學性能,無細胞毒性,有望作為半月板組織工程支架材料。
目的采用低溫沉積 3D 打印技術制備聚乳酸-羥基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]支架,復合脫細胞軟骨細胞外基質(decellularized articular cartilage extracellular matrix,DACECM)制備 PLGA/DACECM 組織工程軟骨支架,探討其理化特性。方法利用低溫沉積 3D 打印技術制備 PLGA 支架。采用改良式物理、化學脫細胞方法制備 DACECM 混懸液。利用冷凍干燥和物理化學法交聯技術制備 DACECM 取向支架,同法將 DACECM 混懸液與 PLGA 支架復合制備 PLGA/DACECM 取向支架。通過大體觀察、掃描電鏡觀察 3 種支架宏觀、微觀結構,組織學及免疫組織化學染色定性分析 DACECM 取向支架成分,生物力學試驗檢測 3 種支架壓縮模量。于 SD 大鼠皮下包埋 3 種支架,HE 染色觀察免疫排斥反應。分離培養新西蘭大白兔軟骨細胞,制備 3 種細胞-支架復合物,掃描電鏡觀察細胞在支架上的生長黏附情況。取鼠 L-929 成纖維細胞分別于 3 種支架浸提液進行培養,以 DMEM 培養液培養細胞作為對照,細胞計數試劑盒 8(cell counting kit 8,CCK-8)法檢測細胞增殖情況。 結果大體觀察和掃描電鏡觀察示,PLGA 支架表面較光滑,可見大孔;DACECM 取向支架表面粗糙,為疏松多孔相互連通的三維立體結構;PLGA/DACECM 取向支架表面粗糙,大孔與小孔相互連通,具有垂直三維立體結構。組織學及免疫組織化學定性分析顯示,DACECM 脫細胞完全,保留了軟骨基質的糖胺聚糖和Ⅱ型膠原蛋白成分。生物力學檢測示,DACECM 取向支架壓縮模量顯著低于其余 2 種支架(P<0.05),PLGA 支架和 PLGA/DACECM 取向支架間差異無統計學意義(P>0.05)。SD 大鼠皮下包埋實驗示,DACECM 取向支架和 PLGA/DACECM 取向支架的免疫排斥反應明顯低于 PLGA 支架。細胞-支架復合物掃描電鏡觀察示,軟骨細胞在 PLGA 支架上未見明顯黏附,大量軟骨細胞在 PLGA/DACECM 取向支架和 DACECM 取向支架表面黏附、生長。CCK-8 檢測示,隨培養時間延長,各組細胞數量均呈遞增趨勢,各時間點組間吸光度(A)值比較差異均無統計學意義(P>0.05)。結論PLGA/DACECM 取向支架具有無細胞毒性、優良的理化性能,有望成為一種組織工程軟骨支架材料。