目的觀察TGF-β3基因轉染滇南小耳豬BMSCs后目的基因的表達和向軟骨細胞分化的作用。 方法以血清5型重組腺病毒（recombinant adenovirus 5，rAd5）構建系統為基因載體，包裝為重組腺病毒rAd5-TGF-β3，行雙酶切及PCR鑒定。采集2月齡滇南小耳豬（體重12～15 kg）骨髓分離培養制備BMSCs，取第2代細胞用于實驗。將實驗分為3組，實驗組和對照組分別用rAd5-TGF-β3、人腺病毒陰性空病毒載體轉染BMSCs，以未轉染的BMSCs為空白對照組。流式細胞儀檢測轉染效率，免疫熒光染色、Western blot檢測各組TGF-β3蛋白表達情況；培養后各時間點倒置相差顯微鏡觀察細胞形態變化，Western blot檢測各組Ⅱ型膠原蛋白表達情況。 結果rAd5-TGF-β3重組腺病毒成功構建并轉染BMSCs，在細胞內表達并迅速擴增，免疫熒光顯微鏡下可觀察到強綠色熒光。流式細胞儀檢測示轉染72 h時病毒達最佳轉染效果（轉染效率為84.86%）。免疫熒光染色示，rAd5-TGF-β3轉染BMSCs 72 h，細胞質內有明顯TGF-β3蛋白表達；轉染后7、21 d Western blot檢測示，實驗組在相對分子質量為30×103處有TGF-β3陽性條帶，而對照組和空白對照組均呈陰性。轉染后體外培養，倒置相差顯微鏡下示實驗組向軟骨細胞分化明顯。培養21 d時Western blot檢測示，實驗組在相對分子質量為130×103處有Ⅱ型膠原陽性條帶，對照組和空白對照組均呈陰性。 結論重組腺病毒rAd5-TGF-β3可成功轉染BMSCs，TGF-β3蛋白可穩定表達，并促使BMSCs向軟骨細胞方向分化，為軟骨缺損修復的局部基因治療奠定了實驗基礎。
目的比較前交叉韌帶（anterior cruciate ligament，ACL）保留殘端重建與不保留殘端重建術后膝關節本體感覺功能恢復情況。 方法將2010年1月－2012年10月收治的符合選擇標準的40例ACL損傷患者隨機分為2組，試驗組關節鏡下行自體腘繩肌腱ACL保留殘端單束重建術，對照組行傳統ACL單束重建術，每組20例。兩組患者性別、年齡、病程、致傷原因及術前 Lysholm評分、國際膝關節文獻委員會（IKDC）評分比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。術后隨訪時行IKDC評分及Lysholm評分評定膝關節功能，用等速肌力訓練儀于手術前后對雙膝關節行被動角度重現試驗，用關節位置感覺測定值（joint position sense，JPS）評定膝關節本體感覺恢復情況。 結果兩組患者術后切口均Ⅰ期愈合。患者均獲隨訪，試驗組隨訪時間12～16個月，平均14.0個月；對照組12～15個月，平均14.5個月。術后12個月兩組Lysholm評分及IKDC評分均較術前顯著提高（P＜0.05），但兩組間比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。試驗組內術后3、12個月患側膝關節在屈曲15、45、75°位時JPS均顯著低于術前（P＜0.05），術后3、12個月間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。對照組內術后3個月膝關節各屈曲角度時JPS與術前比較差異均無統計學意義（P＞0.05），但術后12個月時JPS顯著低于術前及術后3個月（P＜0.05）。兩組間比較：術后3個月試驗組膝關節各屈曲角度時JPS均顯著低于對照組（P＜0.05）；術后12個月時兩組間比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。術后3、12個月，試驗組膝關節各屈曲角度JPS健、患側間比較差異均無統計學意義（P＞0.05）；對照組術后3個月患側JPS顯著高于健側（P＜0.05），術后12個月健、患側間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。 結論保留殘端重建ACL有利于膝關節本體感覺的早期恢復。
目的構建含BMP-2和TGF-β3基因的重組腺病毒載體，雙基因共轉染滇南小耳豬BMSCs并檢測其表達，為組織工程軟骨支架提供改良的種子細胞。 方法用PCR方法擴增人BMP-2和TGF-β3目的基因，將2個基因亞克隆至穿梭載體pEC3.1（+）中，構建pEC-GIE3.1-BMP-2和pEC-GIE3.1-TGF-β3重組質粒，通過體外同源重組反應將pEC-GIE3.1-BMP-2、pEC-GIE3.1-TGF-β3重組至腺病毒骨架質粒pGSadeno中，構建重組腺病毒表達質粒pGSadeno-BMP-2、pGSadeno-TGF-β3，線性化后轉染HEK293細胞進行包裝，獲得重組腺病毒Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3。取成年滇南小耳豬的骨髓，采用離心加貼壁法分離BMSCs，分別用基因Ad-BMP-2（A組）、Ad-TGF-β3（B組）和Ad-BMP-2+Ad-TGF-β3（C組）轉染，以未轉染細胞作為對照（D組）。采用免疫熒光、Western blot、PCR檢測目的基因和蛋白表達，Ⅱ型膠原免疫組織化學染色觀察成軟骨分化情況。 結果Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3經PCR及測序鑒定正確，帶BMP-2、TGF-β3基因的載體在HEK293細胞中包裝成功，病毒滴度分別為5.6×108、1.6×108 pfu/mL。雙基因共轉染滇南小耳豬BMSCs 72 h后，PCR示A組在310 bp處可見條帶，B組在114 bp處可見條帶，C組在310、114 bp處同時可見條帶，D組未見目的條帶表達；免疫熒光示A、B組細胞質內有分別有紅色、綠色熒光表達，C組同時表達紅色及綠色熒光，D組未見熒光表達；Western blot示A組在相對分子質量為18×103處有陽性條帶，B組在50×103處有陽性條帶，C組在18×103、50×103處同時可見條帶，D組未見目的條帶表達。Ⅱ型膠原免疫組織化學染色示A、B、C組呈陽性，C組染色強于A、B組，D組染色呈陰性。 結論成功構建含BMP-2和TGF-β3基因的重組腺病毒載體。Ad-BMP-2和Ad-TGF-β3雙基因聯合轉染滇南小耳豬BMSCs后目的基因和蛋白均可成功表達，并促進BMSCs成軟骨分化，可作為組織工程軟骨研究的改良種子細胞。