引用本文： 陳曉凡, 朱衛豐, 陳和利, 劉紅寧, 趙海平, 查青林, 肖笑飛. 參靈草口服液治療無癥狀HIV感染者療效的自身前后對照研究. 中國循證醫學雜志, 2014, 14(11): 1299-1303. doi: 10.7507/1672-2531.20140211 復制
艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）引起，以免疫缺陷為特征的一種全身性嚴重慢性傳染病。早期無特異性表現，隨病情進展可出現發熱、淋巴結腫大、厭食、慢性腹瀉、體質量減輕、乏力等全身癥狀，進而并發各種嚴重機會性感染或惡性腫瘤等而導致死亡。按1995年制定的中華人民共和國國家標準《HIV/AIDS診斷標準及處理原則》（GB16000-1995）[1]及衛生部頒布的《艾滋病診療指南（2011）》 [2]，艾滋病的全病程可分為急性期、無癥狀期和艾滋病期。
2004年世界衛生組織（WHO）根據臨床表現、CD4+ T細胞計數和血漿HIV-RNA提出“艾滋病臨床分期及抗病毒治療指征”，建議感染HIV后的無癥狀期因藥物副反應、費用及耐藥等原因，不使用高效抗反轉錄病毒療法[3]。目前國內外尚無公認的有效治療措施[4]，但有研究者開始探索根據HIV感染者的體質、生理機能及心理狀態、較輕的癥狀表現、CD4+細胞計數及血漿HIV-RNA含量進行中醫辨證治療[5]。
參靈草口服液是由冬蟲夏草、西洋參、靈芝、玫瑰花配伍而成，蟲草填精，西洋參補氣，靈芝安神，配伍玫瑰花則可精、氣、神同補，有五臟并調的功效，能緩解體力疲勞和增強免疫力等。
本研究采用參靈草口服液對無癥狀HIV感染者進行干預，比較自身干預前后效果，客觀評價其能否降低HIV-RNA載量，提高免疫力，改善HIV感染者的生活質量。
1 對象與方法
1.1 研究對象
2012年2～4月在江西省胸科醫院及南昌市第九醫院就診，符合納入標準的HIV無癥狀感染者。
1.2 納入與排除標準
1.2.1 納入標準
參照中華醫學會《艾滋病診療指南（2011）》 [2]，確診為HIV無癥狀感染者，且CD4+細胞≥200個/mm3，性別、年齡不限；志愿受試且填寫知情同意書。服用參靈草口服液期間，不再服用其他藥物。
1.2.2 排除標準
①妊娠或哺乳期婦女；②合并有嚴重心、肝（AST、ALT正常值的2倍以上）、腎（BUN、CR異常）疾病患者、結核病患者及精神病患者；③其他原因不能按時服藥者；④過敏體質及對本藥過敏者；⑤有酗酒史（每日飲酒250 mL以上）。
1.3 診斷及療效評價標準
參照中華醫學會《艾滋病診療指南（2011）》 [2]）制定。
1.3.1 HIV無癥狀感染者診斷標準
有流行病學史且HIV陽性，或僅HIV陽性。
1.3.2 HIV療效評價標準
治療有效與否主要通過病毒學和免疫學指標進行評估。
1.3.2.1 病毒學指標
①有效：病毒載量降低至 > 1 log/mL或檢測不出；②穩定：病毒載量上升或下降 < 1 log/mL；③無效：病毒載量上升 > 1 log/mL。
1.3.2.2 免疫學指標
①有效：CD4+細胞升高≥30%或100個/mm3；②穩定：CD4+細胞升高或下降 < 30%或100個/mm3；③無效：CD4+細胞下降≥30%或100個/mm3。
1.4 干預方法
受試者每日口服參靈草口服液（江中藥業股份有限公司，批號G20080675）1次，每次1支（200 mL/支），連續服用6個月，以HIV-RNA載量和CD4+細胞計數為觀察指標，分別在入組時、入組后2個月、4個月和6個月時檢測HIV-RNA載量和CD4+細胞計數值的變化。
分析受試者口服參靈草前后不同時間點各觀察指標值差異有無統計學意義。按照《艾滋病診療指南（2011）》 [2]評價標準，根據HIV-RNA載量和CD4+細胞計數2項艾滋病免疫指標進行綜合評價，以其判別參靈草對艾滋病病毒攜帶者的功效。
1.5 材料與方法
1.5.1 HIV-RNA載量測定方法
1.5.1.1 標本來源
無癥狀HIV感染者入組時、入組后2個月、4個月和6個月的血漿樣本。
1.5.1.2 儀器與試劑
Trizol試劑購自Invitrogen公司；AMV反轉錄酶、T7RNA聚合酶、RNA酶抑制劑、核糖核酸酶H均購自NEB公司；鏈親和素板、對硝基苯磷酸二鈉（pNPP）購自Amresc公司；堿性磷酸酶標記的抗地高辛抗體購自羅氏公司；NASBA擴增基礎試劑盒購自法國梅里埃生物公司。
1.5.1.3 引物設計與合成
根據HIV病毒各亞型基因組5′端高度保守序列設計引物及探針。序列如下，正向：5′-TGA TGC AAG GTC GAT ATG AGC TCA ATA AAG CTT GCC TTG A-3′，下劃線部分與檢測探針互補；反向：5′-AAT TCT AAT ACG ACT CAC TAT AGG GGG GCG CCA CTG CTA GAG-AAT TCT A-3′，下劃線部分為T7啟動子序列。捕獲探針：５′-生物素-TCT GGT AAC TAG AGA TCC CTC-3′，為基因特異探針；檢測探針：5′-DIG-TGA TGC AAG GTC GAT ATG AG-3′。正、反向引物預計擴增片段長度為120 bp，引物及探針均由上海生物工程有限公司合成。
1.5.1.4 方法
NASBA擴增反應程序Trizol法提取樣品總RNA：取0.5 μL RNA和10 μL反應混合液[含40 mmol/L、pH 8.5的Tris-HCI，120 mmol/L的KCL，10 mmol/L的MgCl2，5 mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT），１mmol/L的脫氧核苷三磷酸（dNTP），10 mmol/L的核苷三磷酸（NTP），100 g/L的二甲基亞砜（DMSO），上、下游引物各0.2 umol/L]加入到600 μL離心管中，65管加熱2 min，以去除RNA二級結構。41結冷卻2 min后迅速加入酶混合液5 μL（含40 U SupeScript Ⅱ反轉錄酶、80 U T7RNA聚合酶、0.2 U核糖核酸酶H），反應總體積為20 μL，輕彈混勻后40混反應90 min，然后于-20后終止反應。
擴增產物的瓊脂糖凝膠電泳檢測：焦碳酸二乙酯（DEPC）水配制2%瓊脂糖凝膠及1×TAB，凝膠及電泳儀在H2O2中浸泡15 min，用DEPC水沖洗，取恒溫核酸擴增物于5 V/cm電壓電泳15 min，凝膠成像系統觀察。
擴增產物的ELISA檢測：①鏈霉抗生物素蛋白包被的酶標板的制備：將鏈霉親和素用pH 8.6、0.05 mol/L的碳酸鹽緩沖液稀釋為0.012 5 mg/mL，包被酶標板，每孔100 μL，室溫過夜；采用含1%牛血清白蛋白（BSA），pH 9.6、0.05 mol/L的碳酸鹽緩沖液封閉酶標板，每孔100 μL，370孵育2 h，PBST洗板3～5次，避光保存備用。②雜交：每孔加入43 μL雜交緩沖液、2 μL探針混合液和5 μL NASBA擴增產物，振蕩混勻，41產孵育30 min，TBST洗板3～5次。③結合酶標抗體：每孔加入100 μL堿性磷酸酶標記的抗地高辛抗體（1:5 000稀釋），室溫孵育30 min，TBST洗板3～5次。④顯色：每孔加入100 μL pNPP，室溫避光顯色10 min，每孔加入100 μL碳酸鈉終止顯色。⑤讀值：用酶標儀測定405 nm波長的光密度（OD）值。
1.5.2 CD4+細胞測定方法
1.5.2.1 標本來源
無癥狀HIV感染者入組時、入組后2個月、4個月和6個月的血漿樣本。
1.5.2.2 儀器與試劑
CD4+單克隆抗體（Immuno Tech公司）、淋巴細胞分離液（上海試劑二廠）和IAC Scallibour流式細胞儀（美國Becton Dickinson公司）。
1.5.2.3 方法
采血100 μL加1:50肝素30 μL分成2試管，分別加入20 μLCD4+單克隆抗體混勻，25隆避光孵育30 min后，加入2 mL質量濃度為8.3 g/L的NH4Cl溶紅細胞液靜置10 min后1 500 r/min離心5 min，100 r/min離心3 min 2次后上機。采用IAC Scalibour流式細胞儀，波長488 nm。采用Callquest功能軟件進行參數獲取和分析。
1.5.3 血常規28項測定方法
1.5.3.1 標本來源
無癥狀HIV感染者入組時、入組后2個月、4個月和6個月的血漿樣本。
1.5.3.2 儀器與試劑
血常規采用法國ABX120全血細胞計數儀，血生化采用全自動生化分析儀（AUTOLAB），試劑和質控品均為原裝配套。標本測定前均對儀器進行常規保養并且質控品通過測定。
1.5.3.3 觀察指標
血常規觀察指標：血紅蛋白（Hb）、紅細胞計數（RBC）、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白含量（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細胞分布寬度（RDW）、血小板計數（PLT）、血小板壓積（PCT）、平均血小板體積（MPV）、血小板分布寬度（PDW）、白細胞計數（WBC）、嗜中性粒細胞百分數（N或GRAN）、嗜中性粒細胞絕對值（N或GRAN）、嗜酸性粒細胞百分比（E或EOS）、嗜酸性粒細胞絕對值（E或EOS）、嗜堿性粒細胞百分比（B或BASO）、嗜堿性粒細胞絕對值（B或BASO）、單核細胞百分比（M或MONO）、單核細胞絕對值（M或MONO）、淋巴細胞百分數（L或LYM）、淋巴細胞絕對值（L或LYM）中間值細胞百分數（MID）。
血生化觀察指標：測定白蛋白（ALB）質量濃度和堿性磷酸酶（ALP）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）活性以及尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）濃度等血液生化指標。
1.6 統計分析
采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計量資料以
2 結果
2.1 一般情況
共納入25例患者（江西省胸科醫院6例，南昌市第九醫院19例），男性明顯多于女性；參考WHO對年齡分段的標準，年齡主要集中在青壯年及中年（15～59歲）（表 1）。治療4個月時脫落/失訪3例，剩余22例完成6個月的治療（圖 1）。
圖1
試驗流程圖
表1
納入對象的性別、年齡分布
2.2 分析結果
2.2.1 HIV-RNA載量
總體上，隨著口服參靈草時間的延長，不同時間點研究對象的HIV-RNA平均載量并未出現規律性變化（表 2和表 3）。
表2
不同時間點研究對象的艾滋病HIV-RNA平均載量比較
表3
不同時間點研究對象的艾滋病HIV-RNA Log10載量比較
口服2個月時，HIV-RNA載量下降52.0%，不變12.0%；口服4個月時，HIV-RNA載量下降36.4%，不變9.1%；口服6個月時，HIV-RNA載量下降54.4%，不變9.1%。不同時間點HIV-RNA和HIV-RNA Log10載量變化差異均無統計學意義（P均 > 0.05），具體見表 2和表 3。
2.2.2 CD4+細胞計數
口服2個月時，CD4+細胞計數下降56.0%，不變4.0%；口服4個月時，CD4+細胞計數下降36.4%；口服6個月時，CD4+細胞計數下降31.8%。不同時間點CD4+細胞平均計數變化差異無統計學意義（P > 0.05）（表 4）。
表4
不同時間點研究對象的CD4+ T細胞平均計數比較
口服2個月、4個月及6個月時，CD4+細胞（個/μL）與口服前相比，其差異均無統計學意義；不同時間點CD4+細胞計數差異無統計學意義（表 5），但隨著口服參靈草時間的延長，不同時間點CD4+細胞計數有逐漸上升的趨勢。
表5
不同時間點研究對象的CD4+ T細胞計數比較
2.2.3 對HIV-RNA載量和CD4+細胞數變化的綜合功效
采用HIV-RNA載量和CD4+細胞計數對參靈草口服液治療HIV患者療效進行綜合評價。口服參靈草2個月后與口服前比較，總有效率達92.0%；隨著參靈草口服液服用時間的延長，其有效率處于穩定狀態，其穩定例數有增加的趨勢，但其差異無統計學意義（P > 0.05）（表 6）。
表6
參靈草口服液不同服用時辰的綜合療效比較
2.2.4 血常規及血生化指標檢測總結果
入組時、口服2個月、4個月及6個月各檢驗血常規指標和血生化指標1次。結果顯示：共檢驗血常規指標28項，其中不同時間點14項指標差異雖有統計學意義，但其波動均在人體正常值范圍內；共檢驗血生化指標47項，其中27項在不同時間點其差異經統計學檢驗無顯著性意義，20項指標差異雖有統計學意義，但其波動也都在人體正常值范圍內。
3 討論
艾滋病是20世紀80年代新發現的一種死亡率極高的傳染病，主要是因HIV感染人體后，CD4+細胞進行性減少，細胞免疫功能受損。因此，動態性監測CD4+細胞計數是機體免疫狀態的最好體現，具有了解病程進展、確定疾病分期和治療時機、判斷治療效果和HIV感染者臨床合并癥的重要臨床意義[8, 9]。隨著HIV病毒在人體內高速復制，CD4+細胞被破壞，當CD4+細胞計數 < 200個/μL時，很容易發生各種機會性感染和腫瘤； > 200個/μL時，多數艾滋病定義性疾病會非常少見[10]。
中醫認為艾滋病屬中醫疫病范疇，《素問·刺法論》所說：“五疫之至，皆相染易，無問大小，病狀相似。”艾滋病的外因是感染溫邪淫毒HIV，損傷機體；內因是正氣受損，氣血虧虛。其基本病機是溫邪淫毒循經、乘虛而入，伏于血絡，內舍營分，熱陷營血，氣血失和，臟腑功能失調所致。病屬本虛標實[6]。徐志明等[7]提出了治療艾滋病兩大原則：扶正培本、祛邪解毒。參靈草口服液以冬蟲夏草、西洋參、靈芝配伍，旨在全面調養精、氣、神，整體提高機體免疫力，阻斷病情從無癥狀的HIV感染者向AIDS患者發展。
本研究納入25例HIV感染者，每日口服參靈草口服液1支，口服2個月、4個月及6個月，動態監測CD4+細胞計數均值呈逐漸上升的趨勢。入組時有1例CD4+細胞 < 200個/μL，但經過6個月的治療，所有患者CD4+細胞計數均 > 200個/μL。但同時檢測未見HIV-RNA載量出現規律性變化，原因可能在于采用中藥調節患者免疫、改善患者體內環境是一個較長的過程，其重點在于調節患者的免疫力，促進重建免疫平衡。
此外，本研究在隨訪4個月時失訪3例，若把這3例認定為均向更差的方向發展，即HIV-RNA載量升高、CD4+細胞計數降低，進行統計分析后發現與現有結果無差別，即失訪對結果并無影響。
同時在治療前后不同時間點檢測血常規指標28項及血生化指標47項，結果所有指標均在人體正常值范圍內波動，提示參靈草口服液服用安全。2005年6月～2008年6月云南省8所中醫醫療機構回顧性調查1 914例中醫藥或中西藥合用治療HIV/AIDS的患者，結果顯示中醫藥能有效改善HIV/AIDS患者癥狀體征和生存質量，提高CD4+細胞計數，且具有較好的安全性[11]。本研究結果顯示參靈草口服液的作用與該回顧性分析結果一致。
本研究的局限性：研究實施過程中，口服液均由患者帶回家中自行服用，難以監管，導致1例脫落，2例失訪；研究采用自身前后對照設計，其論證強度較差。
綜上所述，本研究結果顯示，口服參靈草2個月后與口服前比較，總有效率達92.0%。隨著服用參靈草時間的延長其有效率穩定，有效例數有增加的趨勢。25例受試者口服參靈草前、后不同時間點HIV-RNA載量和CD4+細胞計數雖無統計學意義，但隨著口服參靈草時間的延長，其CD4+細胞計數有逐漸上升的趨勢。
艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）引起，以免疫缺陷為特征的一種全身性嚴重慢性傳染病。早期無特異性表現，隨病情進展可出現發熱、淋巴結腫大、厭食、慢性腹瀉、體質量減輕、乏力等全身癥狀，進而并發各種嚴重機會性感染或惡性腫瘤等而導致死亡。按1995年制定的中華人民共和國國家標準《HIV/AIDS診斷標準及處理原則》（GB16000-1995）[1]及衛生部頒布的《艾滋病診療指南（2011）》 [2]，艾滋病的全病程可分為急性期、無癥狀期和艾滋病期。
2004年世界衛生組織（WHO）根據臨床表現、CD4+ T細胞計數和血漿HIV-RNA提出“艾滋病臨床分期及抗病毒治療指征”，建議感染HIV后的無癥狀期因藥物副反應、費用及耐藥等原因，不使用高效抗反轉錄病毒療法[3]。目前國內外尚無公認的有效治療措施[4]，但有研究者開始探索根據HIV感染者的體質、生理機能及心理狀態、較輕的癥狀表現、CD4+細胞計數及血漿HIV-RNA含量進行中醫辨證治療[5]。
參靈草口服液是由冬蟲夏草、西洋參、靈芝、玫瑰花配伍而成，蟲草填精，西洋參補氣，靈芝安神，配伍玫瑰花則可精、氣、神同補，有五臟并調的功效，能緩解體力疲勞和增強免疫力等。
本研究采用參靈草口服液對無癥狀HIV感染者進行干預，比較自身干預前后效果，客觀評價其能否降低HIV-RNA載量，提高免疫力，改善HIV感染者的生活質量。
1 對象與方法
1.1 研究對象
2012年2～4月在江西省胸科醫院及南昌市第九醫院就診，符合納入標準的HIV無癥狀感染者。
1.2 納入與排除標準
1.2.1 納入標準
參照中華醫學會《艾滋病診療指南（2011）》 [2]，確診為HIV無癥狀感染者，且CD4+細胞≥200個/mm3，性別、年齡不限；志愿受試且填寫知情同意書。服用參靈草口服液期間，不再服用其他藥物。
1.2.2 排除標準
①妊娠或哺乳期婦女；②合并有嚴重心、肝（AST、ALT正常值的2倍以上）、腎（BUN、CR異常）疾病患者、結核病患者及精神病患者；③其他原因不能按時服藥者；④過敏體質及對本藥過敏者；⑤有酗酒史（每日飲酒250 mL以上）。
1.3 診斷及療效評價標準
參照中華醫學會《艾滋病診療指南（2011）》 [2]）制定。
1.3.1 HIV無癥狀感染者診斷標準
有流行病學史且HIV陽性，或僅HIV陽性。
1.3.2 HIV療效評價標準
治療有效與否主要通過病毒學和免疫學指標進行評估。
1.3.2.1 病毒學指標
①有效：病毒載量降低至 > 1 log/mL或檢測不出；②穩定：病毒載量上升或下降 < 1 log/mL；③無效：病毒載量上升 > 1 log/mL。
1.3.2.2 免疫學指標
①有效：CD4+細胞升高≥30%或100個/mm3；②穩定：CD4+細胞升高或下降 < 30%或100個/mm3；③無效：CD4+細胞下降≥30%或100個/mm3。
1.4 干預方法
受試者每日口服參靈草口服液（江中藥業股份有限公司，批號G20080675）1次，每次1支（200 mL/支），連續服用6個月，以HIV-RNA載量和CD4+細胞計數為觀察指標，分別在入組時、入組后2個月、4個月和6個月時檢測HIV-RNA載量和CD4+細胞計數值的變化。
分析受試者口服參靈草前后不同時間點各觀察指標值差異有無統計學意義。按照《艾滋病診療指南（2011）》 [2]評價標準，根據HIV-RNA載量和CD4+細胞計數2項艾滋病免疫指標進行綜合評價，以其判別參靈草對艾滋病病毒攜帶者的功效。
1.5 材料與方法
1.5.1 HIV-RNA載量測定方法
1.5.1.1 標本來源
無癥狀HIV感染者入組時、入組后2個月、4個月和6個月的血漿樣本。
1.5.1.2 儀器與試劑
Trizol試劑購自Invitrogen公司；AMV反轉錄酶、T7RNA聚合酶、RNA酶抑制劑、核糖核酸酶H均購自NEB公司；鏈親和素板、對硝基苯磷酸二鈉（pNPP）購自Amresc公司；堿性磷酸酶標記的抗地高辛抗體購自羅氏公司；NASBA擴增基礎試劑盒購自法國梅里埃生物公司。
1.5.1.3 引物設計與合成
根據HIV病毒各亞型基因組5′端高度保守序列設計引物及探針。序列如下，正向：5′-TGA TGC AAG GTC GAT ATG AGC TCA ATA AAG CTT GCC TTG A-3′，下劃線部分與檢測探針互補；反向：5′-AAT TCT AAT ACG ACT CAC TAT AGG GGG GCG CCA CTG CTA GAG-AAT TCT A-3′，下劃線部分為T7啟動子序列。捕獲探針：５′-生物素-TCT GGT AAC TAG AGA TCC CTC-3′，為基因特異探針；檢測探針：5′-DIG-TGA TGC AAG GTC GAT ATG AG-3′。正、反向引物預計擴增片段長度為120 bp，引物及探針均由上海生物工程有限公司合成。
1.5.1.4 方法
NASBA擴增反應程序Trizol法提取樣品總RNA：取0.5 μL RNA和10 μL反應混合液[含40 mmol/L、pH 8.5的Tris-HCI，120 mmol/L的KCL，10 mmol/L的MgCl2，5 mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT），１mmol/L的脫氧核苷三磷酸（dNTP），10 mmol/L的核苷三磷酸（NTP），100 g/L的二甲基亞砜（DMSO），上、下游引物各0.2 umol/L]加入到600 μL離心管中，65管加熱2 min，以去除RNA二級結構。41結冷卻2 min后迅速加入酶混合液5 μL（含40 U SupeScript Ⅱ反轉錄酶、80 U T7RNA聚合酶、0.2 U核糖核酸酶H），反應總體積為20 μL，輕彈混勻后40混反應90 min，然后于-20后終止反應。
擴增產物的瓊脂糖凝膠電泳檢測：焦碳酸二乙酯（DEPC）水配制2%瓊脂糖凝膠及1×TAB，凝膠及電泳儀在H2O2中浸泡15 min，用DEPC水沖洗，取恒溫核酸擴增物于5 V/cm電壓電泳15 min，凝膠成像系統觀察。
擴增產物的ELISA檢測：①鏈霉抗生物素蛋白包被的酶標板的制備：將鏈霉親和素用pH 8.6、0.05 mol/L的碳酸鹽緩沖液稀釋為0.012 5 mg/mL，包被酶標板，每孔100 μL，室溫過夜；采用含1%牛血清白蛋白（BSA），pH 9.6、0.05 mol/L的碳酸鹽緩沖液封閉酶標板，每孔100 μL，370孵育2 h，PBST洗板3～5次，避光保存備用。②雜交：每孔加入43 μL雜交緩沖液、2 μL探針混合液和5 μL NASBA擴增產物，振蕩混勻，41產孵育30 min，TBST洗板3～5次。③結合酶標抗體：每孔加入100 μL堿性磷酸酶標記的抗地高辛抗體（1:5 000稀釋），室溫孵育30 min，TBST洗板3～5次。④顯色：每孔加入100 μL pNPP，室溫避光顯色10 min，每孔加入100 μL碳酸鈉終止顯色。⑤讀值：用酶標儀測定405 nm波長的光密度（OD）值。
1.5.2 CD4+細胞測定方法
1.5.2.1 標本來源
無癥狀HIV感染者入組時、入組后2個月、4個月和6個月的血漿樣本。
1.5.2.2 儀器與試劑
CD4+單克隆抗體（Immuno Tech公司）、淋巴細胞分離液（上海試劑二廠）和IAC Scallibour流式細胞儀（美國Becton Dickinson公司）。
1.5.2.3 方法
采血100 μL加1:50肝素30 μL分成2試管，分別加入20 μLCD4+單克隆抗體混勻，25隆避光孵育30 min后，加入2 mL質量濃度為8.3 g/L的NH4Cl溶紅細胞液靜置10 min后1 500 r/min離心5 min，100 r/min離心3 min 2次后上機。采用IAC Scalibour流式細胞儀，波長488 nm。采用Callquest功能軟件進行參數獲取和分析。
1.5.3 血常規28項測定方法
1.5.3.1 標本來源
無癥狀HIV感染者入組時、入組后2個月、4個月和6個月的血漿樣本。
1.5.3.2 儀器與試劑
血常規采用法國ABX120全血細胞計數儀，血生化采用全自動生化分析儀（AUTOLAB），試劑和質控品均為原裝配套。標本測定前均對儀器進行常規保養并且質控品通過測定。
1.5.3.3 觀察指標
血常規觀察指標：血紅蛋白（Hb）、紅細胞計數（RBC）、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白含量（MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（MCHC）、紅細胞分布寬度（RDW）、血小板計數（PLT）、血小板壓積（PCT）、平均血小板體積（MPV）、血小板分布寬度（PDW）、白細胞計數（WBC）、嗜中性粒細胞百分數（N或GRAN）、嗜中性粒細胞絕對值（N或GRAN）、嗜酸性粒細胞百分比（E或EOS）、嗜酸性粒細胞絕對值（E或EOS）、嗜堿性粒細胞百分比（B或BASO）、嗜堿性粒細胞絕對值（B或BASO）、單核細胞百分比（M或MONO）、單核細胞絕對值（M或MONO）、淋巴細胞百分數（L或LYM）、淋巴細胞絕對值（L或LYM）中間值細胞百分數（MID）。
血生化觀察指標：測定白蛋白（ALB）質量濃度和堿性磷酸酶（ALP）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）活性以及尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）濃度等血液生化指標。
1.6 統計分析
采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計量資料以
2 結果
2.1 一般情況
共納入25例患者（江西省胸科醫院6例，南昌市第九醫院19例），男性明顯多于女性；參考WHO對年齡分段的標準，年齡主要集中在青壯年及中年（15～59歲）（表 1）。治療4個月時脫落/失訪3例，剩余22例完成6個月的治療（圖 1）。
圖1
試驗流程圖
表1
納入對象的性別、年齡分布
2.2 分析結果
2.2.1 HIV-RNA載量
總體上，隨著口服參靈草時間的延長，不同時間點研究對象的HIV-RNA平均載量并未出現規律性變化（表 2和表 3）。
表2
不同時間點研究對象的艾滋病HIV-RNA平均載量比較
表3
不同時間點研究對象的艾滋病HIV-RNA Log10載量比較
口服2個月時，HIV-RNA載量下降52.0%，不變12.0%；口服4個月時，HIV-RNA載量下降36.4%，不變9.1%；口服6個月時，HIV-RNA載量下降54.4%，不變9.1%。不同時間點HIV-RNA和HIV-RNA Log10載量變化差異均無統計學意義（P均 > 0.05），具體見表 2和表 3。
2.2.2 CD4+細胞計數
口服2個月時，CD4+細胞計數下降56.0%，不變4.0%；口服4個月時，CD4+細胞計數下降36.4%；口服6個月時，CD4+細胞計數下降31.8%。不同時間點CD4+細胞平均計數變化差異無統計學意義（P > 0.05）（表 4）。
表4
不同時間點研究對象的CD4+ T細胞平均計數比較
口服2個月、4個月及6個月時，CD4+細胞（個/μL）與口服前相比，其差異均無統計學意義；不同時間點CD4+細胞計數差異無統計學意義（表 5），但隨著口服參靈草時間的延長，不同時間點CD4+細胞計數有逐漸上升的趨勢。
表5
不同時間點研究對象的CD4+ T細胞計數比較
2.2.3 對HIV-RNA載量和CD4+細胞數變化的綜合功效
采用HIV-RNA載量和CD4+細胞計數對參靈草口服液治療HIV患者療效進行綜合評價。口服參靈草2個月后與口服前比較，總有效率達92.0%；隨著參靈草口服液服用時間的延長，其有效率處于穩定狀態，其穩定例數有增加的趨勢，但其差異無統計學意義（P > 0.05）（表 6）。
表6
參靈草口服液不同服用時辰的綜合療效比較
2.2.4 血常規及血生化指標檢測總結果
入組時、口服2個月、4個月及6個月各檢驗血常規指標和血生化指標1次。結果顯示：共檢驗血常規指標28項，其中不同時間點14項指標差異雖有統計學意義，但其波動均在人體正常值范圍內；共檢驗血生化指標47項，其中27項在不同時間點其差異經統計學檢驗無顯著性意義，20項指標差異雖有統計學意義，但其波動也都在人體正常值范圍內。
3 討論
艾滋病是20世紀80年代新發現的一種死亡率極高的傳染病，主要是因HIV感染人體后，CD4+細胞進行性減少，細胞免疫功能受損。因此，動態性監測CD4+細胞計數是機體免疫狀態的最好體現，具有了解病程進展、確定疾病分期和治療時機、判斷治療效果和HIV感染者臨床合并癥的重要臨床意義[8, 9]。隨著HIV病毒在人體內高速復制，CD4+細胞被破壞，當CD4+細胞計數 < 200個/μL時，很容易發生各種機會性感染和腫瘤； > 200個/μL時，多數艾滋病定義性疾病會非常少見[10]。
中醫認為艾滋病屬中醫疫病范疇，《素問·刺法論》所說：“五疫之至，皆相染易，無問大小，病狀相似。”艾滋病的外因是感染溫邪淫毒HIV，損傷機體；內因是正氣受損，氣血虧虛。其基本病機是溫邪淫毒循經、乘虛而入，伏于血絡，內舍營分，熱陷營血，氣血失和，臟腑功能失調所致。病屬本虛標實[6]。徐志明等[7]提出了治療艾滋病兩大原則：扶正培本、祛邪解毒。參靈草口服液以冬蟲夏草、西洋參、靈芝配伍，旨在全面調養精、氣、神，整體提高機體免疫力，阻斷病情從無癥狀的HIV感染者向AIDS患者發展。
本研究納入25例HIV感染者，每日口服參靈草口服液1支，口服2個月、4個月及6個月，動態監測CD4+細胞計數均值呈逐漸上升的趨勢。入組時有1例CD4+細胞 < 200個/μL，但經過6個月的治療，所有患者CD4+細胞計數均 > 200個/μL。但同時檢測未見HIV-RNA載量出現規律性變化，原因可能在于采用中藥調節患者免疫、改善患者體內環境是一個較長的過程，其重點在于調節患者的免疫力，促進重建免疫平衡。
此外，本研究在隨訪4個月時失訪3例，若把這3例認定為均向更差的方向發展，即HIV-RNA載量升高、CD4+細胞計數降低，進行統計分析后發現與現有結果無差別，即失訪對結果并無影響。
同時在治療前后不同時間點檢測血常規指標28項及血生化指標47項，結果所有指標均在人體正常值范圍內波動，提示參靈草口服液服用安全。2005年6月～2008年6月云南省8所中醫醫療機構回顧性調查1 914例中醫藥或中西藥合用治療HIV/AIDS的患者，結果顯示中醫藥能有效改善HIV/AIDS患者癥狀體征和生存質量，提高CD4+細胞計數，且具有較好的安全性[11]。本研究結果顯示參靈草口服液的作用與該回顧性分析結果一致。
本研究的局限性：研究實施過程中，口服液均由患者帶回家中自行服用，難以監管，導致1例脫落，2例失訪；研究采用自身前后對照設計，其論證強度較差。
綜上所述，本研究結果顯示，口服參靈草2個月后與口服前比較，總有效率達92.0%。隨著服用參靈草時間的延長其有效率穩定，有效例數有增加的趨勢。25例受試者口服參靈草前、后不同時間點HIV-RNA載量和CD4+細胞計數雖無統計學意義，但隨著口服參靈草時間的延長，其CD4+細胞計數有逐漸上升的趨勢。
