引用本文： 冉江華, 鄭克譜, 李望, 張熙冰, 劉駁強, 李溫凱. CaMKⅡ表達調控對大鼠肝移植術后肝功能的影響. 中國普外基礎與臨床雜志, 2017, 24(4): 438-442. doi: 10.7507/1007-9424.201612040 復制
作為細胞內的第二信使，Ca2+ 是最先被發現的在缺血再灌注損傷過程中起作用的因子之一。它是通過鈣調素依賴蛋白激酶家族（calmodulin-dependent kinases casades，CaMK）來發揮作用的。CaMK 是一類依賴于 Ca2+ 及鈣調素存在而被激活進而發揮其生理功能的蛋白質，根據其結構及功能的不同，可將其分為 3 類，分別為 CaMKⅠ、Ⅱ、Ⅳ。其中 CaMKⅡ則具有自激活功能，即不依賴于其他蛋白激酶的存在，而依賴于 Ca2+ 及鈣調素（calmodulin，CaM）的存在維持其酶活性[1]，作為細胞中 Ca2+/CaM 信號通路的下游蛋白，不僅可以作用于離子通道，同時還可作用于某些轉錄因子，對細胞的增殖、分裂以及凋亡都可起到調控作用[2]。本實驗通過建立大鼠肝移植模型，并建立構建 CaMKⅡγ 蛋白和 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒表達體系，并將以上慢病毒載體注入肝移植術后大鼠體內，觀察其相應的肝功能變化。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
實驗用 SD 大鼠由昆明醫科大學實驗動物中心提供，供受體均為雄性，供受體各 100 只，體質量 250～280 g，飼養于昆明醫科大學動物實驗中心 SPF 級動物房。術后單籠飼養，術后 1～2 h 恢復進水，6 h 后自由進半流質飲食。飼養環境溫度為 22 ℃ 左右。
1.2 主要材料
構建 CaMKⅡγ 蛋白和 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒表達體系、慢病毒及慢病毒包裝表達體系均由昆明醫科大學附屬甘美醫院肝膽胰血管外科張熙冰贈送。
1.3 大鼠原位肝移植模型建立
采用文獻[3-4]的經典二袖套法建立 SD 至 SD 大鼠的同種異體原位肝移植模型。
1.4 實驗分組
將實驗 SD 大鼠供受體兩兩配對共計 100 對實驗 SD 大鼠，按照簡單隨機化的分組方法分為 5 組，每組 20 對，對肝移植術后的大鼠進行如下不同的處理，分別于大鼠肝移植術后 1、3、7 及 14 d 各組隨機處死 5 只大鼠，經下腔靜脈取靜脈血標本送檢。
1.4.1 CaMKⅡγ shRNA 組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注表達 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒載體，劑量為 1.0×108 TU/只，應用生理鹽水稀釋至 500 μL，并加入慢病毒感染増強劑 Polybrene（使慢病毒終濃度為8 ng/mL）。
1.4.2 CaMKⅡγ 蛋白組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注表達 CaMKⅡγ 蛋白的慢病毒載體，劑量為 1.0×108 TU/只，應用生理鹽水稀釋至 500 μL，并加入慢病毒感染増強劑 Polybrene（使慢病毒終濃度為 8 ng/mL）。
1.4.3 空載體 1 組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注表達 CaMKⅡγ shRNA 的空白慢病毒載體，劑量為 1.0×108 TU/只，應用生理鹽水稀釋至 500 μL，并加入慢病毒感染増強劑 Polybrene（使慢病毒終濃度為 8 ng/mL）。
1.4.4 空載體 2 組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注表達 CaMKⅡγ 蛋白的空白慢病毒載體，劑量為 1.0×108 TU/只，應用生理鹽水稀釋至 500 μL，并加入慢病毒感染増強劑 Polybrene（使慢病毒終濃度為 8 ng/mL）。
1.4.5 空白對照組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注 500 μL 生理鹽水。
1.5 術后監測
移植手術后將大鼠置于單籠飼養，觀察大鼠耳朵顏色及有無瘀斑，眼睛顏色及瞳孔大小，黃疽、飲食、排便情況以及活動狀態。
1.6 實驗取材
各組大鼠分別于肝移植術后 1、3、7 及 14 d 各時點隨機用乙醚麻醉5只大鼠，經下腔靜脈取靜脈血，盡可能取盡大鼠體內血液，一般可以采到 3～5 mL 全血。血樣離心（4℃，4 000 r/mim，10 min），取上清液在 –80℃ 冰箱保存待測，待標本齊備后行肝功能檢測。每一時點如有因手術技術、感染等原因導致死亡的動物，均給予補齊。
1.7 血清檢測
取 –80℃ 保存待測血清標本行肝功能檢測，采用全自動生化分析儀，用直接活力測定法測定血清丙氨酸氨基轉移酶（alanine transaminase，ALT）和天冬氨酸轉氨酶（aspartate aminotransferase，AST）水平。
1.8 統計學方法
用 SPSS 17.0 軟件包進行統計學處理。計量資料以均數±標準差（ ）表示，各組間均數和組內差異比較采用重復測量設計方差分析及t 檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 移植大鼠存活情況
移植手術后將大鼠置于單籠飼養，大鼠耳廓無瘀斑，瞳孔顏色及大小正常，無黃疸，飲食規律與正常大鼠無異，大小便正常，活動良好。
2.2 肝功能檢測結果
2.2.1 ALT 水平 術后 1 d，5 組間血清 ALT 水平比較差異無統計學意義（P>0.05），術后 3 d 各組的血清 ALT 水平均升高，與術后 1 d 比較，差異無統計學意義。術后 7 d 及以后 CaMKⅡγ shRNA 組、空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組的血清 ALT 水平均明顯下降，與前一時相比較差異有統計學意義（P<0.05），且以 CaMKⅡγ shRNA 組下降最明顯。CaMKⅡγ 蛋白組術后 7 d 血清 ALT 水平繼續升高，與前一時相比較差異有統計學意義（P<0.05）；且同期 ALT 水平 CaMKⅡγ 蛋白組明顯高于其他 4 組，差異有統計學意義（P<0.05）； CaMKⅡγ shRNA 組、空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組 4 組間比較，CaMKⅡγ shRNA 組的 ALT 水平明顯低于空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組，差異有統計學意義（P<0.05），空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組 3 組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表 1。
表1
各組大鼠肝移植術后不同時相血清 ALT 水平檢測結果（U/mL，
）
2.2.2 AST 水平 各組大鼠術后不同時相血清 AST 水平的變化基本同 ALT，見表 2。
表2
各組大鼠肝移植術后不同時相血清 AST 水平檢測結果（U/mL，
）
以上結果提示，特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路可有效降低大鼠肝移植術后的血清 ALT 及 AST 水平；而增強 CaMKⅡ信號通路則升高大鼠肝移植術后的血清 ALT 和 AST 水平。
3 討論
肝移植手術是終末期肝病患者有效的治療措施，而在此手術過程中，由于從供體上獲取肝臟直到植入受體這一段時間供肝處于缺血狀態，當開放流入道后即會發生缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，IRI）[5-7]。IRI 是由于各種因素引起的細胞或組織缺血和缺氧導致的損傷及恢復供血及供氧后損傷加重的病理過程[8]。研究[9-11]表明，在此過程中線粒體作為損傷的靶細胞器之一，在多種致傷因素的作用下發生滲透性移位，最終導致線粒體雙層膜之間的蛋白質如細胞色素 C（cytochrome C，Cyt C）和凋亡誘導因子（apoptosis inducing factor，AIF）進入細胞質，啟動細胞凋亡程序，引起細胞凋亡。
作為細胞內的第二信使，Ca2+ 是最早被發現的在細胞凋亡過程中起作用的因子之一。CaMK 是依賴于 Ca2+ 及 CaM 存在而被激活進而發揮其生理功能的蛋白質。其中的 CaMKⅡ則具有自激活功能，即不需依賴其他存在，只依賴 Ca2+ 及 CaM 的存在維持其酶活性[12-14]，作為細胞中 Ca2+/CaM 信號通路的下游效應蛋白，對細胞的增殖、分裂以及凋亡[15]都可起到調控作用。
有研究[16-17]表明，CaMKⅡ與細胞凋亡的發生具有非常密切的關系。在細胞層面上，過量表達的 CaMKⅡ可作為獨立的作用因素誘發巨噬細胞的凋亡[18]，而在通過病毒載體對 CaMKⅡγ mRNA 進行干擾，誘發 CaMKⅡγ 基因沉默的相同細胞中，即使在應用毒胡蘿卜內酯（thapsigargin）引發內質網應激，使細胞質 Ca2+ 水平升高后，線粒體滲透性移位，細胞凋亡率也明顯降低。在嗜水氣單胞菌誘導的細胞凋亡中，是通過改變胞內 Ca2+ 濃度以激活 CaM 和 calpain-2 再匯集于 CaMKⅡg，從而誘導 cAMP/PKA 介導 ERK1/2 的磷酸化，導致被感染腎的巨噬細胞發生 caspase-3 介導的細胞凋亡[19]。在 Roe 等[20]的研究中，使用衣霉素誘導內質網應激，結果發現心肌特異性過氧化物酶過表達的轉基因小鼠的器質性異常和細胞死亡被 CaMKⅡ抑制劑 KN93 推遲了。此外，另有研究[21-22]發現，在心肌細胞不可逆的缺血再灌注損傷后，CaMKⅡ將直接作用于線粒體，誘發線粒體凋亡及細胞凋亡，對其阻斷可減少心肌細胞的凋亡及壞死。
在基因表達層面上，分離自嵌入抗氧化 CaMKⅡδ 基因小鼠的血管平滑肌細胞凋亡發生率與正常小鼠相比明顯下降[23]。同樣是在小鼠心臟中，閉塞野生型和 CaMKⅡδ 基因敲除小鼠的左前降支 1 h 后再灌注不同的時間，對比發現 CaMKⅡδ 基因敲除小鼠的梗死面積較小，細胞凋亡較少，并且功能恢復較快[24]。在 CaMKⅡg 基因敲除小鼠的腎小管上皮細胞中，衣霉素誘發的細胞凋亡率明顯低于對照組，并且實驗組小鼠腎小管上皮細胞中的線粒體膜勢能的喪失以及線粒體凋亡率都明顯低于對照組小鼠[25-26]，因此研究者認為，CaMKⅡγ 在繼發于細胞內 Ca2+ 水平變化所導致的線粒體凋亡途徑中，是重要的效應蛋白，阻斷其表達可以明顯減少繼發于線粒體凋亡的細胞凋亡。
在本實驗中，在對 CaMKⅡ選擇性特異阻斷（CaMKⅡγ shRNA 組）后，肝移植大鼠術后血清 ALT 及 AST 水平均低于同時點對照組（空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組），差異有統計學意義（P<0.05）；而在使 CaMKⅡ選擇性表達上調（CaMKⅡγ 蛋白組）后，其血清 ALT 和 AST 的水平均高于同時點對照組（空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組），差異有統計學意義（P<0.05）；CaMKⅡ γ shRNA 及 CaMKⅡγ 蛋白的空載體組（空載體 1 組及空載體 2 組）與空白對照組的血清 ALT 及 AST 水平比較差異無統計學意義（P>0.05）。由此推斷，在正常肝移植術后，若能特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路，則可達到減少肝功能損害的目的。而這對于臨床肝移植來說無疑是非常具有指導意義的。因此，如何特異性阻斷肝細胞中的 CaMKⅡ信號通路將成為后續研究需要探索的重點。
目前有研究顯示，通過基因調控的方式可以特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路。Wang 等[2]研究發現，增強 MiR-152 基因的表達，可以提高機體細胞免疫的表達，降低機體白細胞介素-6（IL-6）的水平，其機制可能是通過阻斷 CaMKⅡ信號通路，阻斷細胞凋亡實現的。但以上實驗結果仍處于推測階段，相信對 CaMKⅡ信號通路研究的推進，在不久的將來能夠尋求到更好的特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路的方法，為我國肝移植事業做出更進一步的貢獻。
作為細胞內的第二信使，Ca2+ 是最先被發現的在缺血再灌注損傷過程中起作用的因子之一。它是通過鈣調素依賴蛋白激酶家族（calmodulin-dependent kinases casades，CaMK）來發揮作用的。CaMK 是一類依賴于 Ca2+ 及鈣調素存在而被激活進而發揮其生理功能的蛋白質，根據其結構及功能的不同，可將其分為 3 類，分別為 CaMKⅠ、Ⅱ、Ⅳ。其中 CaMKⅡ則具有自激活功能，即不依賴于其他蛋白激酶的存在，而依賴于 Ca2+ 及鈣調素（calmodulin，CaM）的存在維持其酶活性[1]，作為細胞中 Ca2+/CaM 信號通路的下游蛋白，不僅可以作用于離子通道，同時還可作用于某些轉錄因子，對細胞的增殖、分裂以及凋亡都可起到調控作用[2]。本實驗通過建立大鼠肝移植模型，并建立構建 CaMKⅡγ 蛋白和 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒表達體系，并將以上慢病毒載體注入肝移植術后大鼠體內，觀察其相應的肝功能變化。
1 材料與方法
1.1 實驗動物
實驗用 SD 大鼠由昆明醫科大學實驗動物中心提供，供受體均為雄性，供受體各 100 只，體質量 250～280 g，飼養于昆明醫科大學動物實驗中心 SPF 級動物房。術后單籠飼養，術后 1～2 h 恢復進水，6 h 后自由進半流質飲食。飼養環境溫度為 22 ℃ 左右。
1.2 主要材料
構建 CaMKⅡγ 蛋白和 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒表達體系、慢病毒及慢病毒包裝表達體系均由昆明醫科大學附屬甘美醫院肝膽胰血管外科張熙冰贈送。
1.3 大鼠原位肝移植模型建立
采用文獻[3-4]的經典二袖套法建立 SD 至 SD 大鼠的同種異體原位肝移植模型。
1.4 實驗分組
將實驗 SD 大鼠供受體兩兩配對共計 100 對實驗 SD 大鼠，按照簡單隨機化的分組方法分為 5 組，每組 20 對，對肝移植術后的大鼠進行如下不同的處理，分別于大鼠肝移植術后 1、3、7 及 14 d 各組隨機處死 5 只大鼠，經下腔靜脈取靜脈血標本送檢。
1.4.1 CaMKⅡγ shRNA 組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注表達 CaMKⅡγ shRNA 的慢病毒載體，劑量為 1.0×108 TU/只，應用生理鹽水稀釋至 500 μL，并加入慢病毒感染増強劑 Polybrene（使慢病毒終濃度為8 ng/mL）。
1.4.2 CaMKⅡγ 蛋白組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注表達 CaMKⅡγ 蛋白的慢病毒載體，劑量為 1.0×108 TU/只，應用生理鹽水稀釋至 500 μL，并加入慢病毒感染増強劑 Polybrene（使慢病毒終濃度為 8 ng/mL）。
1.4.3 空載體 1 組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注表達 CaMKⅡγ shRNA 的空白慢病毒載體，劑量為 1.0×108 TU/只，應用生理鹽水稀釋至 500 μL，并加入慢病毒感染増強劑 Polybrene（使慢病毒終濃度為 8 ng/mL）。
1.4.4 空載體 2 組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注表達 CaMKⅡγ 蛋白的空白慢病毒載體，劑量為 1.0×108 TU/只，應用生理鹽水稀釋至 500 μL，并加入慢病毒感染増強劑 Polybrene（使慢病毒終濃度為 8 ng/mL）。
1.4.5 空白對照組 SD 大鼠肝移植術后，通過盲腸靜脈灌注 500 μL 生理鹽水。
1.5 術后監測
移植手術后將大鼠置于單籠飼養，觀察大鼠耳朵顏色及有無瘀斑，眼睛顏色及瞳孔大小，黃疽、飲食、排便情況以及活動狀態。
1.6 實驗取材
各組大鼠分別于肝移植術后 1、3、7 及 14 d 各時點隨機用乙醚麻醉5只大鼠，經下腔靜脈取靜脈血，盡可能取盡大鼠體內血液，一般可以采到 3～5 mL 全血。血樣離心（4℃，4 000 r/mim，10 min），取上清液在 –80℃ 冰箱保存待測，待標本齊備后行肝功能檢測。每一時點如有因手術技術、感染等原因導致死亡的動物，均給予補齊。
1.7 血清檢測
取 –80℃ 保存待測血清標本行肝功能檢測，采用全自動生化分析儀，用直接活力測定法測定血清丙氨酸氨基轉移酶（alanine transaminase，ALT）和天冬氨酸轉氨酶（aspartate aminotransferase，AST）水平。
1.8 統計學方法
用 SPSS 17.0 軟件包進行統計學處理。計量資料以均數±標準差（ ）表示，各組間均數和組內差異比較采用重復測量設計方差分析及t 檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 移植大鼠存活情況
移植手術后將大鼠置于單籠飼養，大鼠耳廓無瘀斑，瞳孔顏色及大小正常，無黃疸，飲食規律與正常大鼠無異，大小便正常，活動良好。
2.2 肝功能檢測結果
2.2.1 ALT 水平 術后 1 d，5 組間血清 ALT 水平比較差異無統計學意義（P>0.05），術后 3 d 各組的血清 ALT 水平均升高，與術后 1 d 比較，差異無統計學意義。術后 7 d 及以后 CaMKⅡγ shRNA 組、空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組的血清 ALT 水平均明顯下降，與前一時相比較差異有統計學意義（P<0.05），且以 CaMKⅡγ shRNA 組下降最明顯。CaMKⅡγ 蛋白組術后 7 d 血清 ALT 水平繼續升高，與前一時相比較差異有統計學意義（P<0.05）；且同期 ALT 水平 CaMKⅡγ 蛋白組明顯高于其他 4 組，差異有統計學意義（P<0.05）； CaMKⅡγ shRNA 組、空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組 4 組間比較，CaMKⅡγ shRNA 組的 ALT 水平明顯低于空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組，差異有統計學意義（P<0.05），空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組 3 組間比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表 1。
表1
各組大鼠肝移植術后不同時相血清 ALT 水平檢測結果（U/mL，
）
2.2.2 AST 水平 各組大鼠術后不同時相血清 AST 水平的變化基本同 ALT，見表 2。
表2
各組大鼠肝移植術后不同時相血清 AST 水平檢測結果（U/mL，
）
以上結果提示，特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路可有效降低大鼠肝移植術后的血清 ALT 及 AST 水平；而增強 CaMKⅡ信號通路則升高大鼠肝移植術后的血清 ALT 和 AST 水平。
3 討論
肝移植手術是終末期肝病患者有效的治療措施，而在此手術過程中，由于從供體上獲取肝臟直到植入受體這一段時間供肝處于缺血狀態，當開放流入道后即會發生缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，IRI）[5-7]。IRI 是由于各種因素引起的細胞或組織缺血和缺氧導致的損傷及恢復供血及供氧后損傷加重的病理過程[8]。研究[9-11]表明，在此過程中線粒體作為損傷的靶細胞器之一，在多種致傷因素的作用下發生滲透性移位，最終導致線粒體雙層膜之間的蛋白質如細胞色素 C（cytochrome C，Cyt C）和凋亡誘導因子（apoptosis inducing factor，AIF）進入細胞質，啟動細胞凋亡程序，引起細胞凋亡。
作為細胞內的第二信使，Ca2+ 是最早被發現的在細胞凋亡過程中起作用的因子之一。CaMK 是依賴于 Ca2+ 及 CaM 存在而被激活進而發揮其生理功能的蛋白質。其中的 CaMKⅡ則具有自激活功能，即不需依賴其他存在，只依賴 Ca2+ 及 CaM 的存在維持其酶活性[12-14]，作為細胞中 Ca2+/CaM 信號通路的下游效應蛋白，對細胞的增殖、分裂以及凋亡[15]都可起到調控作用。
有研究[16-17]表明，CaMKⅡ與細胞凋亡的發生具有非常密切的關系。在細胞層面上，過量表達的 CaMKⅡ可作為獨立的作用因素誘發巨噬細胞的凋亡[18]，而在通過病毒載體對 CaMKⅡγ mRNA 進行干擾，誘發 CaMKⅡγ 基因沉默的相同細胞中，即使在應用毒胡蘿卜內酯（thapsigargin）引發內質網應激，使細胞質 Ca2+ 水平升高后，線粒體滲透性移位，細胞凋亡率也明顯降低。在嗜水氣單胞菌誘導的細胞凋亡中，是通過改變胞內 Ca2+ 濃度以激活 CaM 和 calpain-2 再匯集于 CaMKⅡg，從而誘導 cAMP/PKA 介導 ERK1/2 的磷酸化，導致被感染腎的巨噬細胞發生 caspase-3 介導的細胞凋亡[19]。在 Roe 等[20]的研究中，使用衣霉素誘導內質網應激，結果發現心肌特異性過氧化物酶過表達的轉基因小鼠的器質性異常和細胞死亡被 CaMKⅡ抑制劑 KN93 推遲了。此外，另有研究[21-22]發現，在心肌細胞不可逆的缺血再灌注損傷后，CaMKⅡ將直接作用于線粒體，誘發線粒體凋亡及細胞凋亡，對其阻斷可減少心肌細胞的凋亡及壞死。
在基因表達層面上，分離自嵌入抗氧化 CaMKⅡδ 基因小鼠的血管平滑肌細胞凋亡發生率與正常小鼠相比明顯下降[23]。同樣是在小鼠心臟中，閉塞野生型和 CaMKⅡδ 基因敲除小鼠的左前降支 1 h 后再灌注不同的時間，對比發現 CaMKⅡδ 基因敲除小鼠的梗死面積較小，細胞凋亡較少，并且功能恢復較快[24]。在 CaMKⅡg 基因敲除小鼠的腎小管上皮細胞中，衣霉素誘發的細胞凋亡率明顯低于對照組，并且實驗組小鼠腎小管上皮細胞中的線粒體膜勢能的喪失以及線粒體凋亡率都明顯低于對照組小鼠[25-26]，因此研究者認為，CaMKⅡγ 在繼發于細胞內 Ca2+ 水平變化所導致的線粒體凋亡途徑中，是重要的效應蛋白，阻斷其表達可以明顯減少繼發于線粒體凋亡的細胞凋亡。
在本實驗中，在對 CaMKⅡ選擇性特異阻斷（CaMKⅡγ shRNA 組）后，肝移植大鼠術后血清 ALT 及 AST 水平均低于同時點對照組（空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組），差異有統計學意義（P<0.05）；而在使 CaMKⅡ選擇性表達上調（CaMKⅡγ 蛋白組）后，其血清 ALT 和 AST 的水平均高于同時點對照組（空載體 1 組、空載體 2 組及空白對照組），差異有統計學意義（P<0.05）；CaMKⅡ γ shRNA 及 CaMKⅡγ 蛋白的空載體組（空載體 1 組及空載體 2 組）與空白對照組的血清 ALT 及 AST 水平比較差異無統計學意義（P>0.05）。由此推斷，在正常肝移植術后，若能特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路，則可達到減少肝功能損害的目的。而這對于臨床肝移植來說無疑是非常具有指導意義的。因此，如何特異性阻斷肝細胞中的 CaMKⅡ信號通路將成為后續研究需要探索的重點。
目前有研究顯示，通過基因調控的方式可以特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路。Wang 等[2]研究發現，增強 MiR-152 基因的表達，可以提高機體細胞免疫的表達，降低機體白細胞介素-6（IL-6）的水平，其機制可能是通過阻斷 CaMKⅡ信號通路，阻斷細胞凋亡實現的。但以上實驗結果仍處于推測階段，相信對 CaMKⅡ信號通路研究的推進，在不久的將來能夠尋求到更好的特異性阻斷 CaMKⅡ信號通路的方法，為我國肝移植事業做出更進一步的貢獻。
