目的探討兔纖維環細胞復合KLD-12多肽納米纖維凝膠體外培養的可能性，尋找修復椎間盤退變的理想種子細胞和支架。 方法胰蛋白酶消化法提取6月齡新西蘭大白兔纖維環細胞，培養至第3代，復合于KLD-12多肽制備KLD-12多肽/纖維環細胞凝膠。倒置顯微鏡觀察凝膠內細胞形態變化；細胞計數試劑盒8（cell counting kit 8，CCK-8）法檢測細胞增殖活性；鈣黃綠素（Calcein-AM）/碘化丙啶（propidium iodide，PI）雙熒光染色觀察凝膠內活、死細胞，計算活細胞比率；阿爾新藍法檢測培養基中糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）含量；免疫熒光染色觀察Ⅱ型膠原分泌情況；實時熒光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）檢測纖維環細胞Ⅱ型膠原及蛋白聚糖（Aggrecan）基因表達情況。 結果復合于凝膠中的纖維環細胞呈圓形，少部分在凝膠邊緣處貼壁的細胞呈多角形。CCK-8結果顯示，細胞增殖活性隨培養時間延長呈增加趨勢，培養14 d活性顯著高于其余各時間點（P < 0.05），且各時間點活性均顯著高于空白凝膠對照組（P < 0.05）。Calcein-AM/PI雙熒光染色觀察示，培養5、14 d凝膠內細胞活細胞比率分別89.32%±8.58%和97.81%±1.09%，比較差異無統計學意義（t=-1.962，P=0.097）。GAG檢測示，細胞中GAG含量隨培養時間延長逐漸增加，8 d達峰值，之后逐漸下降；培養5、8、11 d時GAG含量顯著高于2、14 d時（P < 0.05）。免疫熒光染色示細胞中Ⅱ型膠原正常分泌。RT-qPCR檢測示，培養5、14 d凝膠內纖維環細胞均可見Ⅱ型膠原和Aggrecan基因表達，14 d時基因相對表達量均顯著高于5 d時（P < 0.05）。 結論纖維環細胞能夠在KLD-12多肽納米纖維凝膠中正常生長增殖，主要細胞外基質成分可正常表達，細胞生物活性良好。
目的探討KLD-12多肽復合重組人BMP-2（recombinant human BMP-2，rhBMP-2）誘導兔BMSCs成骨活性的影響。 方法取3月齡新西蘭大白兔骨髓，采用密度梯度法分離培養BMSCs。取第3代BMSCs分別采用KLD-12多肽/rhBMP-2凝膠三維培養（實驗組）和KLD-12多肽凝膠培養（對照組）。培養7 d倒置相差顯微鏡下觀察實驗組細胞在凝膠內的形態；3、7、10、14、21 d檢測兩組細胞培養基中ALP及骨鈣蛋白含量；培養14 d兩組行Ⅰ型膠原免疫熒光染色觀察，實時熒光定量PCR檢測Ⅰ型膠原和骨鈣蛋白基因相對表達量。 結果倒置相差顯微鏡下觀察，培養7 d實驗組及對照組凝膠內BMSCs呈圓形，分布均勻。兩組培養3、7 d時ALP表達量及骨鈣蛋白含量比較差異無統計學意義（P＞0.05），10~21 d實驗組以上指標均明顯高于對照組（P＜0.05）。培養14 d，激光共聚焦顯微鏡觀察示，實驗組Ⅰ型膠原免疫熒光染色陽性，且熒光強度較對照組高；實時熒光定量PCR檢測實驗組Ⅰ型膠原、骨鈣蛋白基因相對表達量均顯著高于對照組，比較差異有統計學意義（t=15.902，P=0.000；t=12.998，P=0.000）。 結論BMSCs在KLD-12多肽內正常生長并增殖，KLD-12多肽/rhBMP-2凝膠誘導BMSCs向成骨細胞分化的生物活性良好。