引用本文： 王雪梅, 周娟, 葉遠馨, 楊煉, 周易, 陸小軍, 應斌武. 四川大學華西醫院丙型肝炎患者 HCV 病毒基因分型及臨床特點的研究. 中國循證醫學雜志, 2017, 17(5): 511-516. doi: 10.7507/1672-2531.201611041 復制
丙型肝炎（HCV）是一種傳染性肝病，目前已成為全球重大健康問題之一，其由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起。HCV是黃病毒科的一種單鏈 RNA 病毒，由于病毒聚合酶的高突變率和病毒的高周轉率而具有較高的遺傳多樣性。病毒變種被分為七種基因型（以阿拉伯數字依次 1～7 表示）及至少 67 種亞型（以 a、b、c 等標記）[1]。基因型 1、2、3 呈全球性分布，而 4、5、6 基因型更易集中在特定區域。其中，4 基因型和 5a 亞型主要分別分布在中東國家和南非北部地區，6 基因型主要分布在中國和東南亞地區，特別是中國香港地區、泰國和越南[2,3]。據世界衛生組織（WHO）報道，全球約有 3% 的人感染 HCV[4,5]。HCV患者的藥物治療需以病毒基因型為基礎，針對性個體化用藥，從而達到有效經濟地治療。目前，四川地區大樣本的 HCV 基因分型研究甚少，為對本地區 HCV 治療提供依據，本研究對就診于四川大學華西醫院的HCV患者的 HCV 進行基因分型，探討其在 HCV 治療中的價值。
1 對象與方法
1.1 研究對象
納入 2011 年 3 月 3 日至 2016 年 9 月 3 日就診于四川大學華西醫院門（急）診及住院進行 HCV 基因分型檢測HCV患者 5 234 例。選取 HCV 成功分型患者 4 520 例（86.36%）進行研究，其中男性 2 153 例，年齡 7～87 歲，平均年齡 45.35 歲，女性 2 367 例，年齡 8～82 歲，平均年齡 45.00 歲。納入患者均符合中華醫學會肝病學分會、中華醫學會感染病學分會《丙型肝炎防治指南》[6]診斷標準，血清 HCV-RNA、HCV 抗體均為陽性。
1.2 HCV 基因分型測定
采用巢式 PCR 對 HCV 5’-UTR 區域進行逆轉錄測序分型，測序儀器為美國 AB 公司提供的 3500 型 DNA 測序儀，使用上海申友生物技術有限責任公司提供的 HCV 基因分型檢測試劑盒，嚴格按試劑說明書進行測定，測序結果在美國國家生物技術信息中心（NCBI）基因組數據庫中進行計算分析得出 HCV 基因型及亞型。
1.3 HCV-RNA 定量測定
采用實時熒光定量 PCR（RT-PCR）測定患者血清中的 HCV-RNA 載量，由上海科華生物工程股份有限公司提供試劑盒，利用羅氏 480 熒光定量 PCR 分析儀進行測定。
1.4 HCV 抗體檢測
采用化學發光定量分析法測定患者血清中的 HCV-IgG 型和 HCV-IgM 型混合抗體，由羅氏公司提供化學發光 HCV 抗體試劑盒，使用 P170 或 P601 羅氏化學發光分析儀進行測定。
1.5 ALT、AST、GGT 測定
采用酶速率反應比色法，由羅氏公司提供 ALT、AST、GGT 檢測試劑盒，使用 P800 羅氏生化分析儀測定患者基線 ALT、AST、GGT 的值。
1.6 統計分析
采用 SPSS 2.0 軟件進行統計分析。統計分析指標包括 HCV 基因型/亞型頻率、HCV患者的肝功、病毒載量、肝硬化和 HCV/HBV 復合感染情況。
2 結果
2.1 4 520 例 HCV 基因型/亞型分布特點
4 520 例 HCV 患者HCV 檢出 1、2、3、4、6 五種基因型和 23 種亞型（表 1），其中以 1 b、3b、1*、2a、3a、6a 六種基因型/亞型為主，分別占 66.42%（3 002/4 520）、8.01%（362/4 520）、6.57% （297/4 520）、4.54%（205/4 520）、4.29%（194/4 520）、3.41%（154/4 520）。本次研究除檢出上述主要基因型/亞型外，還檢出 2b、2f、2q、3g、3i 等少見亞型和混合型。HCV 主要基因型/亞型 1b、3b、1*、2a、3a、6a 合計 93.23%（4 214/4 520），以下主要對這六種基因型/亞型進行分析。
表1
4 520 名丙型肝炎患者丙型肝炎病毒基因型分布
2.2 4 520 例 HCV 主要基因型/亞型分布特點
HCV 基因型/亞型 1b、3b、1*、2a、3a、6a 在 4 520 例 HCV 患者中占 90% 以上，不同類別、性別、年齡患者的基因型/亞型分布特點見表 2。
表2
HCV 主要基因型患者來源情況分析 [n（%）]
六種主要基因型/亞型男性和女性中均以 1b 型為主，分別占 29.89%（1 351/4 520）和 36.53%（1 651/4 520），高于其余五種基因型，且女性中 1b 型比例高于男性。在男性中 HCV 基因型/亞型 3b、1*、3a、2a、6a 所占比例依次遞減；但在女性中 3b 型與 1* 型所占比例大致相等，分別為 3.45%（156/4 520）、3.41%（154/4 520），2a 型所占比例 2.61%（118/4 520）高于 3a 型 1.79%（81/4 520），2a 型在女性中分布高于男性 HCV 患者，3a 型在女性中分布低于男性 HCV 患者。HCV 主要基因型/亞型在門（急）診患者與住院患者中分布相似。不同年齡階段，HCV 主要基因型/亞型分布有所不同，共同的是 1b 型占絕對優勢，3b、3a、6a 三種亞型在年齡 30～45 歲間分布明顯高于其他年齡段，在 60 歲以上患者中所占比例最低，1* 型和 2a 型在年齡 45～60 歲間分布高于其他年齡段。
2.3 HCV 主要基因型/亞型患者肝功能和病毒載量分析
為研究 HCV 主要基因型/亞型與臨床特點相關性，隨機抽取其中 1 281 例患者，對 ALT、AST、GGT 和 HCV 病毒載量進行分析，最終納入 844 例完整數據的患者，統計分析結果見表 3。其中住院患者 233 例，占 27.61%（233/844），門（急）診患者 611 例，占 72.39%（611/844）。男性共 424 例，占 50.24%（424/844），平均年齡為 45.59±13.36 歲；女性共 420 例，占 49.76%（420/844），平均年齡 45.09±13.59 歲。
表3
HCV 主要基因型患者肝功能和病毒載量特征分析（Q25，Q75）
在男性中，ALT水平在不同 HCV 基因型/亞型依次為 6a>3a>3b>1*>2a>1b，中位數值分別為 104.00、92.00、84.50、79.00、57.00、52.00 U/L；在女性中，ALT水平依次為 3a>3b>1*>2a>1b>6a，中位數值分別為 77.00、74.00、63.00、53.00、50.00、40.00 U/L。
HCV 患者最終可能會發展成為肝硬化和肝癌。對已發展為肝硬化和肝癌患者進行統計分析，其結果見表 4。納入的 94 例肝硬化患者中，HCV 基因型/亞型 1b、3b、1*、3a、2a、6a 各型均有，其中 1b 型最高為 42 例，占 4.98%（42/844）。納入的 6 例肝癌患者中，僅有 1b 和 3b 型檢出，分別占 0.59%（5/844）、0.12%（1/844）。HCV 常與 HBV 共同感染，本研究進一步分析了 HBV/HCV 符合感染情況，結果見表 5。在 844 例 HCV 感染者中，復合感染患者共 53 例，占 6.28%（53/844），HCV 基因型/亞型各型均有檢出，3a 型檢出最高，占 1.42%（12/844）。
表4
HCV 主要基因型患者肝硬化和肝癌情況分析 [n（%）]
表5
HCV 主要基因型患者復合感染 HBV 情況分析
3 討論
HCV 感染多呈隱匿性，易慢性化，病毒在體內不斷復制造成肝細胞持續性損傷，肝臟代償功能強，不斷增生修復，反復損傷修復易致肝硬化形成，最終可發展成肝癌。丙型肝炎呈全球流行，不同性別、年齡、種族人群均對 HCV 均易感。由于 HCV 變異對以往的抗 HCV 藥物產生耐藥，丙肝的防治面臨新挑戰。目前，HCV 基因型呈多樣化，據 WHO 修訂的最新《丙型肝炎防治指南》[7]，HCV 的防治應基于 病毒基因型用藥，以達到經濟有效的效果。HCV 基因型分布具有地域性、人種性差異[8-14]，對某特定區域的丙肝的防治，應以該地區流行的 HCV 基因型為基礎。為對本地區的丙肝防治工作提供參考，我們開展了本研究。
本次研究發現 HCV 主要基因型為 1b 型，占 66.42%，與文獻結果一致[15]，但在 6a 型分布排在第六，占 3.41%，與廣東、廣西、福建等地分布有明顯差異[16-18]。本研究主要 HCV 基因亞型種類與國內沿海地區報道一致[10]，與寧夏不同[19]，寧夏地區以 3a 型為主，其次為 1b 型，而本地區以 1b 型為主，其次為 3b 型，這可能是由于民族差異引起。本次研究發現在本地區有不能成功分亞型的 1 型 HCV 基因型，文中以 1* 表示，而在以往本地或周邊地區 HCV 基因型研究中直接省略了此型[20]。本研究發現該型所占比例較高，排在第三位，占 6.57%。HCV 基因型的分布除與地域、人種有關外，還與感染途徑有關[21]。在我國云南與緬甸、越南相鄰的地區由于毒品交易[22,23]，該地區 HCV 基因型分布與四川及東南沿海地區有明顯不同，一些少見基因型如 6u、6n 在該地區占較大比例。本研究發現的 HCV 基因型分布與海南島原住民相比[24]也有明顯不同，在海南島 6a 型占主要，比例最高，而四川以 1b 型為主。本地區 HCV 基因型/亞型分布在性別、年齡上有差異，與先前報道一致[25]，但具體分布與先前報道不同，多因研究人群地域性的差異引起。
本研究發現本地 HCV 主要基因型/亞型 1b、3b、1*、2a、3a、6a 患者基線病毒載量水平無論男女，比例幾乎相當，與部分文獻報道一致[26]，但卻與林江等[27]的研究不同，這可能是由于樣本量差異導致的。ALT 無論性別、HCV 型別均高于正常參考值，6a 型男性 ALT 最高，而在女性中最低；6a 型女性 AST 值正常，GGT 值在女性中無論 HCV 型別均正常，而男性除 2a、6a 型外 GGT 值均偏高，可能與男性飲酒相關。HCV 感染進展多緩慢，感染后 20 年，一般人群肝硬化發生率為 5%～15%[28]，單采血漿還輸血細胞感染者約 1.4%～10.0%[29,30]；中年因輸血感染者 18%～30%[28]；兒童和年輕女性為 2%～4%[31]。本研究發現肝硬化在上述主要 HCV 基因型/亞型均有檢出，合計 11.14%，與文獻報道一致。HCV 相關的肝細胞性肝癌（HCC）主要見于肝硬化和進展期肝纖維化患者，發生率在感染30年后為 1%～3%[32]，本研究發現肝癌發生率為 0.71%，低于文獻報道值，只有 1b、3b 型有檢出，可能與本研究為橫斷面研究有關。本研究還發現上述六種 HCV 主要基因型/亞型均可與HBV復合感染，高于文獻[33]報道值（4.11%），可能由于本次研究人群較局限有關，其他研究所選擇人群是全國多中心隊列研究，另外與本地區 HBV 感染率高于其他地區有關。有研究[33]報道， HCV 和 HBV 復合感染更易導致肝硬化的發生，應密切關注此類患者。
本研究采用巢式 PCR 反應對 HCV 5’-UTR 區域進行逆轉錄測序分型，有文獻報道此種方法可以用于檢測 1 ~ 5 型，不適合用于亞型的檢測及 1 型與 6 型的區分[34,35]。如其他試劑不能區分亞型，可采用基于核心區或 NS5B 區的 DNA 測序法[36]。本研究中 1* 型因方法學限制無法區分亞型，一定程度上影響了其他亞型的分布，在接下的研究中還應對此型換用基于核心區或 NS5B 區的 DNA 測序法進行亞型分析。此外，本研究中肝癌樣本例數偏少，在肝癌患者中 HCV 主要基因型的分布特點具有局限性，國內關于肝癌患者 HCV 基因型分布特點研究文獻尚未查見，國內多集中在 1b 型的機制和流行病學研究[37,38]；國外 Silini 等[39]曾對 166 例肝細胞癌、219 例肝硬化和 593 例慢性丙型肝炎進行研究發現，肝細胞癌患者中 1b 型陽性率顯著高于慢性丙型肝炎和肝硬化，國外關于 HCV 相關肝癌的研究也多集中在發病率等流行病學特點[40-42]，對肝癌患者 HCV 基因型分布特點甚少關注，需進一步擴大樣本量研究。
本研究發現在華西醫院 HCV 患者HCV基因型分布具有多樣化，具有獨特的特點，這為丙肝的防治工作提供了有力保障。將來的研究可繼續區分 1* 型及隨訪觀察各型患者預后，指導臨床治療。
丙型肝炎（HCV）是一種傳染性肝病，目前已成為全球重大健康問題之一，其由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起。HCV是黃病毒科的一種單鏈 RNA 病毒，由于病毒聚合酶的高突變率和病毒的高周轉率而具有較高的遺傳多樣性。病毒變種被分為七種基因型（以阿拉伯數字依次 1～7 表示）及至少 67 種亞型（以 a、b、c 等標記）[1]。基因型 1、2、3 呈全球性分布，而 4、5、6 基因型更易集中在特定區域。其中，4 基因型和 5a 亞型主要分別分布在中東國家和南非北部地區，6 基因型主要分布在中國和東南亞地區，特別是中國香港地區、泰國和越南[2,3]。據世界衛生組織（WHO）報道，全球約有 3% 的人感染 HCV[4,5]。HCV患者的藥物治療需以病毒基因型為基礎，針對性個體化用藥，從而達到有效經濟地治療。目前，四川地區大樣本的 HCV 基因分型研究甚少，為對本地區 HCV 治療提供依據，本研究對就診于四川大學華西醫院的HCV患者的 HCV 進行基因分型，探討其在 HCV 治療中的價值。
1 對象與方法
1.1 研究對象
納入 2011 年 3 月 3 日至 2016 年 9 月 3 日就診于四川大學華西醫院門（急）診及住院進行 HCV 基因分型檢測HCV患者 5 234 例。選取 HCV 成功分型患者 4 520 例（86.36%）進行研究，其中男性 2 153 例，年齡 7～87 歲，平均年齡 45.35 歲，女性 2 367 例，年齡 8～82 歲，平均年齡 45.00 歲。納入患者均符合中華醫學會肝病學分會、中華醫學會感染病學分會《丙型肝炎防治指南》[6]診斷標準，血清 HCV-RNA、HCV 抗體均為陽性。
1.2 HCV 基因分型測定
采用巢式 PCR 對 HCV 5’-UTR 區域進行逆轉錄測序分型，測序儀器為美國 AB 公司提供的 3500 型 DNA 測序儀，使用上海申友生物技術有限責任公司提供的 HCV 基因分型檢測試劑盒，嚴格按試劑說明書進行測定，測序結果在美國國家生物技術信息中心（NCBI）基因組數據庫中進行計算分析得出 HCV 基因型及亞型。
1.3 HCV-RNA 定量測定
采用實時熒光定量 PCR（RT-PCR）測定患者血清中的 HCV-RNA 載量，由上海科華生物工程股份有限公司提供試劑盒，利用羅氏 480 熒光定量 PCR 分析儀進行測定。
1.4 HCV 抗體檢測
采用化學發光定量分析法測定患者血清中的 HCV-IgG 型和 HCV-IgM 型混合抗體，由羅氏公司提供化學發光 HCV 抗體試劑盒，使用 P170 或 P601 羅氏化學發光分析儀進行測定。
1.5 ALT、AST、GGT 測定
采用酶速率反應比色法，由羅氏公司提供 ALT、AST、GGT 檢測試劑盒，使用 P800 羅氏生化分析儀測定患者基線 ALT、AST、GGT 的值。
1.6 統計分析
采用 SPSS 2.0 軟件進行統計分析。統計分析指標包括 HCV 基因型/亞型頻率、HCV患者的肝功、病毒載量、肝硬化和 HCV/HBV 復合感染情況。
2 結果
2.1 4 520 例 HCV 基因型/亞型分布特點
4 520 例 HCV 患者HCV 檢出 1、2、3、4、6 五種基因型和 23 種亞型（表 1），其中以 1 b、3b、1*、2a、3a、6a 六種基因型/亞型為主，分別占 66.42%（3 002/4 520）、8.01%（362/4 520）、6.57% （297/4 520）、4.54%（205/4 520）、4.29%（194/4 520）、3.41%（154/4 520）。本次研究除檢出上述主要基因型/亞型外，還檢出 2b、2f、2q、3g、3i 等少見亞型和混合型。HCV 主要基因型/亞型 1b、3b、1*、2a、3a、6a 合計 93.23%（4 214/4 520），以下主要對這六種基因型/亞型進行分析。
表1
4 520 名丙型肝炎患者丙型肝炎病毒基因型分布
2.2 4 520 例 HCV 主要基因型/亞型分布特點
HCV 基因型/亞型 1b、3b、1*、2a、3a、6a 在 4 520 例 HCV 患者中占 90% 以上，不同類別、性別、年齡患者的基因型/亞型分布特點見表 2。
表2
HCV 主要基因型患者來源情況分析 [n（%）]
六種主要基因型/亞型男性和女性中均以 1b 型為主，分別占 29.89%（1 351/4 520）和 36.53%（1 651/4 520），高于其余五種基因型，且女性中 1b 型比例高于男性。在男性中 HCV 基因型/亞型 3b、1*、3a、2a、6a 所占比例依次遞減；但在女性中 3b 型與 1* 型所占比例大致相等，分別為 3.45%（156/4 520）、3.41%（154/4 520），2a 型所占比例 2.61%（118/4 520）高于 3a 型 1.79%（81/4 520），2a 型在女性中分布高于男性 HCV 患者，3a 型在女性中分布低于男性 HCV 患者。HCV 主要基因型/亞型在門（急）診患者與住院患者中分布相似。不同年齡階段，HCV 主要基因型/亞型分布有所不同，共同的是 1b 型占絕對優勢，3b、3a、6a 三種亞型在年齡 30～45 歲間分布明顯高于其他年齡段，在 60 歲以上患者中所占比例最低，1* 型和 2a 型在年齡 45～60 歲間分布高于其他年齡段。
2.3 HCV 主要基因型/亞型患者肝功能和病毒載量分析
為研究 HCV 主要基因型/亞型與臨床特點相關性，隨機抽取其中 1 281 例患者，對 ALT、AST、GGT 和 HCV 病毒載量進行分析，最終納入 844 例完整數據的患者，統計分析結果見表 3。其中住院患者 233 例，占 27.61%（233/844），門（急）診患者 611 例，占 72.39%（611/844）。男性共 424 例，占 50.24%（424/844），平均年齡為 45.59±13.36 歲；女性共 420 例，占 49.76%（420/844），平均年齡 45.09±13.59 歲。
表3
HCV 主要基因型患者肝功能和病毒載量特征分析（Q25，Q75）
在男性中，ALT水平在不同 HCV 基因型/亞型依次為 6a>3a>3b>1*>2a>1b，中位數值分別為 104.00、92.00、84.50、79.00、57.00、52.00 U/L；在女性中，ALT水平依次為 3a>3b>1*>2a>1b>6a，中位數值分別為 77.00、74.00、63.00、53.00、50.00、40.00 U/L。
HCV 患者最終可能會發展成為肝硬化和肝癌。對已發展為肝硬化和肝癌患者進行統計分析，其結果見表 4。納入的 94 例肝硬化患者中，HCV 基因型/亞型 1b、3b、1*、3a、2a、6a 各型均有，其中 1b 型最高為 42 例，占 4.98%（42/844）。納入的 6 例肝癌患者中，僅有 1b 和 3b 型檢出，分別占 0.59%（5/844）、0.12%（1/844）。HCV 常與 HBV 共同感染，本研究進一步分析了 HBV/HCV 符合感染情況，結果見表 5。在 844 例 HCV 感染者中，復合感染患者共 53 例，占 6.28%（53/844），HCV 基因型/亞型各型均有檢出，3a 型檢出最高，占 1.42%（12/844）。
表4
HCV 主要基因型患者肝硬化和肝癌情況分析 [n（%）]
表5
HCV 主要基因型患者復合感染 HBV 情況分析
3 討論
HCV 感染多呈隱匿性，易慢性化，病毒在體內不斷復制造成肝細胞持續性損傷，肝臟代償功能強，不斷增生修復，反復損傷修復易致肝硬化形成，最終可發展成肝癌。丙型肝炎呈全球流行，不同性別、年齡、種族人群均對 HCV 均易感。由于 HCV 變異對以往的抗 HCV 藥物產生耐藥，丙肝的防治面臨新挑戰。目前，HCV 基因型呈多樣化，據 WHO 修訂的最新《丙型肝炎防治指南》[7]，HCV 的防治應基于 病毒基因型用藥，以達到經濟有效的效果。HCV 基因型分布具有地域性、人種性差異[8-14]，對某特定區域的丙肝的防治，應以該地區流行的 HCV 基因型為基礎。為對本地區的丙肝防治工作提供參考，我們開展了本研究。
本次研究發現 HCV 主要基因型為 1b 型，占 66.42%，與文獻結果一致[15]，但在 6a 型分布排在第六，占 3.41%，與廣東、廣西、福建等地分布有明顯差異[16-18]。本研究主要 HCV 基因亞型種類與國內沿海地區報道一致[10]，與寧夏不同[19]，寧夏地區以 3a 型為主，其次為 1b 型，而本地區以 1b 型為主，其次為 3b 型，這可能是由于民族差異引起。本次研究發現在本地區有不能成功分亞型的 1 型 HCV 基因型，文中以 1* 表示，而在以往本地或周邊地區 HCV 基因型研究中直接省略了此型[20]。本研究發現該型所占比例較高，排在第三位，占 6.57%。HCV 基因型的分布除與地域、人種有關外，還與感染途徑有關[21]。在我國云南與緬甸、越南相鄰的地區由于毒品交易[22,23]，該地區 HCV 基因型分布與四川及東南沿海地區有明顯不同，一些少見基因型如 6u、6n 在該地區占較大比例。本研究發現的 HCV 基因型分布與海南島原住民相比[24]也有明顯不同，在海南島 6a 型占主要，比例最高，而四川以 1b 型為主。本地區 HCV 基因型/亞型分布在性別、年齡上有差異，與先前報道一致[25]，但具體分布與先前報道不同，多因研究人群地域性的差異引起。
本研究發現本地 HCV 主要基因型/亞型 1b、3b、1*、2a、3a、6a 患者基線病毒載量水平無論男女，比例幾乎相當，與部分文獻報道一致[26]，但卻與林江等[27]的研究不同，這可能是由于樣本量差異導致的。ALT 無論性別、HCV 型別均高于正常參考值，6a 型男性 ALT 最高，而在女性中最低；6a 型女性 AST 值正常，GGT 值在女性中無論 HCV 型別均正常，而男性除 2a、6a 型外 GGT 值均偏高，可能與男性飲酒相關。HCV 感染進展多緩慢，感染后 20 年，一般人群肝硬化發生率為 5%～15%[28]，單采血漿還輸血細胞感染者約 1.4%～10.0%[29,30]；中年因輸血感染者 18%～30%[28]；兒童和年輕女性為 2%～4%[31]。本研究發現肝硬化在上述主要 HCV 基因型/亞型均有檢出，合計 11.14%，與文獻報道一致。HCV 相關的肝細胞性肝癌（HCC）主要見于肝硬化和進展期肝纖維化患者，發生率在感染30年后為 1%～3%[32]，本研究發現肝癌發生率為 0.71%，低于文獻報道值，只有 1b、3b 型有檢出，可能與本研究為橫斷面研究有關。本研究還發現上述六種 HCV 主要基因型/亞型均可與HBV復合感染，高于文獻[33]報道值（4.11%），可能由于本次研究人群較局限有關，其他研究所選擇人群是全國多中心隊列研究，另外與本地區 HBV 感染率高于其他地區有關。有研究[33]報道， HCV 和 HBV 復合感染更易導致肝硬化的發生，應密切關注此類患者。
本研究采用巢式 PCR 反應對 HCV 5’-UTR 區域進行逆轉錄測序分型，有文獻報道此種方法可以用于檢測 1 ~ 5 型，不適合用于亞型的檢測及 1 型與 6 型的區分[34,35]。如其他試劑不能區分亞型，可采用基于核心區或 NS5B 區的 DNA 測序法[36]。本研究中 1* 型因方法學限制無法區分亞型，一定程度上影響了其他亞型的分布，在接下的研究中還應對此型換用基于核心區或 NS5B 區的 DNA 測序法進行亞型分析。此外，本研究中肝癌樣本例數偏少，在肝癌患者中 HCV 主要基因型的分布特點具有局限性，國內關于肝癌患者 HCV 基因型分布特點研究文獻尚未查見，國內多集中在 1b 型的機制和流行病學研究[37,38]；國外 Silini 等[39]曾對 166 例肝細胞癌、219 例肝硬化和 593 例慢性丙型肝炎進行研究發現，肝細胞癌患者中 1b 型陽性率顯著高于慢性丙型肝炎和肝硬化，國外關于 HCV 相關肝癌的研究也多集中在發病率等流行病學特點[40-42]，對肝癌患者 HCV 基因型分布特點甚少關注，需進一步擴大樣本量研究。
本研究發現在華西醫院 HCV 患者HCV基因型分布具有多樣化，具有獨特的特點，這為丙肝的防治工作提供了有力保障。將來的研究可繼續區分 1* 型及隨訪觀察各型患者預后，指導臨床治療。
