目的 探討皮膚成纖維細胞在生物反應器中批式和間歇換液培養過程的生長、擴增與代謝特性。方法 將幼兒包皮組織中分離皮膚成纖維細胞接種到含 5 mg/ ml微載體濃度的 1.5升 Celli Gen生物反應器中 ,測定在間歇換液培養和批式培養過程中細胞生長密度、葡萄糖消耗及乳酸生成 ,同時與方瓶和轉瓶中間歇換液培養結果進行比較。 結果 在生物反應器間歇換液培養過程中 ,成纖維細胞生長的最終密度達到 2 .0 8× 10 6 / ml,擴增 2 9.7倍 ,是批式培養的 1.81倍。與間歇換液的方瓶和轉瓶培養結果相比 ,由于消除了營養和貼壁表面的限制 ,細胞密度分別提高9.16倍和 1.4 3倍。 結論 利用生物反應器和微載體懸浮培養人皮膚成纖維細胞 ,是大量制備組織工程種子細胞的一種有效方法。
惡性氣道狹窄一般指氣道壁因各種原發及轉移性惡性腫瘤引起的氣道管腔狹窄，氣流受限，患者可出現不同程度的呼吸困難，甚至窒息死亡，嚴重影響了氣道狹窄患者的生活質量。隨著支氣管鏡介入技術的不斷發展，臨床醫師可通過支氣管鏡行消融、擴張、支架植入等多種介入治療手段再通氣道。其中，消融治療是最常使用的手段，而消融治療的方法包括冷、熱、光動力、局部放化療等。該文就近年來用于惡性氣道狹窄消融治療的各種手段的應用新進展進行綜述。
目的 構建三維預血管化微組織，探索三維共培養體系中人成纖維細胞（human fibroblasts，HFs）對人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）出芽和遷移的促進作用。方法 取HUVECs和HFs培養傳代至3～5代進行實驗。在二維共培養體系中，將HFs行PKH26染色且固定細胞密度后，與HUVECs以不同比例（1∶4、1∶1、4∶1）以及不同接種方式（兩種細胞間隔48 h順序接種、直接混合接種）共培養，熒光顯微鏡下觀察血管網絡形成情況。構建三維共培養體系，通過慢病毒轉染分別用綠色和紅色熒光蛋白標記HUVECs和HFs，將標記細胞接種于多孔微載體上，采用轉瓶動態培養，分別制備HF微組織、HUVEC微組織、HF-EC微組織和HF&EC微組織；低滲結晶紫染色法觀測微組織中細胞生長情況。將各微組織包埋于纖維蛋白凝膠中，激光共聚焦顯微鏡下觀察HF微組織和HUVEC微組織中細胞生長貼附情況，4種微組織出芽情況以及HF-EC微組織、HF&EC微組織芽體細胞組成、出芽數量及芽體長度。制備HFs條件培養基，觀察其對HUVEC微組織出芽的影響，以正常培養基培養作為對照。結果 二維共培養時HFs預培養有助于血管網狀結構形成與穩定，且當兩種細胞比例為1∶1時效果最佳。三維共培養時各微組織上細胞生長良好，HUVEC微組織無出芽，HF微組織、HF-EC微組織、HF&EC微組織均能出芽，具備良好血管化能力。HF-EC微組織芽體長度及出芽數目均優于HF&EC微組織（P<0.05）。共培養微組織中HF微組織先于HUVEC微組織出芽，兩者出芽軌跡一致，芽體由HFs和HUVECs組成。在HFs條件培養基中，HUVEC微組織也能出芽。結論 在轉瓶中按1∶1比例順序接種HFs和HUVECs可制備HF-HUVEC預血管化微組織，且在三維共培養中HFs能夠引導和促進HUVECs出芽及遷移。