引用本文： 郭燦收, 王書新, 臧若思, 魏進, 朱春麗, 陳小奇, 黃建敏. 耐藥性癲癇患者外周血 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白表達的研究. 癲癇雜志, 2020, 6(1): 7-11. doi: 10.7507/2096-0247.20200002 復制
癲癇是一種常見的神經系統疾病，全球約 7 000 萬癲癇患者，我國癲癇患者約近千萬，僅次于腦血管疾病[1]。在過去 20 年新型抗癲癇藥物（AEDs）大幅增加，各種新的治療手段日新月異，如最新的基因治療研究在動物實驗中取得了顯著進步，有望使需要手術治療的癲癇患者避免手術[1]。然而耐藥性癲癇（Drug-resistant epilepsy，DRE）治療的現狀仍異常嚴峻。如何早期識別 DRE 患者顯得尤為重要，有效緩解癲癇發作，不僅可以避免不必要的意外傷害和醫療資源浪費，還有助于提高其生活質量。Xiao 等[2]通過對 52 例 DRE 腦組織與 32 例腦外傷切除腦組織研究發現，DRE 患者腦組織中 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白表達明顯高于對照組。但是 DRE 患者外周血中 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白表達與 DRE 的關系尚未見報道。本研究通過檢測 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白在 DRE 患者外周血中的表達，探討其在 DRE 發生的預測價值，以為 DRE 早期診斷提供新的預測因子。
1 資料與方法
1.1 一般資料
1.1.1 組別
收集 2016 年 5 月—2018 年 6 月在我院神經內科住院或門診就診的特發性癲癇患者 72 例。同期來院體檢的健康人群 32 名作為對照組。所有研究對象或其監護人均簽署知情同意書，本研究已獲得右江民族醫學院附屬醫院倫理委員會批準。
1.1.2 納入標準
① 參照國際抗癲癇聯盟（ILAE）2001 年制定的癲癇和癲癇綜合征分類標準[3]；② 患者依從性好，服用過一種或一種以上 AEDs；③ 患者年齡滿 18 周歲。
1.1.3 排除標準
① 患有惡性腫瘤、嚴重高血壓、不穩定性心臟病、血液病、肝腎功能不全等嚴重器質性疾病的患者；② 由進行性器質性腦病或其他中樞神經系統疾病等導致的癥狀性癲癇患者；③ 診斷錯誤、治療不規范、依從性差的患者；④ 妊娠及哺乳期患者。
1.1.4 耐藥性癲癇診斷標準
根據癲癇發作類型，選擇 2 種一線用藥，藥物之間作用機制不相同且沒有藥物間相互作用，可耐受的 AEDs，經規范治療仍未能控制癲癇發作者。AEDs 控制良好診斷標準：根據 2010 年 ILAE 定義的“無發作”標準：合理選用 1 種或 2 種 AEDs 治療，達到長于 3 倍治療前無發作間期或>1 年無癲癇發作[1]。
1.1.5 分組
根據 DRE 的診斷標準，將病例分為 DRE 組及 AEDs 控制良好組。DRE 組共 32 例，男 17 例，女 15 例，年齡在 19～51 歲，平均（35.00±9.73）歲；控制良好組共 40 例，男 21 例，女 19 例，年齡在 18～50 歲，平均（31.98±11.04）歲。選取同期來院體檢的健康者作為正常組，共 32 名，其中男 15 名，女 17 名，年齡 20～55 歲，平均（35.44±10.35）歲。
1.2 主要儀器與試劑
血液總 RNA 提取試劑盒（美國 Thermo Fisher Scientific 公司）、逆轉錄試劑盒（立陶宛 Fermentas 公司）、熒光定量擴增試劑盒（瑞士 Roche 公司）、Anti-Cdc42 Antibody（abcam）、Anti-N-WASP Antibody（abcam）、Anti-Arp2/3 Antibody（abcam）、實時熒光定量 PCR 儀（瑞士 Roche 公司）、全自動凝膠成像儀（美國 BIO-RAD 公司）、蛋白電泳儀（美國 BIO-RAD 公司）、蛋白轉膜儀（美國 BIO-RAD 公司）。
1.3 方法
1.3.1 RT-PCR 法檢測外周血 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因表達量
采集受檢者空腹外周靜脈血約 2 mL 于 EDTA 抗凝管中，置于 4℃ 冰箱保存，4 h 內提取 RNA。采用 Trizol 法提取外周血中總 RNA，經紫外分光光度儀檢測其純度，A260/A280 在 1.7～2.2 之間。按試劑盒說明書進行逆轉錄操作，反應體系為 20 μL。檢測 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因表達：RT-PCR 反應體系為 20 μL：其中 CYBERGreen qPCR SuperMix 10 μL，cDNA 模板 2 μL，上、下游引物各 0.6 μL，加 Rnase-free 水至 20 μL。使用熒光定量 PCR 儀進行擴增，重復 45 個循環；反應結束后，由軟件自動得出熒光反應曲線、每個標本反應體系的擴增效率及 Ct 值。2-ΔΔCt 法對數據進行相對定量分析，得到 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 相對定量。
1.3.2 Western blot 法檢測外周血 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 蛋白表達量
取受檢者空腹外周靜脈血血清，低溫轉速 1 000 r/min，離心 10 min，取上清。BCA 法測定濃度后取適量上清液，加入溴酚藍及上樣緩沖液。將樣品于沸水中煮 5 min，使蛋白變性。槽式濕轉法轉膜后，脫脂奶粉封閉 60 min，加入相應一抗 4℃ 搖床上過夜，次日 TBS 洗 3 次，孵育二抗。ECL 顯色，凝膠成像儀顯影。Image J 軟件分析圖像。
1.4 統計學方法
應用 SPSS24.0 軟件進行統計學處理。計量資料數據以均數±標準差表示，組間比較采用 LSD-t 法或 Wilcoxon 秩和檢驗，計數資料采用 χ2 檢驗，以 P< 0.05 值為差異具有統計學意義。
2 結果
2.1 一般資料比較
三組人群性別、年齡之間比較差異無統計學意義（P>0.05），見表 1。
表1
三組人群一般資料比較
Table1.
Comparison of general data among three groups
2.2 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 表達量比較
Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNAmRNA 表達量方面，DRE 組高于 AEDs 控制良好組及正常組，AEDs 控制良好組又高于正常組，差異具有統計學意義（P 均<0.001），見表 2。
表2
各組 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 表達量比較（
）
Table2.
Comparison of expressions of Cdc42, n-wasp and Arp2/3 mRNA
2.3 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 蛋白表達量比較
Cdc42、N-WASP、Arp2/3 蛋白表達量耐藥組高于 AEDs 控制良好組及正常對照組，AEDs 控制良好組又高于正常對照組，差異具有統計學意義（P 均<0.001），見表 3。
表3
各組 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 蛋白表達量比較（QI-QU）
Table3.
Comparison of expressions of Cdc42, N-WASP and Arp2/3 protein
3 討論
關于 DRE 發病機制眾說紛紜，主要有以下幾種：藥物代謝動力學假說、神經網絡假說、內在嚴重程度假說、基因變異假說、靶點假說和轉運體假說等，但是任何一種學說都不能完全解釋 DRE 的發病機制[2]。其中“異常神經網絡假說”由王學峰等于 2011 年首先提出，該學說認為：癲癇導致大腦可塑性改變，苔蘚纖維出芽，突觸重組，神經再生和膠質增生均可能導致異常神經網絡形成，這不僅使內源性癲癇抑制作用失靈，也使傳統的 AEDs 不能進入靶點而失效，最終導致 DRE 發生[4]。動物實驗表明[5]，癲癇持續狀態后海馬齒狀回的神經干細胞迅速激活，神經再生水平顯著提高，異位的顆粒細胞參與海馬神經環路的形成對癲癇的形成和發作產生影響。也有研究發現癲癇發作造成海馬門區出現異形神經元及細胞骨架結構異常，將攜帶突觸熒光蛋白的逆轉錄病毒注射到新生大鼠的齒狀顆粒細胞中，并對其軸突終末進行標記發現，齒狀回內分子層內新生期及成年期產生的齒狀顆粒細胞基本等程度參與了苔蘚纖維芽生[6]。
Cdc42/N-WASP/Arp2/3 通路包含 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 三種主要的蛋白質，密切相互作用介導肌動蛋白聚合發揮其生物學作用。Cdc42 屬于 Rho 家族 GTP 酶（Rho GTPases）成員，作為主要的細胞骨架調節器通過激活 N-WASP/WIP 發揮作用[7]。N-WASP 作為中樞神經系統最重要的成核促進因子之一，最早于 1996 年從牛腦組織中被純化，系 WASP 家族重要成員之一，與 WASP 結構具有約 50%的同源性，因在哺乳動物腦組織中表達最多而得名，是中樞神經系統 RhoGTPases 信號通路重要的細胞骨架調節蛋白，被上游的 Cdc42 激活后，與 Arp2/3 結合，促使肌動蛋白單體聚合形成肌動蛋白多聚體，刺激神經突起生長與分支[8]。在神經系統中，正常生理條件下 N-WASP 參與了神經髓鞘的準確形成[9]、正常生長錐的生長及正常神經突觸形成[10]。沈秀蓮等[10]通過結構域基因敲除及過表達研究發現，N-WASP 主要是通過 PolyPro、VCA 結構域調控中樞神經系統神經元遷移，促進神經突觸的生長。Hebbrecht 等[11] 制作了一種針對 N-WASP 的 VCA 區域的納米抗體，與神經細胞作用后發現侵襲性偽足減少、功能下降。有研究表明，N-WASP 過度表達促進神經纖維異常芽生[12]。這些研究結果表明，N-WASP 維持正常神經網絡結構與功能起重要的作用，但是在病理情況下可促進異常神經網絡形成導致各種疾病發生。肌動蛋白相關蛋白 2/3（ARP2/3）復合物使分支的肌動蛋白絲網絡成核，但需要成核促進因子來刺激這種活性。成核促進因子包括 WASP、N-WASP、SCAR、WASP 和 SCAR 同源物復合物[13]。
Cdc42、N-WASP、Arp2/3 通路將細胞內外的信號整合到肌動蛋白上，導致肌動蛋白單體聚合成為肌動蛋白多聚體，維持細胞的形態和功能，如絲狀和板狀偽足的形成，同時在細胞核內直接影響基因的表達[14]。Xiao 等[2]發現，N-WASP 基因在 DRE 患者腦組織中的相對表達量顯著增高。該科研組的另外一項研究發現，Cdc42 在耐藥性顳葉癲癇患者的顳葉皮質及海馬中表達較對照組非癲癇腦組織顯著增強[15]。提示 Cdc42/N-WASP/Arp2/3 通路與 DRE 異常神經網絡形成密切相關。一些研究表明苔蘚纖維發芽不一定與早期癲癇發作相關，而是軸突導向的分子機制被破壞的結果[16]。表明異常神經網絡學說還不完善，需要更多的基礎及臨床研究證據支撐。
由于條件及倫理限制，癲癇患者腦組織取材困難，而外周血取材具有操作便捷、可重復性強、易被患者接受的優勢。本研究通過檢測 DRE 患者外周血中 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 及其蛋白表達，分析比較其在 DRE 組、AEDs 控制藥物控制良好組和正常對照組之間表達的差異，為異常神經網絡的完善提供基礎與臨床證據。本研究發現，Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 及其蛋白表達在 DRE 組、AEDs 控制良好組及正常對照組之間差異有統計學意義。DRE 組患者外周血中 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 及其蛋白表達顯著高于 AEDs 控制良好組及正常對照組，AEDs 控制良好組又顯著高于正常對照組。Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 及其蛋白變化具有一致性。
另外，Cdc42/N-WASP/Arp2/3 通路也受其他因素的影響。如生長停滯特異性基因 7（Gas7）通過以不依賴 Cdc42 的方式募集 Arp2/3 復合物而有助于膜突起的形成，使海馬神經元的神經突向外生長[17]；如胰島素樣生長因子 1 缺失導致脂質和微管代謝中斷，導致神經元體細胞和樹突生長受損[18]。因此，異常神經網絡形成的機制異常復雜，需要更多的基礎和臨床研究證據。
綜上，本研究發現 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白在 DRE 患者外周血中表達量明顯升高，提示 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因可能參與 DRE 的發生與發展，其高表達可作為外周血生物學指標對預測 DRE 發生具有一定的預警價值。
癲癇是一種常見的神經系統疾病，全球約 7 000 萬癲癇患者，我國癲癇患者約近千萬，僅次于腦血管疾病[1]。在過去 20 年新型抗癲癇藥物（AEDs）大幅增加，各種新的治療手段日新月異，如最新的基因治療研究在動物實驗中取得了顯著進步，有望使需要手術治療的癲癇患者避免手術[1]。然而耐藥性癲癇（Drug-resistant epilepsy，DRE）治療的現狀仍異常嚴峻。如何早期識別 DRE 患者顯得尤為重要，有效緩解癲癇發作，不僅可以避免不必要的意外傷害和醫療資源浪費，還有助于提高其生活質量。Xiao 等[2]通過對 52 例 DRE 腦組織與 32 例腦外傷切除腦組織研究發現，DRE 患者腦組織中 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白表達明顯高于對照組。但是 DRE 患者外周血中 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白表達與 DRE 的關系尚未見報道。本研究通過檢測 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白在 DRE 患者外周血中的表達，探討其在 DRE 發生的預測價值，以為 DRE 早期診斷提供新的預測因子。
1 資料與方法
1.1 一般資料
1.1.1 組別
收集 2016 年 5 月—2018 年 6 月在我院神經內科住院或門診就診的特發性癲癇患者 72 例。同期來院體檢的健康人群 32 名作為對照組。所有研究對象或其監護人均簽署知情同意書，本研究已獲得右江民族醫學院附屬醫院倫理委員會批準。
1.1.2 納入標準
① 參照國際抗癲癇聯盟（ILAE）2001 年制定的癲癇和癲癇綜合征分類標準[3]；② 患者依從性好，服用過一種或一種以上 AEDs；③ 患者年齡滿 18 周歲。
1.1.3 排除標準
① 患有惡性腫瘤、嚴重高血壓、不穩定性心臟病、血液病、肝腎功能不全等嚴重器質性疾病的患者；② 由進行性器質性腦病或其他中樞神經系統疾病等導致的癥狀性癲癇患者；③ 診斷錯誤、治療不規范、依從性差的患者；④ 妊娠及哺乳期患者。
1.1.4 耐藥性癲癇診斷標準
根據癲癇發作類型，選擇 2 種一線用藥，藥物之間作用機制不相同且沒有藥物間相互作用，可耐受的 AEDs，經規范治療仍未能控制癲癇發作者。AEDs 控制良好診斷標準：根據 2010 年 ILAE 定義的“無發作”標準：合理選用 1 種或 2 種 AEDs 治療，達到長于 3 倍治療前無發作間期或>1 年無癲癇發作[1]。
1.1.5 分組
根據 DRE 的診斷標準，將病例分為 DRE 組及 AEDs 控制良好組。DRE 組共 32 例，男 17 例，女 15 例，年齡在 19～51 歲，平均（35.00±9.73）歲；控制良好組共 40 例，男 21 例，女 19 例，年齡在 18～50 歲，平均（31.98±11.04）歲。選取同期來院體檢的健康者作為正常組，共 32 名，其中男 15 名，女 17 名，年齡 20～55 歲，平均（35.44±10.35）歲。
1.2 主要儀器與試劑
血液總 RNA 提取試劑盒（美國 Thermo Fisher Scientific 公司）、逆轉錄試劑盒（立陶宛 Fermentas 公司）、熒光定量擴增試劑盒（瑞士 Roche 公司）、Anti-Cdc42 Antibody（abcam）、Anti-N-WASP Antibody（abcam）、Anti-Arp2/3 Antibody（abcam）、實時熒光定量 PCR 儀（瑞士 Roche 公司）、全自動凝膠成像儀（美國 BIO-RAD 公司）、蛋白電泳儀（美國 BIO-RAD 公司）、蛋白轉膜儀（美國 BIO-RAD 公司）。
1.3 方法
1.3.1 RT-PCR 法檢測外周血 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因表達量
采集受檢者空腹外周靜脈血約 2 mL 于 EDTA 抗凝管中，置于 4℃ 冰箱保存，4 h 內提取 RNA。采用 Trizol 法提取外周血中總 RNA，經紫外分光光度儀檢測其純度，A260/A280 在 1.7～2.2 之間。按試劑盒說明書進行逆轉錄操作，反應體系為 20 μL。檢測 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因表達：RT-PCR 反應體系為 20 μL：其中 CYBERGreen qPCR SuperMix 10 μL，cDNA 模板 2 μL，上、下游引物各 0.6 μL，加 Rnase-free 水至 20 μL。使用熒光定量 PCR 儀進行擴增，重復 45 個循環；反應結束后，由軟件自動得出熒光反應曲線、每個標本反應體系的擴增效率及 Ct 值。2-ΔΔCt 法對數據進行相對定量分析，得到 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 相對定量。
1.3.2 Western blot 法檢測外周血 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 蛋白表達量
取受檢者空腹外周靜脈血血清，低溫轉速 1 000 r/min，離心 10 min，取上清。BCA 法測定濃度后取適量上清液，加入溴酚藍及上樣緩沖液。將樣品于沸水中煮 5 min，使蛋白變性。槽式濕轉法轉膜后，脫脂奶粉封閉 60 min，加入相應一抗 4℃ 搖床上過夜，次日 TBS 洗 3 次，孵育二抗。ECL 顯色，凝膠成像儀顯影。Image J 軟件分析圖像。
1.4 統計學方法
應用 SPSS24.0 軟件進行統計學處理。計量資料數據以均數±標準差表示，組間比較采用 LSD-t 法或 Wilcoxon 秩和檢驗，計數資料采用 χ2 檢驗，以 P< 0.05 值為差異具有統計學意義。
2 結果
2.1 一般資料比較
三組人群性別、年齡之間比較差異無統計學意義（P>0.05），見表 1。
表1
三組人群一般資料比較
Table1.
Comparison of general data among three groups
2.2 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 表達量比較
Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNAmRNA 表達量方面，DRE 組高于 AEDs 控制良好組及正常組，AEDs 控制良好組又高于正常組，差異具有統計學意義（P 均<0.001），見表 2。
表2
各組 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 表達量比較（）
Table2.
Comparison of expressions of Cdc42, n-wasp and Arp2/3 mRNA
2.3 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 蛋白表達量比較
Cdc42、N-WASP、Arp2/3 蛋白表達量耐藥組高于 AEDs 控制良好組及正常對照組，AEDs 控制良好組又高于正常對照組，差異具有統計學意義（P 均<0.001），見表 3。
表3
各組 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 蛋白表達量比較（QI-QU）
Table3.
Comparison of expressions of Cdc42, N-WASP and Arp2/3 protein
3 討論
關于 DRE 發病機制眾說紛紜，主要有以下幾種：藥物代謝動力學假說、神經網絡假說、內在嚴重程度假說、基因變異假說、靶點假說和轉運體假說等，但是任何一種學說都不能完全解釋 DRE 的發病機制[2]。其中“異常神經網絡假說”由王學峰等于 2011 年首先提出，該學說認為：癲癇導致大腦可塑性改變，苔蘚纖維出芽，突觸重組，神經再生和膠質增生均可能導致異常神經網絡形成，這不僅使內源性癲癇抑制作用失靈，也使傳統的 AEDs 不能進入靶點而失效，最終導致 DRE 發生[4]。動物實驗表明[5]，癲癇持續狀態后海馬齒狀回的神經干細胞迅速激活，神經再生水平顯著提高，異位的顆粒細胞參與海馬神經環路的形成對癲癇的形成和發作產生影響。也有研究發現癲癇發作造成海馬門區出現異形神經元及細胞骨架結構異常，將攜帶突觸熒光蛋白的逆轉錄病毒注射到新生大鼠的齒狀顆粒細胞中，并對其軸突終末進行標記發現，齒狀回內分子層內新生期及成年期產生的齒狀顆粒細胞基本等程度參與了苔蘚纖維芽生[6]。
Cdc42/N-WASP/Arp2/3 通路包含 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 三種主要的蛋白質，密切相互作用介導肌動蛋白聚合發揮其生物學作用。Cdc42 屬于 Rho 家族 GTP 酶（Rho GTPases）成員，作為主要的細胞骨架調節器通過激活 N-WASP/WIP 發揮作用[7]。N-WASP 作為中樞神經系統最重要的成核促進因子之一，最早于 1996 年從牛腦組織中被純化，系 WASP 家族重要成員之一，與 WASP 結構具有約 50%的同源性，因在哺乳動物腦組織中表達最多而得名，是中樞神經系統 RhoGTPases 信號通路重要的細胞骨架調節蛋白，被上游的 Cdc42 激活后，與 Arp2/3 結合，促使肌動蛋白單體聚合形成肌動蛋白多聚體，刺激神經突起生長與分支[8]。在神經系統中，正常生理條件下 N-WASP 參與了神經髓鞘的準確形成[9]、正常生長錐的生長及正常神經突觸形成[10]。沈秀蓮等[10]通過結構域基因敲除及過表達研究發現，N-WASP 主要是通過 PolyPro、VCA 結構域調控中樞神經系統神經元遷移，促進神經突觸的生長。Hebbrecht 等[11] 制作了一種針對 N-WASP 的 VCA 區域的納米抗體，與神經細胞作用后發現侵襲性偽足減少、功能下降。有研究表明，N-WASP 過度表達促進神經纖維異常芽生[12]。這些研究結果表明，N-WASP 維持正常神經網絡結構與功能起重要的作用，但是在病理情況下可促進異常神經網絡形成導致各種疾病發生。肌動蛋白相關蛋白 2/3（ARP2/3）復合物使分支的肌動蛋白絲網絡成核，但需要成核促進因子來刺激這種活性。成核促進因子包括 WASP、N-WASP、SCAR、WASP 和 SCAR 同源物復合物[13]。
Cdc42、N-WASP、Arp2/3 通路將細胞內外的信號整合到肌動蛋白上，導致肌動蛋白單體聚合成為肌動蛋白多聚體，維持細胞的形態和功能，如絲狀和板狀偽足的形成，同時在細胞核內直接影響基因的表達[14]。Xiao 等[2]發現，N-WASP 基因在 DRE 患者腦組織中的相對表達量顯著增高。該科研組的另外一項研究發現，Cdc42 在耐藥性顳葉癲癇患者的顳葉皮質及海馬中表達較對照組非癲癇腦組織顯著增強[15]。提示 Cdc42/N-WASP/Arp2/3 通路與 DRE 異常神經網絡形成密切相關。一些研究表明苔蘚纖維發芽不一定與早期癲癇發作相關，而是軸突導向的分子機制被破壞的結果[16]。表明異常神經網絡學說還不完善，需要更多的基礎及臨床研究證據支撐。
由于條件及倫理限制，癲癇患者腦組織取材困難，而外周血取材具有操作便捷、可重復性強、易被患者接受的優勢。本研究通過檢測 DRE 患者外周血中 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 及其蛋白表達，分析比較其在 DRE 組、AEDs 控制藥物控制良好組和正常對照組之間表達的差異，為異常神經網絡的完善提供基礎與臨床證據。本研究發現，Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 及其蛋白表達在 DRE 組、AEDs 控制良好組及正常對照組之間差異有統計學意義。DRE 組患者外周血中 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 及其蛋白表達顯著高于 AEDs 控制良好組及正常對照組，AEDs 控制良好組又顯著高于正常對照組。Cdc42、N-WASP、Arp2/3 mRNA 及其蛋白變化具有一致性。
另外，Cdc42/N-WASP/Arp2/3 通路也受其他因素的影響。如生長停滯特異性基因 7（Gas7）通過以不依賴 Cdc42 的方式募集 Arp2/3 復合物而有助于膜突起的形成，使海馬神經元的神經突向外生長[17]；如胰島素樣生長因子 1 缺失導致脂質和微管代謝中斷，導致神經元體細胞和樹突生長受損[18]。因此，異常神經網絡形成的機制異常復雜，需要更多的基礎和臨床研究證據。
綜上，本研究發現 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因及其蛋白在 DRE 患者外周血中表達量明顯升高，提示 Cdc42、N-WASP、Arp2/3 基因可能參與 DRE 的發生與發展，其高表達可作為外周血生物學指標對預測 DRE 發生具有一定的預警價值。
