引用本文： 郝月琴, 王欣, 李猛, 陳建攸, 唐華平. 慢性阻塞性肺疾病患者 T 細胞亞群變化及 CD8+CD28+ T 細胞與 C 反應蛋白相關性探討. 中國呼吸與危重監護雜志, 2020, 19(1): 75-77. doi: 10.7507/1671-6205.201812018 復制
慢性阻塞性肺疾病（簡稱慢阻肺）已經成為世界范圍內的公共健康安全問題，慢阻肺急性加重在我國的死亡原因中，農村居首位，城市居第四位。反復感染是導致慢阻肺加重的最主要原因之一。國內外的研究表明，T 細胞介導的炎癥作為一個關鍵組成部分，參與了慢阻肺急性加重的發病機制[1-3]，在慢阻肺患者體內存在 CD4+ T 細胞與 CD8+ T 細胞失衡[4-7]。但關于 CD8+ T 細胞亞群在慢阻肺急性加重發病機制中的作用尚缺乏深入的研究。近年來越來越多的證據表明，CD8＋CD28＋ T 細胞即細胞毒性 T 細胞，在機體抗感染、抗腫瘤方面有著重要的作用[8-9]。為此，我們觀察了慢阻肺患者急性加重期及穩定期不同時間段 CD8+ T 細胞亞群的變化，并就急性加重期 CD8+CD28+ T 細胞及 C 反應蛋白（C reactive protein，CRP）的相關性進行了探討。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
選擇 2015 年 5 月至 2017 年 10 月青島市市立醫院呼吸科慢阻肺急性加重期的住院患者 30 例，治療后均緩解。其中男 16 例，女 14 例；年齡 61～84 歲，中位年齡 72 歲，平均年齡（72±9）歲；平均病程（18±11）年；平均吸煙指數（45±18）支年。慢阻肺急性加重期和穩定期診斷均符合中華醫學會呼吸病學分會《慢性阻塞性肺疾病診治指南》（2013 年修訂版）中制訂的診斷標準，且要求近 3 個月內無急性加重史。同時排除合并有肺部其他疾病和過敏性疾病病史，影響 T 細胞變化及與 CRP 升高相關的疾病如急性心肌梗死、惡性腫瘤、結締組織病、慢性肝腎疾病、炎性腸病、急性腦血管意外、血液病、服免疫抑制劑中、活動性結核及肺部以外的細菌感染等。本研究經過青島市市立醫院倫理委員會審批通過。
1.2 方法
患者入院后對其病情進行評估并給予常規治療，包括氧療、抗感染、支氣管舒張劑等，避免使用免疫調節劑。分別于治療前及治療后 2 周、3 個月時進行支氣管舒張試驗評估患者氣流受限程度，并空腹常規采靜脈血 2 mL 作 CRP 檢測，并抽晨血 3 mL 入乙二胺四乙酸管，取 100 μL 全血于試管中，分別加入 CD3、CD4、CD8 單克隆熒光抗體，后室溫避光靜置 10 min，再加入紅細胞溶解液靜置 10 min，以 1 000 r/min 的離心速度離心 10 min，棄上清。以磷酸鹽緩沖液洗滌并懸浮細胞，在美國 Beckman 公司的流式細胞儀檢測 T 細胞亞群，CXP 軟件分析表達量。
1.3 統計學方法
應用 Windows Excel 軟件建立數據庫，采用 SPSS 19.0 統計軟件。各時期數據所得結果以均數±標準差（
±s）表示。慢阻肺患者不同分期進行比較時方差齊采用 t 檢驗，方差不齊采用 t’ 檢驗，相關性分析采用 Pearson 直線相關性分析。P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 肺功能比較
慢阻肺急性加重患者治療后肺功能指標第 1 秒用力呼氣容積/用力肺活量的比值（FEV1/FVC）和第 1 秒用力呼氣容積占預計值百分比（FEV1%pred）明顯改善。結果見表 1。
表1
慢阻肺急性加重患者治療前后肺功能比較（n=30，
）
2.2 外周血 T 細胞亞群比較
慢阻肺急性加重期患者的細胞免疫功能低下，CD4+/CD8+比值下降，在治療后 CD3+、CD4+百分比及 CD4+/CD8+比值均逐漸升高，但治療前與治療后 2 周對比差異無統計學意義，治療前與治療后 3 個月后對比差異有統計學意義（P<0.05）。結果見表 2。
表2
慢阻肺急性加重患者治療前后外周血 T 細胞亞群變化（n=30，
）
2.3 外周血 CD8+CD28+T 細胞與 CRP 的相關性
治療前與治療后對比 CD8+CD28+ T 細胞及 CRP 水平均顯著下降（P<0.05），結果見表 3。外周血 CD8+CD28+ T 細胞與 CRP 水平呈正相關（r = 0.86，P<0.05），結果見圖 1。
圖1
慢阻肺急性加重患者外周血 CD8+CD28+T 細胞與 CRP 的相關性分析
表3
慢阻肺急性加重患者治療前后外周血 CD8+CD28+ T 細胞及 CRP 變化（n=30，
）
3 討論
慢阻肺的特征是對肺組織中有毒顆粒或氣體的慢性炎癥反應，也與涉及各種免疫細胞的全身效應有關，包括巨噬細胞、中性粒細胞，特別是 T 細胞。T 細胞的活化、增殖，作為一種啟動因子，在慢阻肺急性加重的氣道炎癥發生發展中起到重要作用[1-5]。然而，先前國內外發表的研究關注熱點一直在于 CD4+ 細胞與 CD8+ 細胞之間的失衡方面[6-9]，尤其是氣道 T 細胞亞群的失衡[10-11]。最近的一些研究表明 CD8+ T 細胞在慢阻肺發病機制中起著關鍵作用[12]，慢阻肺不僅表現為肺部炎癥，而且伴隨全身性炎癥反應。認識慢阻肺全身性炎癥反應可能對患者病情的評估和治療更有意義。因此，我們不僅觀察了慢阻肺患者急性加重期及穩定期不同時間段外周血 T 細胞亞群的變化，更側重觀察了外周血 CD8+ T 細胞亞群的變化，并就急性加重期殺傷性 T 細胞（CD8+CD28+）及與 CRP 的相關性進行了探討。
本研究結果提示慢阻肺急性加重期外周血 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+與緩解期相比均明顯降低（P<0.05），這與此前國內外的諸多研究結果相似。隨著研究進一步深入，我們發現慢阻肺急性加重期患者除了 CD4+/CD8+細胞亞群失衡外，也存在著 CD8+ T 細胞亞群免疫功能紊亂，這與國外的一些研究結果類似[12]。CD8+ T 細胞根據是否表達 CD28 可以分為兩個亞群，即 CD8+CD28+ T 細胞（Tc）和 CD8+CD28－ T 細胞（Ts）。CD8+CD28+ T 細胞即細胞毒性 T 細胞，起殺傷靶細胞的作用，能夠找到機體內那些已經被病毒及細菌感染、腫瘤侵犯的細胞，然后像殺手那樣將這些細胞摧毀掉，因此又被稱為殺傷性 T 細胞，在機體抗感染、抗腫瘤方面有著重要的作用[13]。目前尚未查閱到對慢阻肺急性加重患者外周血 CD8+CD28+ T 細胞與炎性指標 CRP 進行相關性探討的文獻。江雨順等[14]曾進行了慢阻肺患者外周血 T 細胞亞群和 CRP 變化的探討，但并未深入進行 CD8+ T 細胞亞群的探討。本研究發現慢阻肺急性加重期患者外周血中 CD8+CD28+ T 細胞及 CRP 水平均顯著升高，經過系統治療 2 周以后，患者肺功能 FEV1/FVC 及 FEV1%pred 均顯著改善，外周血 CD8+CD28+ T 細胞及 CRP 水平均較治療前顯著下降（P<0.05），二者存在顯著正相關（r = 0.86，P<0.05）。已知 CRP 是一種急性時相反應蛋白，慢阻肺患者氣道炎癥越重，CRP 升高越明顯。由此我們推測慢阻肺急性加重期患者 CD8+CD28+ T 細胞受感染刺激而產生應激性反應，為保護機體免受感染的侵害，CD8+CD28+ T 細胞反應性增多并進一步殺傷機體產生的炎癥細胞。
本研究還發現經過有效治療 2 周后慢阻肺急性加重期患者臨床癥狀及肺功能雖然改善，但機體的細胞免疫失衡并未完全恢復，直至治療后 3 個月機體細胞免疫功能才逐漸恢復正常。由此我們推測慢阻肺急性加重期患者體內 T 細胞亞群失衡的恢復是一個慢性過程，滯后于臨床癥狀的緩解。期待今后有更多的相關研究為免疫調節治療提供依據，給慢阻肺的治療帶來突破。
利益沖突：本研究不涉及任何利益沖突。
慢性阻塞性肺疾病（簡稱慢阻肺）已經成為世界范圍內的公共健康安全問題，慢阻肺急性加重在我國的死亡原因中，農村居首位，城市居第四位。反復感染是導致慢阻肺加重的最主要原因之一。國內外的研究表明，T 細胞介導的炎癥作為一個關鍵組成部分，參與了慢阻肺急性加重的發病機制[1-3]，在慢阻肺患者體內存在 CD4+ T 細胞與 CD8+ T 細胞失衡[4-7]。但關于 CD8+ T 細胞亞群在慢阻肺急性加重發病機制中的作用尚缺乏深入的研究。近年來越來越多的證據表明，CD8＋CD28＋ T 細胞即細胞毒性 T 細胞，在機體抗感染、抗腫瘤方面有著重要的作用[8-9]。為此，我們觀察了慢阻肺患者急性加重期及穩定期不同時間段 CD8+ T 細胞亞群的變化，并就急性加重期 CD8+CD28+ T 細胞及 C 反應蛋白（C reactive protein，CRP）的相關性進行了探討。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
選擇 2015 年 5 月至 2017 年 10 月青島市市立醫院呼吸科慢阻肺急性加重期的住院患者 30 例，治療后均緩解。其中男 16 例，女 14 例；年齡 61～84 歲，中位年齡 72 歲，平均年齡（72±9）歲；平均病程（18±11）年；平均吸煙指數（45±18）支年。慢阻肺急性加重期和穩定期診斷均符合中華醫學會呼吸病學分會《慢性阻塞性肺疾病診治指南》（2013 年修訂版）中制訂的診斷標準，且要求近 3 個月內無急性加重史。同時排除合并有肺部其他疾病和過敏性疾病病史，影響 T 細胞變化及與 CRP 升高相關的疾病如急性心肌梗死、惡性腫瘤、結締組織病、慢性肝腎疾病、炎性腸病、急性腦血管意外、血液病、服免疫抑制劑中、活動性結核及肺部以外的細菌感染等。本研究經過青島市市立醫院倫理委員會審批通過。
1.2 方法
患者入院后對其病情進行評估并給予常規治療，包括氧療、抗感染、支氣管舒張劑等，避免使用免疫調節劑。分別于治療前及治療后 2 周、3 個月時進行支氣管舒張試驗評估患者氣流受限程度，并空腹常規采靜脈血 2 mL 作 CRP 檢測，并抽晨血 3 mL 入乙二胺四乙酸管，取 100 μL 全血于試管中，分別加入 CD3、CD4、CD8 單克隆熒光抗體，后室溫避光靜置 10 min，再加入紅細胞溶解液靜置 10 min，以 1 000 r/min 的離心速度離心 10 min，棄上清。以磷酸鹽緩沖液洗滌并懸浮細胞，在美國 Beckman 公司的流式細胞儀檢測 T 細胞亞群，CXP 軟件分析表達量。
1.3 統計學方法
應用 Windows Excel 軟件建立數據庫，采用 SPSS 19.0 統計軟件。各時期數據所得結果以均數±標準差（±s）表示。慢阻肺患者不同分期進行比較時方差齊采用 t 檢驗，方差不齊采用 t’ 檢驗，相關性分析采用 Pearson 直線相關性分析。P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 肺功能比較
慢阻肺急性加重患者治療后肺功能指標第 1 秒用力呼氣容積/用力肺活量的比值（FEV1/FVC）和第 1 秒用力呼氣容積占預計值百分比（FEV1%pred）明顯改善。結果見表 1。
表1
慢阻肺急性加重患者治療前后肺功能比較（n=30，）
2.2 外周血 T 細胞亞群比較
慢阻肺急性加重期患者的細胞免疫功能低下，CD4+/CD8+比值下降，在治療后 CD3+、CD4+百分比及 CD4+/CD8+比值均逐漸升高，但治療前與治療后 2 周對比差異無統計學意義，治療前與治療后 3 個月后對比差異有統計學意義（P<0.05）。結果見表 2。
表2
慢阻肺急性加重患者治療前后外周血 T 細胞亞群變化（n=30，）
2.3 外周血 CD8+CD28+T 細胞與 CRP 的相關性
治療前與治療后對比 CD8+CD28+ T 細胞及 CRP 水平均顯著下降（P<0.05），結果見表 3。外周血 CD8+CD28+ T 細胞與 CRP 水平呈正相關（r = 0.86，P<0.05），結果見圖 1。
圖1
慢阻肺急性加重患者外周血 CD8+CD28+T 細胞與 CRP 的相關性分析
表3
慢阻肺急性加重患者治療前后外周血 CD8+CD28+ T 細胞及 CRP 變化（n=30，）
3 討論
慢阻肺的特征是對肺組織中有毒顆粒或氣體的慢性炎癥反應，也與涉及各種免疫細胞的全身效應有關，包括巨噬細胞、中性粒細胞，特別是 T 細胞。T 細胞的活化、增殖，作為一種啟動因子，在慢阻肺急性加重的氣道炎癥發生發展中起到重要作用[1-5]。然而，先前國內外發表的研究關注熱點一直在于 CD4+ 細胞與 CD8+ 細胞之間的失衡方面[6-9]，尤其是氣道 T 細胞亞群的失衡[10-11]。最近的一些研究表明 CD8+ T 細胞在慢阻肺發病機制中起著關鍵作用[12]，慢阻肺不僅表現為肺部炎癥，而且伴隨全身性炎癥反應。認識慢阻肺全身性炎癥反應可能對患者病情的評估和治療更有意義。因此，我們不僅觀察了慢阻肺患者急性加重期及穩定期不同時間段外周血 T 細胞亞群的變化，更側重觀察了外周血 CD8+ T 細胞亞群的變化，并就急性加重期殺傷性 T 細胞（CD8+CD28+）及與 CRP 的相關性進行了探討。
本研究結果提示慢阻肺急性加重期外周血 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+與緩解期相比均明顯降低（P<0.05），這與此前國內外的諸多研究結果相似。隨著研究進一步深入，我們發現慢阻肺急性加重期患者除了 CD4+/CD8+細胞亞群失衡外，也存在著 CD8+ T 細胞亞群免疫功能紊亂，這與國外的一些研究結果類似[12]。CD8+ T 細胞根據是否表達 CD28 可以分為兩個亞群，即 CD8+CD28+ T 細胞（Tc）和 CD8+CD28－ T 細胞（Ts）。CD8+CD28+ T 細胞即細胞毒性 T 細胞，起殺傷靶細胞的作用，能夠找到機體內那些已經被病毒及細菌感染、腫瘤侵犯的細胞，然后像殺手那樣將這些細胞摧毀掉，因此又被稱為殺傷性 T 細胞，在機體抗感染、抗腫瘤方面有著重要的作用[13]。目前尚未查閱到對慢阻肺急性加重患者外周血 CD8+CD28+ T 細胞與炎性指標 CRP 進行相關性探討的文獻。江雨順等[14]曾進行了慢阻肺患者外周血 T 細胞亞群和 CRP 變化的探討，但并未深入進行 CD8+ T 細胞亞群的探討。本研究發現慢阻肺急性加重期患者外周血中 CD8+CD28+ T 細胞及 CRP 水平均顯著升高，經過系統治療 2 周以后，患者肺功能 FEV1/FVC 及 FEV1%pred 均顯著改善，外周血 CD8+CD28+ T 細胞及 CRP 水平均較治療前顯著下降（P<0.05），二者存在顯著正相關（r = 0.86，P<0.05）。已知 CRP 是一種急性時相反應蛋白，慢阻肺患者氣道炎癥越重，CRP 升高越明顯。由此我們推測慢阻肺急性加重期患者 CD8+CD28+ T 細胞受感染刺激而產生應激性反應，為保護機體免受感染的侵害，CD8+CD28+ T 細胞反應性增多并進一步殺傷機體產生的炎癥細胞。
本研究還發現經過有效治療 2 周后慢阻肺急性加重期患者臨床癥狀及肺功能雖然改善，但機體的細胞免疫失衡并未完全恢復，直至治療后 3 個月機體細胞免疫功能才逐漸恢復正常。由此我們推測慢阻肺急性加重期患者體內 T 細胞亞群失衡的恢復是一個慢性過程，滯后于臨床癥狀的緩解。期待今后有更多的相關研究為免疫調節治療提供依據，給慢阻肺的治療帶來突破。
利益沖突：本研究不涉及任何利益沖突。
