本研究旨在通過優化人β2微球蛋白在大腸桿菌中的表達條件并對重組蛋白進行純化,以期獲得可溶性好、純度高的重組人β2微球蛋白(rhβ2M)。通過檢測誘導劑IPTG濃度、誘導溫度和誘導時間對rhβ2M可溶性表達的影響,確定最佳的誘導條件為IPTG終濃度0.8 mmol/L,誘導溫度25℃,誘導時間6 h。在最佳誘導條件下進行發酵培養,獲得可溶性rhβ2M占菌體總可溶蛋白含量的63.7%。對可溶性蛋白進行Ni Sepharose 6 Fast Flow親和層析純化,可獲得純度達95%以上的rhβ2M。Western blot分析表明,該蛋白具有與抗人β2M抗體特異反應的抗原特性。
從GenBank中檢索人源心肌肌鈣蛋白C亞基(cTnC)和心肌肌鈣蛋白I亞基(cTnI)編碼序列, 合成cTnC和cTnI第30至110氨基酸基因-cTnI(P), 并在兩者之間合成一段由15個氨基酸(G4S)3組成的接頭(linker)序列。構建原核表達載體pColdⅠ-cTnC-linker-TnI(P), 轉化大腸桿菌BL21(DE3), 用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導融合蛋白表達, 結果在大腸桿菌中成功實現了cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白的穩定可溶性高表達。經Ni2+柱純化后得到純度大于95%的cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白, 制備凍干品并采用萬孚飛測?心肌肌鈣蛋白I(cTnI)定量檢測試劑盒檢測其穩定性。cTnC-linker-TnI(P)凍干品在37℃可穩定保存10 d以上, 25℃、4℃穩定保存4個月以上。本研究獲得的cTnC-linker-TnI(P)融合蛋白活性高, 凍干品穩定性好, 為后續研究提供了穩定高效的生物原材料。