微囊泡(MVs)是指從細胞表面脫落或分泌的小圓球形膜樣結構, 含有母細胞來源脂質、蛋白和遺傳物質。近年來, MVs作為細胞間信息傳遞的新途徑正逐漸引起學者們關注。干細胞來源MVs通過細胞內化作用可轉移生物活性物質進入靶細胞, 在組織損傷模型中可重編程損傷組織細胞表型, 促進組織再生和修復。其作用機制與MVs富含生物活性脂質、抗凋亡因子、生長因子或細胞因子, 轉移mRNA和調控miRNA到損傷組織細胞, 調控靶細胞功能有關。因此, 開發干細胞來源MVs應用于組織再生和修復治療, 可作為一種安全有效的無細胞治療策略。
目的觀察探討人臍帶間充質干細胞源性微囊泡（hUMSC-MV）對高糖誘導下大鼠視網膜神經節細胞（RGC）損傷的保護作用及機制。 方法體外培養Sprague-Dawley大鼠RGC；超速離心法分離提取并鑒定hUMSC-MV；觀察hUMSC-MV與RGC的內化作用。實驗分為正常RGC對照組（A組）、高糖對照組（B組）、正常共培養組（C組）、高糖共培養組（D組）進行。A組細胞正常培養，B組細胞為33 mmol/L葡萄糖培養，C組細胞為hUMSC-MV培養，D組細胞為33 mmol/L葡萄糖、hUMSC-MV共培養。采用細胞計數CCK-8試劑盒測定各組RGC活性；采用膜聯蛋白（Annexin）Ⅴ/碘化丙啶（PI）測量各組RGC凋亡率。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）及蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測各組RGC內B-細胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bax、半胱天冬蛋白酶（Caspase）-3 mRNA和蛋白的相對表達量。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。 結果超速離心法提取的hUMSC-MV形態為單個或成簇的圓形膜性囊泡樣結構，直徑約為100～1000 nm。hUMSC-MV表面高表達CD44、CD29、CD73、CD105，陰性表達CD49f、第二型人類白血球抗原、CD34、CD45。大鼠RGC與hUMSCs-MV良好內化。CCK-8及Annexin Ⅴ/PI雙染法檢測結果顯示，B組細胞活性低于A、C、D組（F=107.92，P=0.000），B組細胞凋亡率高于A、C、D組，差異均有統計學意義（F=382.11，P=0.000）。RT-PCR及Western blot檢測結果顯示，B、D組RGC內Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表達（F=219.79、339.198、1 071.21，P=0.000、0.000、0.000）以及Bcl-2、Bax、裂解的Caspase-3、Caspase-3蛋白表達（F=544.28、295.79、533.18、224.75，P=0.000、0.000、0.000、0.000）均高于A、C組，差異有統計學意義。進一步兩兩比較，D組RGC內Bcl-2 mRNA和蛋白表達高于B組，差異有統計學意義（P＜0.05）；B組Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表達以及裂解的Caspase-3蛋白表達均高于D組，差異有統計學意義（P＜0.05）。 結論hUMSC-MV可通過降低高糖誘導下大鼠RGC內Bax、Caspase-3的表達及活化，增加Bcl-2表達發揮對RGC損傷的保護作用。
目的綜述現階段應用干細胞旁分泌效應治療膝部骨關節炎（osteoarthritis，OA）的研究進展。方法查閱近年來干細胞來源條件培養液、細胞外基質、外泌體及微囊泡在膝部 OA 及軟骨修復領域的相關基礎研究，并進行總結分析。結果干細胞旁分泌效應對膝部 OA 及關節軟骨損傷的治療效果，在不同層面的多項研究中已有所彰顯。其作用機制包括對關節腔內炎性反應、軟骨細胞凋亡、軟骨基質水解的有效抑制，以及促進軟骨基質合成、原位固有干細胞向軟骨細胞定向分化、并向損傷部位定向遷移等修復過程。結合組織工程學方法或基因修飾等手段能進一步提升療效。結論相較傳統干細胞療法，應用干細胞旁分泌效應產物治療膝部 OA 更為安全且經濟，具有較高的臨床轉化價值。