引用本文： 王煥明, 胡飛, 羅敏華, 趙非, 陳俊, 熊玉波. 人類皰疹病毒 6B 與難治性顳葉內側癲癇的相關性研究. 癲癇雜志, 2020, 6(4): 315-319. doi: 10.7507/2096-0247.20200050 復制
人類皰疹病毒 6（Human herpesvirus-6, HHV-6）屬于單純皰疹病毒，與 HCMV 和 HHV-7 一致。HHV-6 分為 A、B 兩組，從絕大多數健康成年人以及兒童急疹患者中分離的 HHV-6 為 B 組，既往研究發現 HHV-6 感染與幼兒急疹、腦炎、多發性硬化、神經膠質瘤和腦動脈硬化有關[1]。本研究擬采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Polymerase chain reaction, PCR）和逆轉錄 PCR 檢測方法，檢測 42 例難治性顳葉內側癲癇（Medial temporal lobe epilepsy, MTLE）患者和 17 例對照組腦組織樣本中 HHV-6B 含量，以探討 HHV-6B 在難治性 MTLE 發病過程中的可能機制，從而為難治性 MTLE 的治療提供新的途徑。
1 材料與方法
1.1 標本來源
收集 2012 年 1 月—2018 年 12 月武漢腦科醫院神經外科經手術治療的 42 例難治性 MTLE 患者的海馬、杏仁核和海馬旁回標本，17 例急診收治的腦外傷和腦出血患者的腦組織標本作為對照組。所有標本組織經液氮速凍，然后轉移至-80℃ 低溫冰箱保存備用。該研究得到武漢腦科醫院倫理委員會的審批，且所有患者均已簽署知情同意書。
1.2 檢測方法
1.2.1 總 RNA 抽提
取勻漿管，加入 1 mL 的 Trizol Reagent，置冰上預冷。取 100 mg 腦組織，加入到勻漿管中。勻漿儀充分研磨直至無可見腦組織塊。12 000 rpm 離心 10 min 取上清液。加入 250 μL 三氯甲烷，顛倒離心管 15 s，充分混勻，靜置 3 min。4℃ 下 12 000 rpm 離心 10 min。將上清液轉移到一個新的離心管中，加入 0.8 倍體積的異丙醇，顛倒混勻。?20℃ 放置 15 min。4℃ 下 12 000 rpm 離心 10 min，管底的白色沉淀即為 RNA。吸除液體，加入 75% 乙醇 1.5 mL 洗滌沉淀。4℃ 下 12 000 rpm 離心 5 min。將液體吸除干凈，將離心管置于超凈臺上吹 3 min。加入 15 μL 無 RNA 酶的水溶解 RNA。55℃ 孵育 5 min。使用 Nanodrop 2000 檢測 RNA 濃度及純度：儀器空白調零后取 2.5 μL 待測 RNA 溶液于檢測基座上，放下樣品臂，檢測吸光值。將濃度過高的 RNA 進行適當比例的稀釋，使其終濃度為 200 ng/μL。
1.2.2 反轉錄
取一 PCR 管，加入含 2 μg RNA 的溶液。加入 1 μL Oligo(dT)18。用無核糖核酸酶的去離子水補足至 12 μL。于 PCR 儀上 65℃ 保溫 5 min，迅速置冰上冷卻。依次加入 4 μL 5× Reaction Buffer，2 μL 10mM dNTP Mix，1 μL RiboLock RNAase 抑制劑（20 U/μL)）和 1 μL RevertAi M-MuLV 逆轉錄酶 (200U/μL)，用移液器抽吸混勻。于 PCR 儀上 42℃ 保溫 60 min，結束后 70℃ 保溫 5 min 滅活反轉錄酶。
1.2.3 定量
PCR 取 0.2 mL PCR 管，配制反應體系，每個反轉錄產物配制 3 管（2× qPCR Mix 12.5 μL；7.5 μM 基因引物 2.0 μl；反轉錄產物 2.5 μL；ddH2O 8.0 μL）PCR 擴增：預變性 95℃，10 min；循環（40 次）95℃，15 s→60℃，60 s；熔解曲線 60℃→95℃，每 15 s 升溫 0.3℃。
1.2.4 結果處理（ΔΔCT 法）
A=CT（目的基因，待測樣本）? CT（內標基因，待測樣本）；B=CT（目的基因，對照樣本）? CT（內標基因，對照樣本），K=A?B，表達倍數=2?K。
1.2.5 檢測
為了檢測 HHV-6B 在腦組織標本中的存在情況，我們檢測了 HHV-6B 的三個基因片段：U12、U90 和 U100。引物設計見表 1。擴增曲線見圖 1。
表1
人類皰疹病毒-6B 聚合酶鏈式反應引物設計
Table1.
Primer design of human herpes virus-6B polymerase chain reaction
圖1
HHV-6B 的三個基因片段（U12、U90 和 U100）擴增曲線
Figure1.
Amplification curve of three gene segments(U12, U90 and U100) of HHV-6B
1.3 統計學方法
運用 SPSS20.0 軟件進行分析，計數資料用 χ2 檢驗或 Fisher 確切概率法，計量資料用平均數±標準差表示，采用 t 檢驗或秩和檢驗，以 P 值<0.05 為差異具有統計學意義。
2 結果
2.1 臨床特征
42 例難治性 MTLE 患者中，男 30 例，女 12 例；年齡 9～60 歲，平均（26.4±10.07）歲。病程 3～10 年，平均（5.4±2.54）年。10 例（23.8%）患者有高熱驚厥病史，2 例（4.8%）有顱腦外傷史，2 例（4.8%）有腦炎腦膜炎病史。臨床表現為復雜部分性發作 18 例（42.9%），全身強直-陣攣性發作發作 20 例（47.6%），部分性發作繼發全身強直-陣攣性發作 4 例 (9.5%)。視頻腦電圖（VEEG）監測結果均提示一側顳葉有異常放電，對所有患者行前顳葉切除術（包括大部分海馬和杏仁核）。所有患者術后病理檢查均證實海馬硬化的診斷，術后 1 年以上的隨訪發現 38 例（90.5%）達到癲癇無發作，4 例（9.5%）術后 Engle’s 評級提示較術前顯著改善。17 例對照組患者中，男 12 例，女 5 例，年齡 40～76 歲，平均（66.8±15.16）歲。其中顱腦外傷 10 例，腦出血 7 例。
2.2 人類皰疹病毒 DNA 和人類皰疹病毒-6B mRNA 檢測
在 17 例（40.5%）MTLE 患者的 30 個腦組織（海馬或杏仁核或海馬旁回）標本中檢測到 HHV-6 DNA 的存在：12 例海馬中檢測到 HHV-6 DNA 的存在，15 例杏仁核組織中檢測到 HHV-6 DNA 的存在，3 例海馬旁回中檢測到 HHV-6 DNA 的存在。但僅在 1 例腦出血患者和 1 例腦外傷患者腦組織標本檢測到 HHV-6 DNA 的存在（11.8%），兩組之間差異具有統計學意義（P<0.01）。為了明確這 30 個腦組織標本中 HHV-6 的亞型，我們采用 PCR-限制性片段多態性法 (PCR-restriction fragment polymorphism，PCR-RFLP) 對 HHV-6 DNA 進行分析，結果發現 15 個標本含有 HHV-6B，但其余 15 個標本的 HHV-6 無法進行分類。
通過比較 MTLE 患者的 HHV-6 DNA 含量與對照組患者的 HHV-6 DNA 含量，我們發現 MTLE 患者的 HHV-6 DNA 含量更高，兩組間差異具有統計學意義（P<0.01）。此外，我們還發現 HHV-6B mRNA 在所有 30 個檢測出 HHV-6 DNA 的標本中均有表達，而在未檢測出 HHV-6 DNA 的標本中無表達。見圖 2。
圖2
顳葉內側癲癇和對照組患者腦組織 HHV-6 DNA 含量對比
Figure2.
Comparison of HHV-6 DNA contents in the MTLE and non-MTLE brain tissue specimens
2.3 人類皰疹病毒-6 陽性和陰性顳葉內側癲癇患者的臨床特點比較
由于 HHV-6 DNA 在 MTLE 患者中的含量較對照組高，我們比較了 HHV-6 陽性和 HHV-6 陰性的 MTLE 患者的臨床特點和基因表達的水平，結果發現年齡是影響顳葉內側癲癇患者 HHV-6 表達的唯一臨床因素，年齡大的患者 HHV-6 的表達水平顯著高于年齡小的患者，其他因素，如性別，發病年齡和可能病因均對 HHV-6 的表達水平無影響。見表 2。
表2
人類皰疹病毒-6 陽性和陰性顳葉內側癲癇患者的臨床特點對比（例）
Table2.
Comparison of clinical characteristics in the HHV-6 positive and HHV-6 negative MTLE （n）
3 討論
HHV-6 是一種常見的 HHV,具有較明顯的嗜神經特性,可引起多種神經系統疾病如腦炎腦膜炎、多發性硬化、癲癇等[2-5]。病毒在初次感染機體后可終生潛伏于被感染者的外周血單個核細胞、唾液腺和中樞神經系統中。HHV-6 主要感染星形膠質細胞、少突膠質細胞和小膠質細胞，可損傷中樞神經系統的血管內皮細胞。病毒以直接侵犯機體的形式引起疾病，也可再活化而致病。多種病原體，如麻疹病毒、流感病毒、HHV-7 等均可激活潛伏的 HHV-6 而引發癲癇、腦炎、腦膜炎等。據文獻報道，HHV-6 DNA 在海馬區呈高表達，病毒不是侵犯單個細胞，而是感染成簇的膠質細胞，可能是病毒的激活和復制與局部腦組織的內環境有關[6, 7]。
HHV-6 主要感染 6 月齡～2 歲嬰幼兒，與嬰幼兒和兒童的熱性驚厥有關，同時也是幼兒急疹的病原體。幼兒急疹的特征是持續高熱 3～5 d，熱退疹出，部分是由于 HHV-6 初次感染機體引起，這些病例中約 13%有驚厥發作。既往研究認為，幼兒急疹時的驚厥是由高熱引起的。最近，國外有研究發現部分病例是由于 HHV-6 侵入中樞神經系統，引起輕微腦炎、腦病或其他更嚴重的并發癥而致驚厥發作[8]。
HHV-6 首先是由淋巴增生性疾病患者的外周血中分離得到，屬 HHV β 亞組，除可引起神經系統的急性疾病之外，還可建立潛伏感染和多種刺激下的再激活。HHV-6 有兩種類型：6A 和 6B 型。HHV-6 感染一般沒有臨床癥狀，很少會引起嚴重的綜合征。在有免疫抑制的患者中，病毒在其體內活動會導致嚴重的腦膜炎[9]。HHV-6 已被證實是多發性硬化癥的一個可能病因[10]。近年來，多項研究結果表明，HHV-6 可能通過參與大腦局灶性皮質發育不良（FCD）、觸發顳葉癲癇、誘導中樞神經系統的炎癥反應等方式參與癲癇的發生和發展。
研究顯示 HHV-6 感染與熱性驚厥有明顯的相關性，HHV-6 在癲癇發作的機制中發揮著重要作用，潛伏在神經系統中的 HHV-6 重新激活可引起器官功能障礙，包括邊緣葉、腦干和海馬的損傷等。近年來，較多研究發現 HHV-6 感染與 FCD 存在緊密聯系，同時 HHV-6 可攻擊中樞神經膠質細胞，引起代謝與免疫紊亂；此外，HHV-6 與顳葉癲癇和癲癇持續狀態也存在一定的關聯[11-13]。
MTLE 是難治性癲癇的最常見的形式之一，好發于具有長期發熱性癲癇發作病史的患兒中，而其發病原因尚不明確，證據表明 HHV-6 感染可能是 MTLE 的病因之一。有研究通過 PCR 技術檢測 MTLE 患者手術切除的腦組織標本發現，HHV-6 DNA 表達量陽性率高達 35%[14]。通過對前顳葉切除標本的研究發現，2/3 的 MTLE 海馬硬化患者的海馬星形細胞中 HHV-6B 的復制活躍，但其他癲癇類型中則不存在這種現象[15-17]。
本研究中，我們選取了 42 例難治性 MTLE 患者和 17 例非 MTLE 對照組的腦組織標本，采用實時熒光定量 PCR 和逆轉錄 PCR 檢測切除的海馬、杏仁核和海馬旁回組織中的 HHV-6 病毒的 DNA 和 mRNA，結果發現 HHV-6 DNA 在 MTLE 患者中的檢出率（40.48%）明顯高于對照組患者（11.7%），且 30 個 HHV-6 陽性標本中有 15 個檢測到 HHV-6B DNA 的存在，同時 HHV-6B mRNA 在所有 30 個檢測出 HHV-6 DNA 的標本中均有表達，而在未檢測出 HHV-6 DNA 的標本中無表達。年齡是唯一影響 MTLE 患者 HHV-6 表達水平的臨床因素，其他如性別、發病年齡和可能病因均不影響 HHV-6 的表達水平。Donati 等[15]應用實時定量 PCR、蛋白免疫印跡分析和原位免疫組織化學技術來檢測和描繪癲癇手術標本中的 HHV-6 感染，結果顯示在部分患者的海馬和顳葉區域檢測到 HHV-6 的高表達。而進一步研究從 MTLE 患者的海馬中分離出原代人星形膠質細胞，經過體外培養后也證明了 HHV-6 蛋白的高表達。這可能是通過未知的機制使這些潛在的 HHV-6 感染細胞中的再激活。這一觀察結果表明，在 MTLE 患者中，HHV-6 復制的再活化可能是癲癇發作的觸發因素；同時，潛伏在中樞神經系統的 HHV-6 病毒對腦組織持續低水平的感染也可能引起神經慢性損傷而導致癲癇發作。
研究發現，HHV-6B DNA 陽性的 MTLE 患者的杏仁核單核細胞趨化因子-1（MCP-1）和膠質細胞酸性蛋白（GFAP）較陰性患者明顯增高，提示 HHV-6B 在 MTLE 發病中的基因表達上具有重要作用[18]。同時，HHV-6B 活躍復制在其他綜合征中也有所發現，其他病毒也有類似活躍復制的現象，有學者認為 HHV-6B 是通過阻斷星形細胞內興奮性氨基酸的轉運而發揮其興奮性神經毒性[19]。還有研究發現 ApoE4 有利于 HHV-6B 在顳葉癲癇患者的復制好基因表達，從而增加患者癲癇發作的頻率[2]。盡管在顳葉內側硬化患者切除的標本中未發現典型的炎性改變，但炎性遞質在顳葉內側神經元損傷中可能還是起到了一定的作用。若能夠明確早期的病毒感染與熱性驚厥及其后出現的難治性 MTLE 之間的關系，則有可能為難治性 MTLE 的治療提供一個新途徑。
人類皰疹病毒 6（Human herpesvirus-6, HHV-6）屬于單純皰疹病毒，與 HCMV 和 HHV-7 一致。HHV-6 分為 A、B 兩組，從絕大多數健康成年人以及兒童急疹患者中分離的 HHV-6 為 B 組，既往研究發現 HHV-6 感染與幼兒急疹、腦炎、多發性硬化、神經膠質瘤和腦動脈硬化有關[1]。本研究擬采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Polymerase chain reaction, PCR）和逆轉錄 PCR 檢測方法，檢測 42 例難治性顳葉內側癲癇（Medial temporal lobe epilepsy, MTLE）患者和 17 例對照組腦組織樣本中 HHV-6B 含量，以探討 HHV-6B 在難治性 MTLE 發病過程中的可能機制，從而為難治性 MTLE 的治療提供新的途徑。
1 材料與方法
1.1 標本來源
收集 2012 年 1 月—2018 年 12 月武漢腦科醫院神經外科經手術治療的 42 例難治性 MTLE 患者的海馬、杏仁核和海馬旁回標本，17 例急診收治的腦外傷和腦出血患者的腦組織標本作為對照組。所有標本組織經液氮速凍，然后轉移至-80℃ 低溫冰箱保存備用。該研究得到武漢腦科醫院倫理委員會的審批，且所有患者均已簽署知情同意書。
1.2 檢測方法
1.2.1 總 RNA 抽提
取勻漿管，加入 1 mL 的 Trizol Reagent，置冰上預冷。取 100 mg 腦組織，加入到勻漿管中。勻漿儀充分研磨直至無可見腦組織塊。12 000 rpm 離心 10 min 取上清液。加入 250 μL 三氯甲烷，顛倒離心管 15 s，充分混勻，靜置 3 min。4℃ 下 12 000 rpm 離心 10 min。將上清液轉移到一個新的離心管中，加入 0.8 倍體積的異丙醇，顛倒混勻。?20℃ 放置 15 min。4℃ 下 12 000 rpm 離心 10 min，管底的白色沉淀即為 RNA。吸除液體，加入 75% 乙醇 1.5 mL 洗滌沉淀。4℃ 下 12 000 rpm 離心 5 min。將液體吸除干凈，將離心管置于超凈臺上吹 3 min。加入 15 μL 無 RNA 酶的水溶解 RNA。55℃ 孵育 5 min。使用 Nanodrop 2000 檢測 RNA 濃度及純度：儀器空白調零后取 2.5 μL 待測 RNA 溶液于檢測基座上，放下樣品臂，檢測吸光值。將濃度過高的 RNA 進行適當比例的稀釋，使其終濃度為 200 ng/μL。
1.2.2 反轉錄
取一 PCR 管，加入含 2 μg RNA 的溶液。加入 1 μL Oligo(dT)18。用無核糖核酸酶的去離子水補足至 12 μL。于 PCR 儀上 65℃ 保溫 5 min，迅速置冰上冷卻。依次加入 4 μL 5× Reaction Buffer，2 μL 10mM dNTP Mix，1 μL RiboLock RNAase 抑制劑（20 U/μL)）和 1 μL RevertAi M-MuLV 逆轉錄酶 (200U/μL)，用移液器抽吸混勻。于 PCR 儀上 42℃ 保溫 60 min，結束后 70℃ 保溫 5 min 滅活反轉錄酶。
1.2.3 定量
PCR 取 0.2 mL PCR 管，配制反應體系，每個反轉錄產物配制 3 管（2× qPCR Mix 12.5 μL；7.5 μM 基因引物 2.0 μl；反轉錄產物 2.5 μL；ddH2O 8.0 μL）PCR 擴增：預變性 95℃，10 min；循環（40 次）95℃，15 s→60℃，60 s；熔解曲線 60℃→95℃，每 15 s 升溫 0.3℃。
1.2.4 結果處理（ΔΔCT 法）
A=CT（目的基因，待測樣本）? CT（內標基因，待測樣本）；B=CT（目的基因，對照樣本）? CT（內標基因，對照樣本），K=A?B，表達倍數=2?K。
1.2.5 檢測
為了檢測 HHV-6B 在腦組織標本中的存在情況，我們檢測了 HHV-6B 的三個基因片段：U12、U90 和 U100。引物設計見表 1。擴增曲線見圖 1。
表1
人類皰疹病毒-6B 聚合酶鏈式反應引物設計
Table1.
Primer design of human herpes virus-6B polymerase chain reaction
圖1
HHV-6B 的三個基因片段（U12、U90 和 U100）擴增曲線
Figure1.
Amplification curve of three gene segments(U12, U90 and U100) of HHV-6B
1.3 統計學方法
運用 SPSS20.0 軟件進行分析，計數資料用 χ2 檢驗或 Fisher 確切概率法，計量資料用平均數±標準差表示，采用 t 檢驗或秩和檢驗，以 P 值<0.05 為差異具有統計學意義。
2 結果
2.1 臨床特征
42 例難治性 MTLE 患者中，男 30 例，女 12 例；年齡 9～60 歲，平均（26.4±10.07）歲。病程 3～10 年，平均（5.4±2.54）年。10 例（23.8%）患者有高熱驚厥病史，2 例（4.8%）有顱腦外傷史，2 例（4.8%）有腦炎腦膜炎病史。臨床表現為復雜部分性發作 18 例（42.9%），全身強直-陣攣性發作發作 20 例（47.6%），部分性發作繼發全身強直-陣攣性發作 4 例 (9.5%)。視頻腦電圖（VEEG）監測結果均提示一側顳葉有異常放電，對所有患者行前顳葉切除術（包括大部分海馬和杏仁核）。所有患者術后病理檢查均證實海馬硬化的診斷，術后 1 年以上的隨訪發現 38 例（90.5%）達到癲癇無發作，4 例（9.5%）術后 Engle’s 評級提示較術前顯著改善。17 例對照組患者中，男 12 例，女 5 例，年齡 40～76 歲，平均（66.8±15.16）歲。其中顱腦外傷 10 例，腦出血 7 例。
2.2 人類皰疹病毒 DNA 和人類皰疹病毒-6B mRNA 檢測
在 17 例（40.5%）MTLE 患者的 30 個腦組織（海馬或杏仁核或海馬旁回）標本中檢測到 HHV-6 DNA 的存在：12 例海馬中檢測到 HHV-6 DNA 的存在，15 例杏仁核組織中檢測到 HHV-6 DNA 的存在，3 例海馬旁回中檢測到 HHV-6 DNA 的存在。但僅在 1 例腦出血患者和 1 例腦外傷患者腦組織標本檢測到 HHV-6 DNA 的存在（11.8%），兩組之間差異具有統計學意義（P<0.01）。為了明確這 30 個腦組織標本中 HHV-6 的亞型，我們采用 PCR-限制性片段多態性法 (PCR-restriction fragment polymorphism，PCR-RFLP) 對 HHV-6 DNA 進行分析，結果發現 15 個標本含有 HHV-6B，但其余 15 個標本的 HHV-6 無法進行分類。
通過比較 MTLE 患者的 HHV-6 DNA 含量與對照組患者的 HHV-6 DNA 含量，我們發現 MTLE 患者的 HHV-6 DNA 含量更高，兩組間差異具有統計學意義（P<0.01）。此外，我們還發現 HHV-6B mRNA 在所有 30 個檢測出 HHV-6 DNA 的標本中均有表達，而在未檢測出 HHV-6 DNA 的標本中無表達。見圖 2。
圖2
顳葉內側癲癇和對照組患者腦組織 HHV-6 DNA 含量對比
Figure2.
Comparison of HHV-6 DNA contents in the MTLE and non-MTLE brain tissue specimens
2.3 人類皰疹病毒-6 陽性和陰性顳葉內側癲癇患者的臨床特點比較
由于 HHV-6 DNA 在 MTLE 患者中的含量較對照組高，我們比較了 HHV-6 陽性和 HHV-6 陰性的 MTLE 患者的臨床特點和基因表達的水平，結果發現年齡是影響顳葉內側癲癇患者 HHV-6 表達的唯一臨床因素，年齡大的患者 HHV-6 的表達水平顯著高于年齡小的患者，其他因素，如性別，發病年齡和可能病因均對 HHV-6 的表達水平無影響。見表 2。
表2
人類皰疹病毒-6 陽性和陰性顳葉內側癲癇患者的臨床特點對比（例）
Table2.
Comparison of clinical characteristics in the HHV-6 positive and HHV-6 negative MTLE （n）
3 討論
HHV-6 是一種常見的 HHV,具有較明顯的嗜神經特性,可引起多種神經系統疾病如腦炎腦膜炎、多發性硬化、癲癇等[2-5]。病毒在初次感染機體后可終生潛伏于被感染者的外周血單個核細胞、唾液腺和中樞神經系統中。HHV-6 主要感染星形膠質細胞、少突膠質細胞和小膠質細胞，可損傷中樞神經系統的血管內皮細胞。病毒以直接侵犯機體的形式引起疾病，也可再活化而致病。多種病原體，如麻疹病毒、流感病毒、HHV-7 等均可激活潛伏的 HHV-6 而引發癲癇、腦炎、腦膜炎等。據文獻報道，HHV-6 DNA 在海馬區呈高表達，病毒不是侵犯單個細胞，而是感染成簇的膠質細胞，可能是病毒的激活和復制與局部腦組織的內環境有關[6, 7]。
HHV-6 主要感染 6 月齡～2 歲嬰幼兒，與嬰幼兒和兒童的熱性驚厥有關，同時也是幼兒急疹的病原體。幼兒急疹的特征是持續高熱 3～5 d，熱退疹出，部分是由于 HHV-6 初次感染機體引起，這些病例中約 13%有驚厥發作。既往研究認為，幼兒急疹時的驚厥是由高熱引起的。最近，國外有研究發現部分病例是由于 HHV-6 侵入中樞神經系統，引起輕微腦炎、腦病或其他更嚴重的并發癥而致驚厥發作[8]。
HHV-6 首先是由淋巴增生性疾病患者的外周血中分離得到，屬 HHV β 亞組，除可引起神經系統的急性疾病之外，還可建立潛伏感染和多種刺激下的再激活。HHV-6 有兩種類型：6A 和 6B 型。HHV-6 感染一般沒有臨床癥狀，很少會引起嚴重的綜合征。在有免疫抑制的患者中，病毒在其體內活動會導致嚴重的腦膜炎[9]。HHV-6 已被證實是多發性硬化癥的一個可能病因[10]。近年來，多項研究結果表明，HHV-6 可能通過參與大腦局灶性皮質發育不良（FCD）、觸發顳葉癲癇、誘導中樞神經系統的炎癥反應等方式參與癲癇的發生和發展。
研究顯示 HHV-6 感染與熱性驚厥有明顯的相關性，HHV-6 在癲癇發作的機制中發揮著重要作用，潛伏在神經系統中的 HHV-6 重新激活可引起器官功能障礙，包括邊緣葉、腦干和海馬的損傷等。近年來，較多研究發現 HHV-6 感染與 FCD 存在緊密聯系，同時 HHV-6 可攻擊中樞神經膠質細胞，引起代謝與免疫紊亂；此外，HHV-6 與顳葉癲癇和癲癇持續狀態也存在一定的關聯[11-13]。
MTLE 是難治性癲癇的最常見的形式之一，好發于具有長期發熱性癲癇發作病史的患兒中，而其發病原因尚不明確，證據表明 HHV-6 感染可能是 MTLE 的病因之一。有研究通過 PCR 技術檢測 MTLE 患者手術切除的腦組織標本發現，HHV-6 DNA 表達量陽性率高達 35%[14]。通過對前顳葉切除標本的研究發現，2/3 的 MTLE 海馬硬化患者的海馬星形細胞中 HHV-6B 的復制活躍，但其他癲癇類型中則不存在這種現象[15-17]。
本研究中，我們選取了 42 例難治性 MTLE 患者和 17 例非 MTLE 對照組的腦組織標本，采用實時熒光定量 PCR 和逆轉錄 PCR 檢測切除的海馬、杏仁核和海馬旁回組織中的 HHV-6 病毒的 DNA 和 mRNA，結果發現 HHV-6 DNA 在 MTLE 患者中的檢出率（40.48%）明顯高于對照組患者（11.7%），且 30 個 HHV-6 陽性標本中有 15 個檢測到 HHV-6B DNA 的存在，同時 HHV-6B mRNA 在所有 30 個檢測出 HHV-6 DNA 的標本中均有表達，而在未檢測出 HHV-6 DNA 的標本中無表達。年齡是唯一影響 MTLE 患者 HHV-6 表達水平的臨床因素，其他如性別、發病年齡和可能病因均不影響 HHV-6 的表達水平。Donati 等[15]應用實時定量 PCR、蛋白免疫印跡分析和原位免疫組織化學技術來檢測和描繪癲癇手術標本中的 HHV-6 感染，結果顯示在部分患者的海馬和顳葉區域檢測到 HHV-6 的高表達。而進一步研究從 MTLE 患者的海馬中分離出原代人星形膠質細胞，經過體外培養后也證明了 HHV-6 蛋白的高表達。這可能是通過未知的機制使這些潛在的 HHV-6 感染細胞中的再激活。這一觀察結果表明，在 MTLE 患者中，HHV-6 復制的再活化可能是癲癇發作的觸發因素；同時，潛伏在中樞神經系統的 HHV-6 病毒對腦組織持續低水平的感染也可能引起神經慢性損傷而導致癲癇發作。
研究發現，HHV-6B DNA 陽性的 MTLE 患者的杏仁核單核細胞趨化因子-1（MCP-1）和膠質細胞酸性蛋白（GFAP）較陰性患者明顯增高，提示 HHV-6B 在 MTLE 發病中的基因表達上具有重要作用[18]。同時，HHV-6B 活躍復制在其他綜合征中也有所發現，其他病毒也有類似活躍復制的現象，有學者認為 HHV-6B 是通過阻斷星形細胞內興奮性氨基酸的轉運而發揮其興奮性神經毒性[19]。還有研究發現 ApoE4 有利于 HHV-6B 在顳葉癲癇患者的復制好基因表達，從而增加患者癲癇發作的頻率[2]。盡管在顳葉內側硬化患者切除的標本中未發現典型的炎性改變，但炎性遞質在顳葉內側神經元損傷中可能還是起到了一定的作用。若能夠明確早期的病毒感染與熱性驚厥及其后出現的難治性 MTLE 之間的關系，則有可能為難治性 MTLE 的治療提供一個新途徑。
