引用本文： 陳正舉, 古秋梅, 許春燕, 劉志強, 申枚靈, 孫懷強. 活體成像系統在小鼠原位肺癌模型建立及評價中的應用. 中國呼吸與危重監護雜志, 2021, 20(11): 802-806. doi: 10.7507/1671-6205.202105060 復制
肺癌是目前全球范圍內發病率和病死率最高的惡性腫瘤，大約80%的肺癌屬于非小細胞肺癌（NSCLC）[1]。靶向藥物的出現為NSCLC治療提供了新方向，一些靶向藥物確實展現出了優良的臨床獲益，但存在諸多不良反應，控制疾病進展、提高患者生存質量以及對指導臨床合理用藥已成為醫學研究的重點[2-3]。觀察腫瘤的生長并評估藥物對腫瘤治療的效果具有重要意義。藥物研發基于動物研究，如何制作穩定的動物模型極為重要，肺癌動物模型中最常見的是移植模型，而原位模型與之相比更能夠為肺癌研究提供客觀的依據。其中，BALB/c裸鼠是最為廣泛使用的實驗動物之一[4-5]。
然而，目前通過氣管內接種，肺中接種腫瘤組織或在免疫缺陷動物的皮下接種建立異位移植性腫瘤模型的傳統方法構建肺癌模型[6]存在許多困難，如生物學特性、不穩定性、技術問題和可再現性[7]。雖然通過尾靜脈注射肺癌細胞建立肺癌原位瘤模型可以更好地模擬腫瘤的體內發生發展過程，但是該傳統建模方法的缺點是無法實時觀察腫瘤生長情況，需要通過殺死裸鼠取材來驗證建模是否成功，不僅增加實驗成本，浪費大量時間，而且由于實驗動物之間的個體差異可能造成結果誤差。有研究成功應用小動物活體成像系統（IVIS）監測活體動物模型中炎癥進展和喉部腫瘤發展，解決了這些傳統方法所造成的實驗結果誤差[8-10]。基于此，我們通過IVIS無創、實時、動態地監測肺癌在裸鼠體內的生長和擴散，有效地降低了實驗成本，提高了實驗效率。現將結果報道如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物和分組
選擇6～8周齡，16～18 g的雄性BALB/c裸鼠［北京維通利華動物有限公司，證書編號SCXK（北京）2010-0002］。由四川大學華西醫院動物倫理委員會批準了該實驗［證書編號SYXK（四川）2013-119］。裸鼠飼養在特定的無病原體條件下，環境溫度18～25 °C，濕度50%～70%。將獨立通氣籠（IVC）、飲用水和楊木墊料在121 °C滅菌20 min，常規飲食1周后，將12只裸鼠隨機分為四組（n=3）：A、B、C和D組。A組為對照組，不接種腫瘤細胞。B、C組和D組均為實驗組，均接受了腫瘤細胞尾部注射，B組為A549細胞接種后7 d的裸鼠，C組為A549細胞接種后14 d的裸鼠，D組為A549細胞接種后21 d的裸鼠[11]。每天對裸鼠稱重并根據動物倫理委員會[12]的要求進行檢查。如果體重減輕超過20%，同時接種狀況和活動性較差，則達到終點。如果存在這些跡象，將通過頸脫位法處死裸鼠，并進行補充。
1.2 細胞培養
帶熒光素酶標記的人源肺腺癌A549細胞系購買于上海中橋周生物技術有限公司[13]。采用含10%胎牛血清（MP Biomedical，南美血清，A31608-02）和100 μL/mL青霉素鏈霉素（Thermo，Life Technologies，15140122）的RPMI1640（Thermo，Life Technologies，C11875500 BT）的培養基溶液在37 °C和5% CO2的培養箱中培養A549細胞，每兩天更換1次培養基，用0.25%的胰蛋白酶（Hy Clone，Typ，SH30042.01）消化細胞[14]，對A549細胞進行光學監測，評估細胞生長和融合性。
1.3 IVIS成像系統
設備型號IVIS Spectrum（品牌Caliper Life Sciences），設備參數為：① 10個窄帶寬激發光濾光片415～760 nm（30 nm帶寬）；② 18個窄帶寬散射光濾光片490～850 nm（20 nm帶寬）；③ 量子效率：>85%（500～700 nm）；>30%（400～900 nm）；④ 像素尺寸13.5μm；⑤ 最小視野3.9 cm×3.9 cm；⑥ 最大視野23 cm×23 cm，最多可同時進行5只小鼠高通量動物全身成像；⑦ 圖像像素2048×2048像素，最小像素分辨率20 μm。
1.4 原位肺癌模型建立
收集指數生長期的人源A549細胞，先用磷酸鹽緩沖液（PBS；HyClone，SH30256.01）清洗2次，用0.25%胰蛋白酶消化，1000 r/min離心5 min去上清，再用RPMI1640培養基清洗，1000 r/min離心5 min去上清，計數，PBS稀釋至3×106/mL細胞濃度，輕輕搖晃混勻，制備出A549細胞懸浮液。將制備好的A549細胞懸浮液通過尾靜脈進行注射，每只劑量0.2 mL、濃度為6×105/mL[15]。在模型建立后，每天上午9點觀察并記錄裸鼠的精神狀態、飲食；同時按照實驗設計，每隔7天記錄體重生長情況[16]。在模型建立后第0、7、14和21天稱量裸鼠體重和檢測生物發光信號；剝離肺組織，統計腫瘤結節數，并進行病理染色[17]。未能存活或未能形成腫瘤的裸鼠將被排除在外。
1.5 活體成像
應用IVIS評估裸鼠體內肺部腫瘤生長情況。向裸鼠腹腔注射50 μL D-熒光素鉀鹽（1 mg/mL）（Thermo，Life Technologies，12505），記錄注射時間。在注射后的第7分鐘將裸鼠放入麻醉箱中進行異氟烷吸入性麻醉，第9分鐘將3只裸鼠整齊放入活體成像系統的暗箱室，調整平臺及視野，開啟激光源，采用儀器配備的軟件對圖像和數據進行分析處理，第14分鐘時獲取成像圖片。計算發光細胞在活體動物內的光子數（參數：曝光時間5 min/次），利用IVIS中的生物發光技術定期監測裸鼠腫瘤的生長動態。
1.6 肺組織病理學檢查
活體成像后處死裸鼠并取肺臟，PBS清洗后觀察肺部表面成瘤情況，腫瘤灶為類圓形半透明凸起病灶[18]，將取下的肺組織用10%多聚甲醛固定，常規制作石蠟切片，經蘇木精–伊紅（HE）染色后在光學顯微鏡下進行觀察[19]。
1.7 統計學方法
采用SPSS 24.0統計軟件。計量數據用均數±標準差（
±s）來表示。顯著性差異采用單因素方差分析及t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 IVIS的監測和評價
IVIS結果表明，在注射細胞后第7天即可以檢測到明顯的生物發光信號，且生物發光度隨時間逐漸增加（圖1a），生物發光的信號平均光子通量值分別為A組（768.77±126.97）Ph/s，B組（6172.75±1066.56）Ph/s，C組10214.23±2472.46）Ph/s，D組（32095.71±7433.64）Ph/s（圖1b）。
圖1
IVIS光譜檢測像及生物發光信號平均光子通量值曲線
a. IVIS光譜檢測像；b. 生物發光信號平均光子通量值曲線（
2.2 肺形態和成瘤情況觀察
注射A549細胞后第7天，解剖發現裸鼠肺部組織表面出現類圓形、半透明狀的凸起病灶，成瘤率為100%；注射后第14天，裸鼠肺部組織表面類圓形、半透明狀的凸起病灶較第7天增多；注射后第21天，裸鼠肺部表面類圓形、半透明狀的凸起病灶較第14天明顯增多（圖2）。對各時點肺組織中腫瘤結節數進行計數，結果顯示，隨著時間的延長，裸鼠肺組織的腫瘤結節數顯著增加（圖3）。
圖2
各組肺臟大體像
a. A組，未注射A549細胞肺組織普通大體像；b. B組，A549細胞注射7 d后肺組織普通大體像；c. C 組，A549細胞注射14 d后肺組織普通大體像；d. D 組，A549細胞注射21 d后肺組織普通大體像。對照組肺組織紅潤光滑，實驗組肺組織存在類圓形、半透明狀的凸起病灶（黑箭），第21天組的病灶較第7天和第14天明顯增多。
圖3
各組肺組織中腫瘤灶個數統計
2.3 肺組織病理學評價
與對照組相比較，實驗組第7天時的裸鼠肺組織中肺泡增生，數量增多，肺泡內的上皮細胞呈圓形或者橢圓形，細胞異型性增大，排列擁擠，細胞核大，染色質濃集，腫瘤間質增生的纖維結締組織內可見少量浸潤的淋巴細胞，腫瘤周邊肺組織內可見新生血管，隨著時間的進展，第14天、第21天組的裸鼠肺組織與第7天時相比，細胞異型性越發明顯，細胞核大，深染，腫瘤間質反應明顯，新生血管數量增多（圖4）。
圖4
BALB/c裸鼠肺組織病理檢查像（HE）
A組：未注射A549細胞的肺組織，肺泡結構完整，細胞排列規則，無異型性增生。B組：A549細胞注射后7 d的肺組織，肺泡數量增多，肺泡上皮出現輕度異型性改變（黑箭），細胞核變大，染色質濃集，肺泡周圍間質可見輕度淋巴細胞浸潤，腫瘤周邊可見新生小血管；C組：A549細胞注射后14 d的肺組織，與B組對比，肺泡數量增多，肺泡上皮細胞異型性更大，肺泡周圍間質淋巴細胞浸潤更加明顯，腫瘤周邊新生小血管（黑箭）增多；D組：A549細胞注射后21 d的肺組織，與C組對比，肺泡上皮細胞異型性明顯變大，肺泡周圍間質淋巴細胞彌漫浸潤（黑箭），腫瘤周邊新生小血管數量顯著增多。
2.4 IVIS信號強度與腫瘤灶個數的相關性
為進一步明確IVIS信號強度對裸鼠肺腫瘤灶形成的指示作用，對A、B、C和D組所包含12個樣本的IVIS信號強度和腫瘤灶個數的相關性進行分析，發現IVIS信號強度與裸鼠肺腫瘤灶個數正相關，相關系數為0.7996（圖5）。
圖5
腫瘤灶個數與平均光子數呈正相關
3 討論
肺癌是嚴重威脅人類健康的重大疾病，開發能動態觀察并量化原位肺癌演進的模型具有重要的科學意義和臨床價值。腫瘤實驗動物模型在腫瘤發病機制研究以及藥物篩選等領域扮演關鍵的作用，構建一個能高度模擬患者發病進程和發病機制的動物模型并實施高效觀測，才能提升機制研究和藥物篩選的準確性[20-21]。以免疫缺陷小鼠為基礎建立的皮下移植瘤模型、原位模型以及轉移模型得到廣泛的應用[22]，BALB/c裸鼠是最為廣泛使用的實驗動物之一[4-5]。BALB/c裸鼠是位于11號染色體上的隱性基因Foxn1突變所致，無胸腺，缺乏成熟T淋巴細胞[4]，因此其抵抗力差，必須在IVC隔離籠具中飼養[5]。然而，這些建模方案均局限于無法實時監測動物模型是否成功建立，檢測指標要腫瘤生長到一定程度才能獲得，實驗方案得不到優化，實驗動物用量大，個體間人為操作存在差異，實驗效率低，實驗成本高。IVIS的出現彌補了以往建模方法中的不足，它可以無創、實時、動態地監測活體內病變的發生發展過程，解決了這些傳統方法檢測所造成的實驗結果誤差[8-10]。
在本研究中，我們通過尾靜脈注射A549細胞成功構建了裸鼠原位肺癌模型，并建立了基于IVIS的原位肺癌生長情況的評價系統。首先每間隔7天記錄BALB/c裸鼠生長狀態及體重數據，再通過IVIS無創實時地監測BALB/c裸鼠體內肺癌生長情況并記錄不同時間段生物發光信號光子通量值，IVIS監測后再采集裸鼠肺組織進行病理學分析。對BALB/c裸鼠體重的監測、肺組織的HE染色、腫瘤體積的測量等傳統方法獲取的結果與IVIS監測的體內肺癌生長和生物發光的信號光子通量值一致，表明了這些傳統檢查方法與IVIS熒光監測的一致性，印證了既往的文獻報道結果[23-27]。因此，本研究為靶向肺癌藥物的研發提供了一個可靠的模型和評價體系。
本研究存在以下不足：第一，樣本量小；第二，少量BALB/c裸鼠在注射細胞懸液后，出現靜脈栓塞并當場死亡；第三，少量BALB/c裸鼠因為自身免疫問題，后期無法成瘤。該不足有望通過在細胞懸液的制備、用量把控以及注射技巧進行改進，同時在開展實驗前一定要在最適周齡進行。
綜上所述，本研究應用IVIS對裸鼠原位肺癌模型進行了動態評估，發現隨著接種時間的延長，IVIS的熒光強度逐漸增強，肺部腫瘤灶個數與IVIS的熒光強度具有相關性。IVIS可有效評估裸鼠原位肺癌模型的建立，真實反映小鼠原位肺癌的生長情況，可為肺癌發病和藥物篩選相關研究提供良好的評價體系，具有重要的科學意義和應用前景。
利益沖突：本研究不涉及任何利益沖突。
肺癌是目前全球范圍內發病率和病死率最高的惡性腫瘤，大約80%的肺癌屬于非小細胞肺癌（NSCLC）[1]。靶向藥物的出現為NSCLC治療提供了新方向，一些靶向藥物確實展現出了優良的臨床獲益，但存在諸多不良反應，控制疾病進展、提高患者生存質量以及對指導臨床合理用藥已成為醫學研究的重點[2-3]。觀察腫瘤的生長并評估藥物對腫瘤治療的效果具有重要意義。藥物研發基于動物研究，如何制作穩定的動物模型極為重要，肺癌動物模型中最常見的是移植模型，而原位模型與之相比更能夠為肺癌研究提供客觀的依據。其中，BALB/c裸鼠是最為廣泛使用的實驗動物之一[4-5]。
然而，目前通過氣管內接種，肺中接種腫瘤組織或在免疫缺陷動物的皮下接種建立異位移植性腫瘤模型的傳統方法構建肺癌模型[6]存在許多困難，如生物學特性、不穩定性、技術問題和可再現性[7]。雖然通過尾靜脈注射肺癌細胞建立肺癌原位瘤模型可以更好地模擬腫瘤的體內發生發展過程，但是該傳統建模方法的缺點是無法實時觀察腫瘤生長情況，需要通過殺死裸鼠取材來驗證建模是否成功，不僅增加實驗成本，浪費大量時間，而且由于實驗動物之間的個體差異可能造成結果誤差。有研究成功應用小動物活體成像系統（IVIS）監測活體動物模型中炎癥進展和喉部腫瘤發展，解決了這些傳統方法所造成的實驗結果誤差[8-10]。基于此，我們通過IVIS無創、實時、動態地監測肺癌在裸鼠體內的生長和擴散，有效地降低了實驗成本，提高了實驗效率。現將結果報道如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物和分組
選擇6～8周齡，16～18 g的雄性BALB/c裸鼠［北京維通利華動物有限公司，證書編號SCXK（北京）2010-0002］。由四川大學華西醫院動物倫理委員會批準了該實驗［證書編號SYXK（四川）2013-119］。裸鼠飼養在特定的無病原體條件下，環境溫度18～25 °C，濕度50%～70%。將獨立通氣籠（IVC）、飲用水和楊木墊料在121 °C滅菌20 min，常規飲食1周后，將12只裸鼠隨機分為四組（n=3）：A、B、C和D組。A組為對照組，不接種腫瘤細胞。B、C組和D組均為實驗組，均接受了腫瘤細胞尾部注射，B組為A549細胞接種后7 d的裸鼠，C組為A549細胞接種后14 d的裸鼠，D組為A549細胞接種后21 d的裸鼠[11]。每天對裸鼠稱重并根據動物倫理委員會[12]的要求進行檢查。如果體重減輕超過20%，同時接種狀況和活動性較差，則達到終點。如果存在這些跡象，將通過頸脫位法處死裸鼠，并進行補充。
1.2 細胞培養
帶熒光素酶標記的人源肺腺癌A549細胞系購買于上海中橋周生物技術有限公司[13]。采用含10%胎牛血清（MP Biomedical，南美血清，A31608-02）和100 μL/mL青霉素鏈霉素（Thermo，Life Technologies，15140122）的RPMI1640（Thermo，Life Technologies，C11875500 BT）的培養基溶液在37 °C和5% CO2的培養箱中培養A549細胞，每兩天更換1次培養基，用0.25%的胰蛋白酶（Hy Clone，Typ，SH30042.01）消化細胞[14]，對A549細胞進行光學監測，評估細胞生長和融合性。
1.3 IVIS成像系統
設備型號IVIS Spectrum（品牌Caliper Life Sciences），設備參數為：① 10個窄帶寬激發光濾光片415～760 nm（30 nm帶寬）；② 18個窄帶寬散射光濾光片490～850 nm（20 nm帶寬）；③ 量子效率：>85%（500～700 nm）；>30%（400～900 nm）；④ 像素尺寸13.5μm；⑤ 最小視野3.9 cm×3.9 cm；⑥ 最大視野23 cm×23 cm，最多可同時進行5只小鼠高通量動物全身成像；⑦ 圖像像素2048×2048像素，最小像素分辨率20 μm。
1.4 原位肺癌模型建立
收集指數生長期的人源A549細胞，先用磷酸鹽緩沖液（PBS；HyClone，SH30256.01）清洗2次，用0.25%胰蛋白酶消化，1000 r/min離心5 min去上清，再用RPMI1640培養基清洗，1000 r/min離心5 min去上清，計數，PBS稀釋至3×106/mL細胞濃度，輕輕搖晃混勻，制備出A549細胞懸浮液。將制備好的A549細胞懸浮液通過尾靜脈進行注射，每只劑量0.2 mL、濃度為6×105/mL[15]。在模型建立后，每天上午9點觀察并記錄裸鼠的精神狀態、飲食；同時按照實驗設計，每隔7天記錄體重生長情況[16]。在模型建立后第0、7、14和21天稱量裸鼠體重和檢測生物發光信號；剝離肺組織，統計腫瘤結節數，并進行病理染色[17]。未能存活或未能形成腫瘤的裸鼠將被排除在外。
1.5 活體成像
應用IVIS評估裸鼠體內肺部腫瘤生長情況。向裸鼠腹腔注射50 μL D-熒光素鉀鹽（1 mg/mL）（Thermo，Life Technologies，12505），記錄注射時間。在注射后的第7分鐘將裸鼠放入麻醉箱中進行異氟烷吸入性麻醉，第9分鐘將3只裸鼠整齊放入活體成像系統的暗箱室，調整平臺及視野，開啟激光源，采用儀器配備的軟件對圖像和數據進行分析處理，第14分鐘時獲取成像圖片。計算發光細胞在活體動物內的光子數（參數：曝光時間5 min/次），利用IVIS中的生物發光技術定期監測裸鼠腫瘤的生長動態。
1.6 肺組織病理學檢查
活體成像后處死裸鼠并取肺臟，PBS清洗后觀察肺部表面成瘤情況，腫瘤灶為類圓形半透明凸起病灶[18]，將取下的肺組織用10%多聚甲醛固定，常規制作石蠟切片，經蘇木精–伊紅（HE）染色后在光學顯微鏡下進行觀察[19]。
1.7 統計學方法
采用SPSS 24.0統計軟件。計量數據用均數±標準差（±s）來表示。顯著性差異采用單因素方差分析及t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 IVIS的監測和評價
IVIS結果表明，在注射細胞后第7天即可以檢測到明顯的生物發光信號，且生物發光度隨時間逐漸增加（圖1a），生物發光的信號平均光子通量值分別為A組（768.77±126.97）Ph/s，B組（6172.75±1066.56）Ph/s，C組10214.23±2472.46）Ph/s，D組（32095.71±7433.64）Ph/s（圖1b）。
圖1
IVIS光譜檢測像及生物發光信號平均光子通量值曲線
a. IVIS光譜檢測像；b. 生物發光信號平均光子通量值曲線（
2.2 肺形態和成瘤情況觀察
注射A549細胞后第7天，解剖發現裸鼠肺部組織表面出現類圓形、半透明狀的凸起病灶，成瘤率為100%；注射后第14天，裸鼠肺部組織表面類圓形、半透明狀的凸起病灶較第7天增多；注射后第21天，裸鼠肺部表面類圓形、半透明狀的凸起病灶較第14天明顯增多（圖2）。對各時點肺組織中腫瘤結節數進行計數，結果顯示，隨著時間的延長，裸鼠肺組織的腫瘤結節數顯著增加（圖3）。
圖2
各組肺臟大體像
a. A組，未注射A549細胞肺組織普通大體像；b. B組，A549細胞注射7 d后肺組織普通大體像；c. C 組，A549細胞注射14 d后肺組織普通大體像；d. D 組，A549細胞注射21 d后肺組織普通大體像。對照組肺組織紅潤光滑，實驗組肺組織存在類圓形、半透明狀的凸起病灶（黑箭），第21天組的病灶較第7天和第14天明顯增多。
圖3
各組肺組織中腫瘤灶個數統計
2.3 肺組織病理學評價
與對照組相比較，實驗組第7天時的裸鼠肺組織中肺泡增生，數量增多，肺泡內的上皮細胞呈圓形或者橢圓形，細胞異型性增大，排列擁擠，細胞核大，染色質濃集，腫瘤間質增生的纖維結締組織內可見少量浸潤的淋巴細胞，腫瘤周邊肺組織內可見新生血管，隨著時間的進展，第14天、第21天組的裸鼠肺組織與第7天時相比，細胞異型性越發明顯，細胞核大，深染，腫瘤間質反應明顯，新生血管數量增多（圖4）。
圖4
BALB/c裸鼠肺組織病理檢查像（HE）
A組：未注射A549細胞的肺組織，肺泡結構完整，細胞排列規則，無異型性增生。B組：A549細胞注射后7 d的肺組織，肺泡數量增多，肺泡上皮出現輕度異型性改變（黑箭），細胞核變大，染色質濃集，肺泡周圍間質可見輕度淋巴細胞浸潤，腫瘤周邊可見新生小血管；C組：A549細胞注射后14 d的肺組織，與B組對比，肺泡數量增多，肺泡上皮細胞異型性更大，肺泡周圍間質淋巴細胞浸潤更加明顯，腫瘤周邊新生小血管（黑箭）增多；D組：A549細胞注射后21 d的肺組織，與C組對比，肺泡上皮細胞異型性明顯變大，肺泡周圍間質淋巴細胞彌漫浸潤（黑箭），腫瘤周邊新生小血管數量顯著增多。
2.4 IVIS信號強度與腫瘤灶個數的相關性
為進一步明確IVIS信號強度對裸鼠肺腫瘤灶形成的指示作用，對A、B、C和D組所包含12個樣本的IVIS信號強度和腫瘤灶個數的相關性進行分析，發現IVIS信號強度與裸鼠肺腫瘤灶個數正相關，相關系數為0.7996（圖5）。
圖5
腫瘤灶個數與平均光子數呈正相關
3 討論
肺癌是嚴重威脅人類健康的重大疾病，開發能動態觀察并量化原位肺癌演進的模型具有重要的科學意義和臨床價值。腫瘤實驗動物模型在腫瘤發病機制研究以及藥物篩選等領域扮演關鍵的作用，構建一個能高度模擬患者發病進程和發病機制的動物模型并實施高效觀測，才能提升機制研究和藥物篩選的準確性[20-21]。以免疫缺陷小鼠為基礎建立的皮下移植瘤模型、原位模型以及轉移模型得到廣泛的應用[22]，BALB/c裸鼠是最為廣泛使用的實驗動物之一[4-5]。BALB/c裸鼠是位于11號染色體上的隱性基因Foxn1突變所致，無胸腺，缺乏成熟T淋巴細胞[4]，因此其抵抗力差，必須在IVC隔離籠具中飼養[5]。然而，這些建模方案均局限于無法實時監測動物模型是否成功建立，檢測指標要腫瘤生長到一定程度才能獲得，實驗方案得不到優化，實驗動物用量大，個體間人為操作存在差異，實驗效率低，實驗成本高。IVIS的出現彌補了以往建模方法中的不足，它可以無創、實時、動態地監測活體內病變的發生發展過程，解決了這些傳統方法檢測所造成的實驗結果誤差[8-10]。
在本研究中，我們通過尾靜脈注射A549細胞成功構建了裸鼠原位肺癌模型，并建立了基于IVIS的原位肺癌生長情況的評價系統。首先每間隔7天記錄BALB/c裸鼠生長狀態及體重數據，再通過IVIS無創實時地監測BALB/c裸鼠體內肺癌生長情況并記錄不同時間段生物發光信號光子通量值，IVIS監測后再采集裸鼠肺組織進行病理學分析。對BALB/c裸鼠體重的監測、肺組織的HE染色、腫瘤體積的測量等傳統方法獲取的結果與IVIS監測的體內肺癌生長和生物發光的信號光子通量值一致，表明了這些傳統檢查方法與IVIS熒光監測的一致性，印證了既往的文獻報道結果[23-27]。因此，本研究為靶向肺癌藥物的研發提供了一個可靠的模型和評價體系。
本研究存在以下不足：第一，樣本量小；第二，少量BALB/c裸鼠在注射細胞懸液后，出現靜脈栓塞并當場死亡；第三，少量BALB/c裸鼠因為自身免疫問題，后期無法成瘤。該不足有望通過在細胞懸液的制備、用量把控以及注射技巧進行改進，同時在開展實驗前一定要在最適周齡進行。
綜上所述，本研究應用IVIS對裸鼠原位肺癌模型進行了動態評估，發現隨著接種時間的延長，IVIS的熒光強度逐漸增強，肺部腫瘤灶個數與IVIS的熒光強度具有相關性。IVIS可有效評估裸鼠原位肺癌模型的建立，真實反映小鼠原位肺癌的生長情況，可為肺癌發病和藥物篩選相關研究提供良好的評價體系，具有重要的科學意義和應用前景。
利益沖突：本研究不涉及任何利益沖突。
