目的探討綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）標記的C57小鼠皮膚表皮和真皮細胞共移植誘導裸鼠毛囊重建的實驗研究。 方法取C57-GFP新生及成年小鼠分離表皮與真皮，分別制備成年小鼠原代真皮-表皮混合細胞（按1∶1比例混合）、成年小鼠原代真皮細胞、新生小鼠第3代真皮細胞，熒光顯微鏡觀察細胞激發綠色熒光情況，免疫細胞化學檢測培養的新生小鼠第3代真皮細胞毛囊干細胞標志。取Balb/c裸鼠，分別將成年小鼠原代真皮-表皮混合細胞（A組）、成年小鼠原代真皮細胞（B組）、新生小鼠第3代真皮細胞（C組）及生理鹽水（D組）移植至裸鼠皮下，術后4、5、6周行大體觀察，6周時取移植部位皮膚行GFP免疫組織化學染色觀察各組毛囊形成情況。 結果熒光顯微鏡觀察示，分離、培養的C57-GFP新生及成年小鼠表皮及真皮細胞均能激發綠色熒光；免疫細胞化學檢測培養的第3代真皮細胞中毛囊干細胞標志，顯示波形蛋白、α-平滑肌肌動蛋白強陽性，表明細胞多為真皮鞘細胞；部分細胞表達毛乳頭細胞標志CD133、多能聚糖及毛囊隆突部標志角蛋白15。裸鼠皮下移植實驗：大體觀察示A組可見接種部位皮下呈灰黑色，但未見毛發穿出皮膚表面；B、C、D組裸鼠皮膚均無著色。免疫組織化學染色示，A組形成新的、完整的毛囊結構或參與形成毛囊；B組GFP陽性細胞多表達于毛囊真皮鞘、外根鞘；C組GFP陽性細胞主要分布于毛囊真皮鞘、外根鞘、毛乳頭，在汗腺中也有表達；D組GFP染色呈陰性。 結論小鼠皮膚的表皮和真皮細胞在裸鼠體內相互作用可形成完整的毛囊結構，而僅移植新鮮分離或培養的真皮細胞則主要參與毛囊形成，無法形成完整的毛囊結構。
目的明確音猬因子（Sonic hedgehog，Shh）在毛囊干細胞（hair follicle stem cells，HFSCs）傳代過程中的表達水平，分析過表達Shh對HFSCs增殖活性的影響，探究過表達Shh后HFSCs的存活情況及其對毛囊再生的影響。 方法取20例40～50歲女性脫發患者捐贈的頭皮正常區（H1組）和脫發區（H2組）毛發，顯微鏡下剪取毛囊中間部分培養，獲取原代HFSCs并傳代；流式細胞術鑒定第4代HFSCs表面陽性標志物（CD29、CD71）和陰性標志物（CD34）。過表達Shh慢病毒轉染兩組HFSCs，并分別用流式細胞術和細胞計數試劑盒8法測定轉染前后的細胞周期和增殖活性。然后將Shh慢病毒轉染后的HFSCs移植至裸鼠背部皮下作為實驗組，以注射等量生理鹽水作為對照組，5周后采用Western blot法檢測裸鼠背部皮膚組織內Shh蛋白表達情況，HE染色和免疫熒光染色分別比較各組毛囊數量及HFSCs存活情況。 結果 分離培養的細胞呈長梭形，貼壁較牢；流式細胞術檢測示CD29和CD71在細胞表面呈高表達，CD34呈低表達；提示培養細胞為HFSCs。實時熒光定量PCR和Western blot檢測示，H1組和H2組第4、7、10代細胞中Shh蛋白和基因表達水平隨體外培養時間延長而逐漸下降。過表達Shh后兩組HFSCs增殖活性均顯著高于空白組（未轉染慢病毒）和陰性對照組（轉染陰性對照慢病毒），且H1組HFSCs轉染前后增殖活性均顯著高于H2組，差異均有統計學意義（P<0.05）。裸鼠細胞移植5周后，各實驗組背部皮膚內Shh蛋白穩定表達；各實驗組毛囊數量和HFSCs標記物（CD71、細胞角蛋白15）表達水平均顯著多于對照組，且實驗組中的H1組毛囊數量和HFSCs標記物表達水平均顯著多于H2組，差異均有統計學意義（P<0.05）。 結論慢病毒介導的Shh可成功轉染人HFSCs，過表達Shh后HFSCs增殖活性顯著升高，能持續穩定地分泌和表達Shh，并結合干細胞和Shh的優勢共同促進毛囊再生。