目的制備以單甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羥基乙酸共聚物(mPEG-PLGA)為載體的姜黃素納米粒(CUR-NPs), 探討姜黃素(CUR)和CUR-NPs逆轉香煙提取物(CSE)暴露所致的激素抵抗現象, 比較CUR-NPs和CUR生物學作用的差異。 方法采用乳化溶劑揮發法制備CUR-NPs, 激光粒度測定儀和透射電子顯微鏡分別對CUR-NPs的粒徑分布和形貌進行表征。脂多糖(LPS)刺激巨噬細胞RAW264.7, 布地奈德(BUD)(10-10~10-5 mol/L)干預。LPS+CSE刺激巨噬細胞RAW264.7, BUD(10-10~10-5 mol/L)、CUR(10-10~10-5 mol/L)、CUR(10-7 mol/L)+BUD(10-9~10-5 mol/L)、CUR(10-9~10-5 mol/L)+BUD(10-7 mol/L)、CUR-NPs(10-9~10-5 mol/L)+BUD(10-7 mol/L)干預, 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測巨噬細胞RAW264.7所分泌的IL-8。CES刺激巨噬細胞RAW264.7, BUD(10-7 mol/L)、CUR(10-7、10-6 mol/L)和CUR-NPs(10-7、10-6 mol/L)干預, 實時定量PCR檢測細胞中組蛋白去乙酰化酶2(HDAC2) mRNA的表達, 蛋白免疫印跡(Western blot)檢測細胞中HDAC2蛋白的表達。共聚焦顯微鏡檢測巨噬細胞RAW264.7對CUR和CUR-NPs內CUR的攝取量。 結果CUR-NPs外觀呈圓形或類圓形, 平均粒徑為(356.4±146.6)nm。與LPS刺激相比, LPS+CSE共刺激時BUD(10-10~10-5 mol/L)對IL-8分泌的最大抑制率顯著降低(P < 0.05), 半數抑制濃度(IC50)顯著增高(P < 0.05)。LPS+CSE共刺激時, 與BUD(10-10~10-5 mol/L)組相比, CUR(10-7 mol/L)+BUD(10-9-10-5 mol/L)組BUD對IL-8分泌的最大抑制率顯著增高(P < 0.05), IC50顯著降低(P < 0.05)。在LPS+CSE共刺激, CUR和CUR-NPs濃度梯度同為10-9、10-8和10-7 mol/L時, CUR-NPs+BUD(10-7 mol/L)組對IL-8分泌的抑制率顯著高于CUR+BUD(10-7 mol/L)組(P < 0.05)。CSE刺激后細胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達量顯著降低(P < 0.05);與CSE組相比, CUR(10-7、10-6 mol/L)組及CUR-NPs(10-7、10-6 mol/L)組細胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達量顯著增高(P < 0.05)。濃度梯度同為10-7 mol/L時, CUR-NPs組細胞中HDAC2的mRNA和蛋白表達量高于CUR組(P < 0.05)。濃度梯度同為10-7 mol/L時, 巨噬細胞RAW264.7對CUR-NPs內CUR的攝取量顯著高于CUR(P < 0.05)。 結論CUR及CUR-NPs能夠逆轉CSE暴露所致的激素抵抗, CUR-NPs能夠提高細胞對CUR的攝取量, 在低濃度梯度情況下, CUR-NPs具有更強的逆轉激素抵抗的作用。
目的 觀察激素抵抗型支氣管哮喘（簡稱 SR 哮喘）患者外周血維生素 D 水平，探討維生素 D 對 SR 哮喘患者 T 淋巴細胞 JNK/AP-1 和糖皮質激素受體的影響。 方法 收集 2014 年至 2015 年期間門診和住院急性發作的哮喘患者 62 例，其中激素敏感型支氣管哮喘（簡稱 SS 哮喘）26 例，SR 哮喘 36 例；選取同期健康體檢正常者 25 例作為對照。收集入組者臨床資料，取外周靜脈血檢測 25-羥維生素 D[25-(OH)D] 水平并分離 T 淋巴細胞。T 淋巴細胞培養分組如下：健康對照組（A 組），SS 哮喘對照組（B 組），SR 哮喘對照組（C 組），SR 哮喘 JNK 抑制劑（SP600125）+1,25-(OH)2D3 組（D 組），SR 哮喘 JNK 抑制劑組（SP600125）（E 組），以及 SR 哮喘 1,25-(OH)2D3 組（F 組）。T 淋巴細胞共培養 48 h，培養結束后采用 Western blot 方法檢測 T 淋巴細胞中磷酸化 JNK（p-JNK）和磷酸化糖皮質激素受體（p-GR）的表達，RT-PCR 法檢測 c-Jun mRNA 的表達。 結果 B 組和 C 組血清 25-(OH)D 水平均低于 A 組（P<0.05），且 C 組低于 B 組（P<0.05）。B 組和 C 組 T 淋巴細胞中 p-JNK 蛋白水平高于 A 組（P<0.05），且 C 組高于 B 組（P<0.05），E 組和 F 組均低于 C 組（P<0.05），D 組低于 F 組（P<0.05）。C 組 T 淋巴細胞中 p-GR 蛋白低于 A 組和 B 組（P<0.05），E 組和 F 組均高于 C 組（P<0.05），D 組高于 F 組（P<0.05）。RT-PCR 法檢測 B 組和 C 組 T 淋巴細胞中 c-Jun mRNA 水平高于 A 組（P<0.05），C 組高于 B 組（P<0.05），E 組和 F 組均低于 C 組（P<0.05），D 組低于 F 組（P<0.05）。C 組患者 25-(OH)D 水平與 p-JNK 和 c-Jun mRNA 水平呈負相關（r=–0.69，r=–0.65，P<0.05），與 p-GR 水平呈正相關（r=0.72，P<0.05）。 結論 維生素 D 缺乏在 SR 哮喘患者中患病率高。1,25-(OH)2D3 可通過抑制 SR 哮喘 T 淋巴細胞 JNK/AP-1 信號通路而促進 p-GR 的表達，這可能是維生素 D 改善 SR 哮喘患者的糖皮質激素抵抗的機制之一。