目的 探討鈣調素依賴蛋白激酶家族(calmodulin-dependent kinases casades,CaMK)Ⅱ表達調控對大鼠肝移植術后肝功能的影響。 方法 采用經典二袖套法建立 SD 至 SD 大鼠同種異體原位肝移植模型,并構建 CaMKⅡγ 蛋白和 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒表達體系。分別將表達 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒載體及表達 CaMKⅡγ 蛋白的慢病毒載體灌注至肝移植術后大鼠體內,同時予以灌注相應的空載體及生理鹽水形成對照,分別于術后不同時間點取大鼠下腔靜脈血測定其血清 ALT 及 AST 水平。 結果 灌注表達 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒載體的移植術后大鼠血清 ALT 及 AST 降低(P<0.05);灌注表達 CaMKⅡγ 蛋白的慢病毒載體的移植術后大鼠血清 ALT 及 AST 升高(P<0.05);灌注空白載體及生理鹽水的移植術后大鼠血清 ALT 及 AST 均無明顯差異(P>0.05)。 結論 特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路可有效降低大鼠肝移植術后的血清 ALT 及 AST 水平;而增強的 CaMKⅡ信號通路則升高大鼠肝移植術后的血清 ALT 和 AST 水平。
目的檢測轉化生長因子(TGF)-β1在恒河猴肝移植術后急性排斥反應時肝組織中的表達水平,以評價其作為肝移植術后急性排斥反應早期診斷指標的價值。 方法采用改良血管袖套+膽道支撐管+動脈吻合法建立穩定的恒河猴肝移植模型,將其隨機分為實驗組(圍手術期不給予免疫抑制治療)和對照組(圍手術期給予免疫抑制治療)。繼而分別在肝移植術后6 h、12 h、24 h和72 h四個時間點分別收集血清及肝組織,通過肝功能指標檢測及移植肝組織蘇木精-伊紅染色Banff評分評價其移植排斥反應情況,并應用免疫組織化學、Western blot法分別檢測TGF-β1蛋白表達情況。 結果①2組恒河猴肝移植術后12 h、24 h和72 h均有急性排斥反應發生,尤其肝移植后72 h時實驗組肝組織急性排斥反應重于對照組,Banff分級水平高于對照組(P<0.05)。②2組術后ALT、AST和TBIL水平均隨著時間的延長呈上升趨勢(P<0.05),在移植術后6 h和12 h時2組ALT、AST和TBIL水平比較差異無統計學意義(P>0.05);在移植術后24 h和72 h時實驗組ALT、AST和TBIL水平均明顯高于對照組,差異有統計學意義(P<0.05)。③免疫組織化學檢測TGF-β1蛋白表達結果:實驗組肝移植術后12 h后肝組織中TGF-β1免疫組織化學染色陽性面積百分率隨著時間延長不斷升高,且均明顯高于對照組相應時相(P<0.05)。④Western blot檢測TGF-β1蛋白表達的半定量結果:實驗組和對照組均在6 h即開始隨著時間的延長呈現上調趨勢,而實驗組上調的幅度較對照組大,在6 h、12 h、24 h和72 h時實驗組均分別明顯高于對照組相應時相,差異有統計學意義(P值分別是0.003、0.001、0.001、0.001)。 結論肝移植術后肝組織中TGF-β1水平升高提示機體細胞免疫功能增強,對肝移植術后急性排斥反應的早期診斷可能有一定意義。
目的改進大鼠肝部分切除術后剩余肝葉體積和肝臟總體積的計算方法。方法將 135 只不同體型的 SD 大鼠按完全隨機方法分為 5 組,術前測量大鼠體長、尾長、胸圍、體質量以及肝三角葉長度,然后各組按經典的 Higgins 和 Anderson 法分別實施不同肝葉切除術:切除中葉+左內葉、左外葉、兩乳頭葉、三角葉及右外側葉。中葉+左內葉組、左外葉組、兩乳頭葉組、三角葉組及右外側葉組的理論切除肝臟的比例分別為 38.1%、30.1%、7.9%、7.8% 和 15.3%。術后實測切除肝臟體積和剩余肝臟體積,計算各組實際切除肝臟比例。分析不同間接法計算肝體積的統計學差異。另外,對術前測量的大鼠體表參數與實測的全肝臟體積進行相關性分析和回歸分析,探究更加簡易和精確的體積測量方法。結果經測量計算,中葉+左內葉組、左外葉組、兩乳頭葉組、三角葉組及右外側葉組的實際切除肝臟比例分別為 35.0%、29.2%、7.1%、4.9% 和 12.0%。利用理論切除肝臟比例帶入間接法公式推算出的剩余肝葉體積與實際測量的剩余肝葉體積相比,除了切除左外葉組差異無統計學意義(P>0.05)以外,其余 4 組的差異均有統計學意義(P<0.05);而利用實際切除肝臟比例推算出的剩余肝葉體積與實際測量的剩余肝葉體積相比,5 組的差異均無統計學意義(P>0.05)。此外,在術前測量的 5 項大鼠基本參數中,體長與全肝體積相關性最優,其回歸方程為:\begin{document}$\hat Y = - 27.667 + 0.899X$\end{document}。結論相較于理論切除肝臟比例,在大鼠部分肝切除術中,利用實際切除肝臟比例進行間接法計算得出的肝臟體積更精確。相較于體質量,體長與全肝體積具有更強的相關性。