目的通過使用腺病毒介導BMP-2/7共表達載體轉染兔滑膜MSCs（synovial-derived MSCs，SMSCs），觀察其在體外向纖維軟骨樣細胞分化的可行性。 方法取3月齡新西蘭大白兔6只，雌雄不限，體重（2.1 ± 0.3） kg；取滑膜組織分離純化SMSCs后，進行形態學觀察及免疫細胞熒光染色、流式細胞儀、細胞周期鑒定，并檢測其成脂、成骨、成軟骨多向分化潛能。同時包裝pAdTrack-BMP-2-內部核糖體進入位點（internal ribosome entry site，IRES）-BMP-7腺病毒載體，轉染SMSCs后進行增殖動力學、核型分析、流式細胞儀檢測細胞DNA含量、致瘤性分析等安全性鑒定。體外在不完全成軟骨培養基中培養，觀察其分化狀態，并行RT-PCR檢測、免疫熒光染色及甲苯胺藍染色檢測。 結果從兔滑膜組織中分離出的SMSCs，其細胞形態、表面標記、多向分化潛能等均符合MSCs的特點。pAdTrack-BMP-2-IRES-BMP-7轉染SMSCs的轉染率約為70%。安全性鑒定結果顯示轉染后的SMSCs倍增時間、染色體數目及DNA含量均正常，且無致瘤性。體外不完全成軟骨培養基誘導培養21 d后，RT-PCR檢測示SMSCs 的Ⅰ、Ⅱ型膠原表達明顯增加，以Ⅱ型膠原為主；軟骨分化信號分子RhoA與Sox-9的表達經誘導后也明顯增加。免疫熒光染色及甲苯胺藍染色結果亦顯示轉染后的SMSCs向纖維軟骨樣細胞分化。 結論使用腺病毒載體安全有效，可在體外定向誘導兔SMSCs向纖維軟骨樣細胞分化。
目的探討TGF-β3、BMP-2及地塞米松（dexamethasone，DEX）誘導兔滑膜MSCs（synovialMSCs，SMSCs）成軟骨分化的作用。 方法取5只10～16月齡新西蘭大白兔（體重1.8～2.5kg）膝關節滑膜分離培養SMSCs，并行形態學觀察、流式細胞儀檢測細胞表面抗原及成脂、成骨誘導分化鑒定。采用PELLET培養系統，將聚丙烯管中的SMSCs團塊分成8組，分別加入不同組合的細胞因子進行成軟骨誘導培養。A組TGF-β3，B組BMP-2，C組DEX，D組TGF-β3+BMP-2，E組TGF-β3+DEX，F組BMP-2+DEX，G組TGF-β3+BMP-2+DEX，H組為對照組。通過比較各組軟骨微球的直徑、重量，蛋白聚糖（甲苯胺藍染色）、Ⅱ型膠原（免疫組織化學染色）表達，以及軟骨標志基因表達水平[實時定量RT-PCR（realtimequantitativePCR，RT-qPCR）]來評價各組細胞因子誘導SMSCs成軟骨能力大小，確定最佳成軟骨誘導細胞因子組合；并通過檢測各組軟骨微球DNA含量來評價軟骨微球重量增加與細胞增殖的關系。 結果經鑒定，成功從新西蘭大白兔膝關節處滑膜分離獲得SMSCs。A～F組誘導產生的軟骨微球直徑較小、重量較輕，Ⅱ型膠原及蛋白聚糖合成量亦較低；而G組誘導產生的軟骨微球直徑最大，重量最重，蛋白聚糖及Ⅱ型膠原合成量亦最多，均顯著高于A～F組（P＜0.05）；RT-qPCR結果顯示，G組軟骨相關基因（SOX-9、聚集蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、BMP受體Ⅱ）的相對表達量顯著高于其余各組（P＜0.01）。各組軟骨微球DNA含量隨時間延長不斷降低（7d降低約70%，14d降低約80%，21d降低約88%）。 結論SMSCs在TGF-β3、BMP-2及DEX三者聯合誘導條件下成軟骨分化能力最強；軟骨微球重量的增加由細胞外基質合成增多導致，而不是由細胞增殖引起。
目的通過比較TNF-α誘導滑膜MSCs（synovium-derived MSCs，SMSCs）與BMSCs凋亡，探討SMSCs的抗凋亡能力。 方法取患者自愿捐贈的滑膜組織及骨髓，分別采用組織貼壁法和密度梯度離心法分離培養SMSCs和BMSCs并傳代，取第3～5代細胞行細胞免疫表型及三系分化鑒定后進行實驗。實驗分為4組，其中SMSCs、BMSCs凋亡誘導組（SMSCs、BMSCs實驗組）用20 ng/mL TNF-α和10 μg/mL放線菌酮對細胞進行凋亡誘導，其對應對照組以正常培養基培養。倒置相差顯微鏡下觀察凋亡誘導細胞形態變化；培養24 h取各組細胞，采用細胞計數試劑盒8及流式細胞術檢測細胞存活率及凋亡率，Western blot法檢測細胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解產物8、3（Cleaved Caspase-8、3）的表達。 結果經細胞表型及三系分化鑒定培養獲得的細胞均符合MSCs鑒定標準。倒置相差顯微鏡觀察示，隨凋亡誘導培養時間延長，兩實驗組細胞形態及生長均較對應的對照組差。培養24 h，兩對照組細胞存活率均為100%，未見細胞凋亡；SMSCs、BMSCs實驗組細胞存活率分別降至60.13%±8.63%及46.55%±10.54%，均顯著低于對照組（P＜0.05），SMSCs實驗組細胞存活率顯著高于BMSCs實驗組（t=3.152，P=0.006）。SMSCs和BMSCs對照組細胞凋亡率分別為1.12%±0.24%和1.35%±0.31%，兩實驗組分別增高至36.54%±8.63%及53.77%±11.52%，均顯著高于對照組（P＜0.05），且SMSCs實驗組細胞凋亡率顯著低于BMSCs實驗組（t=3.785，P=0.001）。兩對照組細胞Cleaved Caspase-8、3蛋白幾乎不表達，且SMSCs實驗組和BMSCs組細胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明顯高表達；其中BMSCs實驗組明顯高于SMSCs實驗組（t=13.870，P=0.000；t=7.309，P=0.000）。 結論經TNF-α誘導培養，SMSCs凋亡明顯少于BMSCs，具有更強的抗凋亡能力。