目的為獲得持續高表達VEGF165的大鼠毛囊干細胞（rat hair follicle stem cells，rHFSCs），觀察慢病毒載體介導VEGF165基因對rHFSCs的轉染及其表達情況。 方法切取1周齡SD大鼠觸須部皮膚，Dispase酶和Ⅳ型膠原酶混合消化，顯微鏡下分離毛囊隆突部，組織塊培養rHFSCs；經Ⅳ型膠原差速貼壁純化后，分別取不同代次rHFSCs繪制細胞生長曲線；聯合應用免疫熒光染色及實時熒光定量PCR（real time quantitative PCR，RT-qPCR）檢測相關基因鑒定細胞。鈣轉法包裝pLV-內部核糖體進入位點（internal ribosome entry site，IRES）-VEGF165-增強型綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）（實驗組）和pLV-IRES-EGFP空載體（對照組）慢病毒，用兩組慢病毒轉染rHFSCs。倒置熒光顯微鏡下觀察實驗組綠色熒光表達情況，RT-PCR和Western blot法分別檢測VEGF165 mRNA和蛋白表達情況。 結果分離、培養、純化的rHFSCs呈典型“鋪路石”狀，貼壁較牢，克隆形成能力強；純化后細胞培養1～2 d處于生長潛伏期，5～6 d處于對數生長期；細胞免疫熒光染色可見毛囊干細胞標志物角蛋白15（cytokeratin 15，CK15）、整合素α6和整合素β1表達呈陽性；RT-qPCR檢測可見干細胞標志物CK15、CK19、整合素α6和整合素β1表達量高，而表皮干細胞標志物CD34和角質形成細胞標志物CK10表達量均較低。倒置熒光顯微鏡觀察示，實驗組慢病毒介導VEGF165基因轉染14 d后轉染效率可達85.76%±1.91%；RT-PCR和Western blot檢測示，實驗組VEGF165 mRNA和蛋白表達均呈陽性，對照組均呈陰性。 結論經顯微鏡聯合組織塊分離培養、Ⅳ型膠原差速貼壁篩選后，可得到高純度rHFSCs，細胞增殖能力強。慢病毒介導的VEGF165基因修飾方法可成功轉染并得到高表達VEGF165 mRNA和蛋白的rHFSCs，可為組織工程構建人工毛囊、血管及皮膚等提供良好的種子細胞。
目的構建 BMP-2 明膠/殼聚糖水凝膠緩釋系統，與誘導多能干細胞（induced pluripotent stem cells，iPS）來源 MSCs 復合種植至羥基磷灰石（hydroxyapatite，HA）/二氧化鋯（zirconium dioxide，ZrO2）生物多孔泡沫陶瓷材料，體外共培養，探索緩釋系統對 iPS-MSCs 成骨分化的作用。方法運用油包水相溶液制備 BMP-2 明膠/殼聚糖水凝膠微球，檢測微球的藥物包封率、載藥率和體外緩釋速率。建立 HA/ZrO2 多孔生物泡沫陶瓷材料復合 iPS-MSCs 及 BMP-2 明膠/殼聚糖水凝膠緩釋系統共培養體系，作為實驗組；以未復合 BMP-2 明膠/殼聚糖水凝膠緩釋系統的細胞-支架復合物作為對照組。兩組培養 3、7、10、14 d，檢測細胞的 ALP 分泌量，RT-PCR 檢測核心結合因子 α1（core binding factor α1，Cbfa1）、Ⅰ型膠原和鋅指結構轉錄因子（Osterix，OSX）基因表達水平；培養 14 d 時行免疫組織化學染色觀察Ⅰ型膠原表達，并通過掃描電鏡觀察細胞爬行及黏附狀態。結果BMP-2 明膠/殼聚糖水凝膠緩釋系統具有較好的藥物包封率及載藥率，可延長 BMP-2 的活性時間。共培養體系體外培養各時間點實驗組 ALP 分泌量及 Cbfa1、Ⅰ型膠原、OSX 基因相對表達量均顯著高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。免疫組織化學染色觀察示，實驗組熒光數量明顯多于對照組，即Ⅰ型膠原表達水平高于對照組；細胞能較均勻地分布于材料上，細胞形態良好。掃描電鏡觀察示緩釋系統能較好地黏附于細胞之間。結論iPS-MSCs 具有促成骨分化能力，在 BMP-2 明膠/殼聚糖水凝膠緩釋系統作用下其促成骨能力顯著增強。iPS-MSCs 與緩釋系統結合后能良好黏附于材料上，且細胞活性較好。