目的 探討血紅素氧合酶 1（heme oxygenase 1，HO-1）對 TNF-α 誘導的人退變椎間盤髓核細胞凋亡的作用及其可能的分子機制。 方法 取腰椎間盤突出癥患者自愿捐贈的椎間盤組織，體外培養人退變髓核細胞并傳代，取第 3 代細胞進行實驗。采用細胞計數試劑盒 8 測定不同濃度（10、20、50、100 和 200 ng/mL）TNF-α 對髓核細胞活性的影響，篩選最佳刺激濃度進行下一步實驗。將髓核細胞分成 4 組，分別采用單純基礎培養液（對照組）、TNF-α 刺激（TNF-α 組）、TNF-α 和 CoPP 10 μmol/L 刺激（CoPP 組）、TNF-α 和 ZnPP 15 μmol/L 刺激（ZnPP 組）培養，24 h 后采用 Hoechst 染色以及流式細胞儀檢測細胞凋亡；Western blot 檢測凋亡相關蛋白活化型 Caspase-3（cleaved Caspase-3）、上皮膜蛋白 1（epithelial membrane protein 1，EMP-1）以及 HO-1、p-P65 的表達。為進一步探討 HO-1 對髓核細胞凋亡的潛在分子機制，取髓核細胞分別采用 TNF-α 刺激（TNF-α 刺激組）以及 TNF-α 和吡咯烷二硫基甲酸（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）5 μmol/L 刺激（TNF-α+PDTC 刺激組）培養 24 h，采用流式細胞儀檢測髓核細胞凋亡率。 結果 經檢測確定 TNF-α 最佳抑制濃度為 100 ng/mL。Hoechst 染色示，對照組和 CoPP 組凋亡細胞較少；TNF-α 組和 ZnPP 組可見凋亡樣改變細胞核，其中 ZnPP 組最顯著。流式細胞儀檢測示，與對照組相比，TNF-α 組、CoPP 組及 ZnPP 組細胞凋亡率均顯著提高（P<0.05）；與 TNF-α 組相比，CoPP 組細胞凋亡率顯著降低（P<0.05），而 ZnPP 組顯著提高（P<0.05）。Western blot 檢測示，與對照組相比，TNF-α 組 HO-1 蛋白表達降低，cleaved Caspase-3、EMP-1 及 p-P65 蛋白表達升高（P<0.05）。與 TNF-α 組相比，CoPP 組 HO-1 蛋白表達明顯升高，cleaved Caspase-3、EMP-1、p-P65 蛋白表達明顯降低（P<0.05）；而 ZnPP 組 HO-1 蛋白表達明顯降低（P<0.05），cleaved Caspase-3、EMP-1 蛋白表達增高（P<0.05），p-P65 蛋白表達無明顯變化（P>0.05）。與 TNF-α 刺激組相比，TNF-α+PDTC 刺激組細胞凋亡率明顯降低（t=3.076，P=0.031）。 結論 HO-1 能夠抑制 TNF-α 誘導的人椎間盤髓核細胞凋亡，其機制可能是通過調控 NF-кB 通路得以實現。
目的探討內質網應激對吸煙誘導的髓核細胞凋亡與炎性反應的影響。方法以 2016 年 10 月—2018 年 10 月 25 例接受椎間盤摘除術的頸椎間盤突出癥患者為研究對象，分為吸煙組（14 例）和非吸煙組（11 例）。兩組患者年齡、性別、突出節段、Pfirrmann 分級比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。將術中獲取的髓核組織，行 TUNEL 染色和 Western blot 檢測，觀察細胞凋亡情況。然后，采用酶序貫消化法分離培養髓核細胞并傳代，取第 3 代細胞行 ELISA 檢測炎性因子 IL-1β 和 TNF-α 含量，免疫熒光染色觀察細胞中 P65 核轉移情況，Western blot 檢測內質網應激相關蛋白 GRP78 和 CHOP 表達，透射電鏡觀察細胞內質網超微結構。最后，為驗證內質網調控作用，采用特異性抑制劑 4-PBA 處理吸煙組髓核細胞后，Western blot 檢測 GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α 及 P65 蛋白相對表達量，流式細胞術檢測細胞凋亡率；并以吸煙組未作處理的髓核細胞作對照。結果髓核組織觀測顯示，吸煙組細胞凋亡率及凋亡相關蛋白 Caspase-3 和 PARP 相對表達量均明顯高于非吸煙組（P<0.05）。髓核細胞觀測顯示，吸煙組髓核細胞分泌 IL-1β、TNF-α 水平以及 GRP78、CHOP 蛋白相對表達量均明顯高于非吸煙組（P<0.05）；免疫熒光染色示吸煙組細胞 P65 主要表達在細胞核，而非吸煙組在細胞質；透射電鏡觀察顯示，與非吸煙組相比，吸煙組內質網處于應激損傷狀態。吸煙組髓核細胞經 4-PBA 處理后，GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α 及 P65 蛋白相對表達量以及細胞凋亡率均較處理前明顯降低（P<0.05）。結論吸煙可通過內質網應激導致髓核細胞凋亡和炎性反應加劇，抑制內質網應激有望成為延緩吸煙導致椎間盤退變的新靶點。