引用本文： 夏葉舟, 譚小武, 曾賽麗. 姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞侵襲轉移的影響及其可能機制. 中國呼吸與危重監護雜志, 2017, 16(6): 581-585. doi: 10.7507/1671-6205.201706015 復制
肺癌已經成了當今人類最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人類的身體健康，也是目前我國癌癥患者死亡的首要因素[1]。化療作為癌癥治療的手段之一，在肺癌的綜合治療中發揮重要的作用。順鉑在臨床中是一線基礎化療藥物，對殺死癌細胞有肯定的療效，但在殺死腫瘤細胞的時候，也傷害了一些正常的組織，這就使得藥物的劑量在治療時受到限制。姜黃素為姜黃等中藥的根莖中提取出來的酚性化合物，能抑制腫瘤細胞的侵襲與轉移，姜黃素輔助化療可增強腫瘤抑制，減少不良反應，并可增進機體細胞免疫功能，改善腫瘤患者的生活質量。本實驗以人肺癌 A549 細胞為實驗對象，觀察姜黃素聯合順鉑對肺癌細胞侵襲轉移的影響，測定基質金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）、上皮鈣黏素（E-cadherin）的表達，從而探究姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞侵襲轉移的影響及其可能機制的研究。希望能夠為臨床上治療腫瘤、新藥的研發和聯合用藥提供依據。
1 材料及方法
1.1 材料
人肺癌 A549 細胞購自上海細胞中心；姜黃素及 transwell 小室購自上海穎心公司；順鉑購自山東齊魯藥業股份有限公司，四甲基偶氮唑鹽（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）購自美國 Sigma 公司，MMP-9 兔抗人單克隆抗體、E-cadherin 兔抗人單克隆抗體均購自 SantaCrus 公司。細胞培養箱購自美國 Forma 公司，倒置顯微鏡購自日本奧林巴斯，離心機購自德國艾本德股份公司，酶標儀（Rayto RT -6000 型）購自深圳雷杜生命科學股份有限公司，電泳儀（DYY-8C 型）購自北京市六一儀器廠。
1.2 方法
1.2.1 細胞的培養
細胞培養基為 F-12（培養基成分包含 10% 胎牛血清、100 U/mL 鏈霉素、青霉素），將其放置于 37 ℃、5% CO2 恒溫培養箱內。細胞貼壁生長，用 0.25% 的胰蛋白酶消化后進行傳代。
1.2.2 MTT 法檢測細胞的增殖抑制率
取對數生長期的 A549 細胞，將細胞濃度設為 50 000/ml，分別接種于 96 孔板中，每個孔的體積為 150 μl，將其放置在培養箱內培養 24 h，24 h 后小心地吸出上清液。然后分別加入 5、10、20、40 μmol/L 的姜黃素，1、2、4 mg/L 的順鉑及 20 μmol/L 姜黃素聯用濃度分別為 1、2、4 mg/L 順鉑，對照組則加入等體積的培養基（所有孔內體積均為 150 μl）。每組設 5 個復孔。放在培養箱內培養 24 h 以后每個孔加入濃度 5 mg/ml MTT 溶液 20 μl，繼續于培養箱內培養 4 h 后將上清液小心吸取出來，然后再加入二甲基亞砜（每孔 150 μl），充分混勻震蕩 10 min 后再于酶標儀上測定 490 nm 波長下各孔的吸光值（A）。細胞生長抑制率=（對照組 A 值–實驗組 A 值）/對照組 A 值×100%。
1.2.3 Transwell 小室測定細胞的侵襲轉移
（1）Transwell 小室的處理：Transwell 小室之間的膜為 8 μm 聚碳酸醋濾膜，Matrigel 膠在 4 ℃ 冰箱溶解，Transwell 小室底部膜的上室面用 50 mg/L Matrigel 1∶8 稀釋液浸潤，置于 37 ℃ 環境中，30 min 后，小心地吸出細胞培養板內剩余的上清液，每個孔中均加入 50 μl 無血清培養液（含有 10 g/L 牛血清白蛋白）水化，取出已經制好膠的小室。（2）細胞的處理：將肺癌細胞分別用順鉑（2 mg/L）、姜黃素（20 μmol/L）、姜黃素（20 μmol/L）聯合順鉑（2 mg/L）（聯合組）、培養基（對照組）處理 24 h，消化離心以后用無血清的培養基將細胞的濃度調整至 4×105/ml。（3）結果觀察：在下室每個孔中加入 200 μl F-12 培養基。將處理后的細胞分別置于上室中，每孔體積均為 150 μl，每組設 2 個復孔，對照組加入未經藥物處理的細胞。將小室置于 24 孔板上，在下室中加入 F-12 培養基。將小室置于恒溫 37 ℃、5% CO2 培養箱中培養 24 h。沒有遷移的細胞留在 Transwell 小室上室的上表面，用棉簽小心地將其輕輕擦去。侵襲的細胞在 Transwell 小室的下表面，首先用 100% 甲醇固定，然后再用吉姆薩染色。在顯微鏡下（×400）觀察，并隨機取 5 個視野，拍照計數取平均值。實驗重復 3 次。侵襲抑制率=（1–實驗組細胞平均數/對照組細胞平均數）×100%。
1.2.4 蛋白印跡（Western blot）檢測 MMP-9、E-cadherin 蛋白的表達水平
選用對數生長期的肺癌 A549 細胞，將細胞濃度調整為密度為 4×105/ml，然后，接種于 12 孔板內，培養 24 h，使細胞貼壁，小心吸取上清液，然后向每孔中加入藥物：單藥組向每孔細胞分別加入姜黃素（20 μmol/L）、順鉑（2 mg/L），聯合組為姜黃素（20 μmol/L）聯合順鉑（2 mg/L），對照組不加入藥物，每孔設 2 個復孔，放入恒溫培養箱培養 24 h，棄培養液，加入預冷磷酸鹽緩沖液 3 ml 漂洗細胞，置冰上加入含 1% 苯甲基磺酰氟的蛋白裂解液作用 30 min，收集上清液。用試劑盒測定蛋白水平。經 10% 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠電泳，轉移蛋白樣品至硝酸纖維素膜上，5% 脫脂奶粉封閉 90 min，加入一抗溶液（1∶500）4 ℃ 過夜。本研究以磷酸甘油醛脫氫酶（phosphoglyceraldehyde dehydrogenase，GAPDH）作為內參基因，用三羥甲基氨基甲烷（trihydroxymethyl aminomethane，Tris）鹽吐溫緩沖液（含 0.1% 吐溫 20-Tris 緩沖液）洗膜。加入辣根過氧化物酶二抗溶液（1∶2 000），室溫孵育 2 h。洗膜后加入 ECL 化學發光液暗室內曝光膠片，用 UVP 凝膠成像系統觀察結果并拍照，實驗重復 3 次。
1.3 統計學方法
采用 SPSS 19.0 統計軟件。數據用均數±標準差（
）表示，組間比較采用 t 檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 姜黃素、順鉑及姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞增殖的影響
不同濃度姜黃素對肺癌 A549 細胞的增殖有抑制作用，且濃度越高抑制作用越強，其中姜黃素濃度由 20 μmol/L 上升至 40 μmol/L 時與 5 μmol/L 上升至 10 μmol/L、10 μmol/L 上升至 20 μmol/L 相比，上升趨勢不明顯。不同濃度姜黃素之間相比，差異有統計學意義（P<0.01）；不同濃度姜黃素組與對照組相比，差異有統計學意義（P<0.01）；不同濃度順鉑對肺癌肺癌 A549 細胞的增殖抑制有作用，濃度增加，抑制作用越高，與對照組相比，差異有統計學意義（P<0.01）；姜黃素、順鉑聯用對肺癌的抑制作用比單一用藥組明顯增強，聯合組與單一用藥組比較，差異有統計學意義（P<0.01）。結果見表 1。
表1
不同濃度順鉑聯合姜黃素及兩者單用對肺癌 A549 細胞的增殖的影響（n=6，
）
表2
姜黃素、順鉑單用及兩者聯用對肺癌 A549 細胞的侵襲抑制率（
，n=3）
表3
各組 E-cadherin/GAPDH、MMP-9/GAPDH 灰度值比值（n=3，
）
2.2 姜黃素、順鉑及姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞侵襲轉移的影響
姜黃素組、順鉑組與對照組比較，聯合用藥組與同濃度單藥組比較，A549 細胞的穿透數差異均有統計學意義（P<0.01）。結果見圖 1 和表 2。
圖1
Transwell 小室檢測像 a. 對照組； b. 姜黃素組； c. 順鉑組； d. 聯合組。聯合用藥組細胞數較其他組明顯減少，用藥組較對照組細胞數減少
2.3 姜黃素、順鉑及姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞 MMP-9、E-cadherin 蛋白的影響
姜黃素及順鉑均能抑制 MMP-9 蛋白的表達，促進 E-cadherin 蛋白的表達，聯用后效果明顯優于單用。結果見圖 2。各用藥組與對照組比較差異有統計學意義（P<0.01）；聯合用藥組與單藥組比較差異均有統計學意（P<0.01）。各組灰度值比較見表 3。
圖2
Western blot 檢測像 條帶 1：對照組；條帶 2：姜黃素組；條帶 3：順鉑組；條帶 4：聯合組。E-cadherin 蛋白的表達聯合組明顯優于其他組，單藥組優于對照組，MMP-9 蛋白的表達聯合組明顯低于其他組，單藥組低于于對照組
3 討論
徐煒等[2]研究表明姜黃素可以通過調控 LIMK-1/COFILIN 信號通路以及肺癌細胞微絲骨架結構來抑制癌細胞的侵襲及轉移。姜黃素能夠抑制乳腺癌、胃癌、結腸癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌等侵襲轉移[3～5]。大多數肺癌患者確診時已為晚期，目前臨床上有效的治療方法為化療。鉑類藥物是肺癌化療一線藥物。順鉑作為鉑類家族中一員，療效好，但不良反應也較多。姜黃素作為傳統中藥提取物，具有抑制腫瘤轉移的作用，其與順鉑聯用，既能加強療效，又可以減少順鉑的用量，從而減少不良反應。本實驗通過研究不同濃度的姜黃素、順鉑及兩者聯用對肺癌的作用得出結論，姜黃素與順鉑均能抑制肺癌細胞的侵襲轉移，但兩者聯用的效果更強，提示在使用順鉑時可以考慮加入姜黃素，既能減少順鉑的用量，降低不良反應，又可以達到治療的目的。
MTT 實驗中，姜黃素濃度從 5 μmol/L 上升至 40 μmol/L，作用 24 h 后，其對肺癌 A549 細胞的增殖抑制率從 6.50% 上升至 27.93%；順鉑濃度從 1 mg/L 上升至 4 mg/L ，其對肺癌 A549 細胞的增殖抑制率從 7.12% 上升至 26.88%；而 20 μmol/L 的姜黃素與 1 mg/L 的順鉑聯用時，其對肺癌 A549 細胞的增殖抑制率即可達到 28.37%。姜黃素和順鉑對肺癌 A549 細胞的增殖抑制率均呈濃度依賴性，濃度越高，增殖抑制能力越強。姜黃素與順鉑聯用的增殖抑制率明顯優于單藥組，而要達到同樣的增殖抑制率，姜黃素與順鉑聯用時的濃度也遠低于單藥使用時的濃度。
Transwell 實驗中，姜黃素 20 μmol/L 和順鉑 2 mg/L 均能抑制肺癌細胞的轉移，其侵襲抑制率分別 38.7%、36.5%，而兩者聯用后侵襲抑制率為 63.8%，較單一用藥組明顯升高（P<0.01）。結果進一步表明，姜黃素聯合順鉑與兩藥單用相比，能明顯增加對肺癌細胞的侵襲抑制作用。
研究表明，E-cadherin[6]、MMP-9[7-8]目前是評價惡性腫瘤侵襲與轉移的可靠指標。E-cadherin 蛋白屬于鈣黏素分子家族，在細胞骨架形成中具有錨定細胞的作用，當其表達受到干擾而降低時，錨定作用就會減弱，使單一的惡性腫瘤細胞從腫瘤細胞團中脫落，進入血液或者進入淋巴系統而形成新的轉移灶[9-10]。E-cadherin 表達下調普遍地存在于低分化及進展期腫瘤，所以 E-cadherin 被看作腫瘤轉移的抑制因素。同時有研究表明 E-cadherin 與肺癌的侵襲轉移有密切關系。MMP-9 作為目前已知的基質金屬蛋白酶家族中的重要成員，具有促進腫瘤細胞的生長和抑制凋亡，促進腫瘤組織新生血管生成，以及幫助腫瘤細胞逃逸免疫監視等作用，與腫瘤的侵襲、轉移和血管生成密切相關，是腫瘤轉移播散的機制之一[11]。而 MMP-9 在肺癌的侵襲轉移機制中發揮重要作用，MMP-9 可作為監測肺癌侵襲轉移的標記[12]。MMP-9 表達越高，非小細胞肺癌的預后越差[13]。這些研究結果提示 E-cadherin、MMP-9 均與肺癌的侵襲轉移相關。本實驗結果表明，姜黃素、順鉑都可以下調 MMP-9 蛋白，增加 E-cadherin 蛋白，由此說明姜黃素和順鉑可能通過影響 MMP-9 和 E-cadherin 蛋白從而抑制肺癌 A549 細胞的侵襲轉移。姜黃素和順鉑可能通過共同的通路抑制肺癌的轉移，至于具體機制目前還不十分清楚，還有待進一步深入研究。另外，本實驗存在不足處：本實驗沒有考慮藥物對正常細胞的影響，后續實驗應加入正常細胞進行對照；本實驗只研究了 MMP-9、E-cadherin 兩種蛋白，未對其他轉移相關因子如 MMP-2、上皮間充質轉化相關標志物波形蛋白以及神經鈣黏素等進行研究。
綜上所述，姜黃素、順鉑兩藥單用及聯用均能夠抑制腫瘤細胞的侵襲轉移，其可能是通過下調 MMP-9 蛋白，增加 E-cadherin 蛋白來實現。
肺癌已經成了當今人類最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著人類的身體健康，也是目前我國癌癥患者死亡的首要因素[1]。化療作為癌癥治療的手段之一，在肺癌的綜合治療中發揮重要的作用。順鉑在臨床中是一線基礎化療藥物，對殺死癌細胞有肯定的療效，但在殺死腫瘤細胞的時候，也傷害了一些正常的組織，這就使得藥物的劑量在治療時受到限制。姜黃素為姜黃等中藥的根莖中提取出來的酚性化合物，能抑制腫瘤細胞的侵襲與轉移，姜黃素輔助化療可增強腫瘤抑制，減少不良反應，并可增進機體細胞免疫功能，改善腫瘤患者的生活質量。本實驗以人肺癌 A549 細胞為實驗對象，觀察姜黃素聯合順鉑對肺癌細胞侵襲轉移的影響，測定基質金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）、上皮鈣黏素（E-cadherin）的表達，從而探究姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞侵襲轉移的影響及其可能機制的研究。希望能夠為臨床上治療腫瘤、新藥的研發和聯合用藥提供依據。
1 材料及方法
1.1 材料
人肺癌 A549 細胞購自上海細胞中心；姜黃素及 transwell 小室購自上海穎心公司；順鉑購自山東齊魯藥業股份有限公司，四甲基偶氮唑鹽（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）購自美國 Sigma 公司，MMP-9 兔抗人單克隆抗體、E-cadherin 兔抗人單克隆抗體均購自 SantaCrus 公司。細胞培養箱購自美國 Forma 公司，倒置顯微鏡購自日本奧林巴斯，離心機購自德國艾本德股份公司，酶標儀（Rayto RT -6000 型）購自深圳雷杜生命科學股份有限公司，電泳儀（DYY-8C 型）購自北京市六一儀器廠。
1.2 方法
1.2.1 細胞的培養
細胞培養基為 F-12（培養基成分包含 10% 胎牛血清、100 U/mL 鏈霉素、青霉素），將其放置于 37 ℃、5% CO2 恒溫培養箱內。細胞貼壁生長，用 0.25% 的胰蛋白酶消化后進行傳代。
1.2.2 MTT 法檢測細胞的增殖抑制率
取對數生長期的 A549 細胞，將細胞濃度設為 50 000/ml，分別接種于 96 孔板中，每個孔的體積為 150 μl，將其放置在培養箱內培養 24 h，24 h 后小心地吸出上清液。然后分別加入 5、10、20、40 μmol/L 的姜黃素，1、2、4 mg/L 的順鉑及 20 μmol/L 姜黃素聯用濃度分別為 1、2、4 mg/L 順鉑，對照組則加入等體積的培養基（所有孔內體積均為 150 μl）。每組設 5 個復孔。放在培養箱內培養 24 h 以后每個孔加入濃度 5 mg/ml MTT 溶液 20 μl，繼續于培養箱內培養 4 h 后將上清液小心吸取出來，然后再加入二甲基亞砜（每孔 150 μl），充分混勻震蕩 10 min 后再于酶標儀上測定 490 nm 波長下各孔的吸光值（A）。細胞生長抑制率=（對照組 A 值–實驗組 A 值）/對照組 A 值×100%。
1.2.3 Transwell 小室測定細胞的侵襲轉移
（1）Transwell 小室的處理：Transwell 小室之間的膜為 8 μm 聚碳酸醋濾膜，Matrigel 膠在 4 ℃ 冰箱溶解，Transwell 小室底部膜的上室面用 50 mg/L Matrigel 1∶8 稀釋液浸潤，置于 37 ℃ 環境中，30 min 后，小心地吸出細胞培養板內剩余的上清液，每個孔中均加入 50 μl 無血清培養液（含有 10 g/L 牛血清白蛋白）水化，取出已經制好膠的小室。（2）細胞的處理：將肺癌細胞分別用順鉑（2 mg/L）、姜黃素（20 μmol/L）、姜黃素（20 μmol/L）聯合順鉑（2 mg/L）（聯合組）、培養基（對照組）處理 24 h，消化離心以后用無血清的培養基將細胞的濃度調整至 4×105/ml。（3）結果觀察：在下室每個孔中加入 200 μl F-12 培養基。將處理后的細胞分別置于上室中，每孔體積均為 150 μl，每組設 2 個復孔，對照組加入未經藥物處理的細胞。將小室置于 24 孔板上，在下室中加入 F-12 培養基。將小室置于恒溫 37 ℃、5% CO2 培養箱中培養 24 h。沒有遷移的細胞留在 Transwell 小室上室的上表面，用棉簽小心地將其輕輕擦去。侵襲的細胞在 Transwell 小室的下表面，首先用 100% 甲醇固定，然后再用吉姆薩染色。在顯微鏡下（×400）觀察，并隨機取 5 個視野，拍照計數取平均值。實驗重復 3 次。侵襲抑制率=（1–實驗組細胞平均數/對照組細胞平均數）×100%。
1.2.4 蛋白印跡（Western blot）檢測 MMP-9、E-cadherin 蛋白的表達水平
選用對數生長期的肺癌 A549 細胞，將細胞濃度調整為密度為 4×105/ml，然后，接種于 12 孔板內，培養 24 h，使細胞貼壁，小心吸取上清液，然后向每孔中加入藥物：單藥組向每孔細胞分別加入姜黃素（20 μmol/L）、順鉑（2 mg/L），聯合組為姜黃素（20 μmol/L）聯合順鉑（2 mg/L），對照組不加入藥物，每孔設 2 個復孔，放入恒溫培養箱培養 24 h，棄培養液，加入預冷磷酸鹽緩沖液 3 ml 漂洗細胞，置冰上加入含 1% 苯甲基磺酰氟的蛋白裂解液作用 30 min，收集上清液。用試劑盒測定蛋白水平。經 10% 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠電泳，轉移蛋白樣品至硝酸纖維素膜上，5% 脫脂奶粉封閉 90 min，加入一抗溶液（1∶500）4 ℃ 過夜。本研究以磷酸甘油醛脫氫酶（phosphoglyceraldehyde dehydrogenase，GAPDH）作為內參基因，用三羥甲基氨基甲烷（trihydroxymethyl aminomethane，Tris）鹽吐溫緩沖液（含 0.1% 吐溫 20-Tris 緩沖液）洗膜。加入辣根過氧化物酶二抗溶液（1∶2 000），室溫孵育 2 h。洗膜后加入 ECL 化學發光液暗室內曝光膠片，用 UVP 凝膠成像系統觀察結果并拍照，實驗重復 3 次。
1.3 統計學方法
采用 SPSS 19.0 統計軟件。數據用均數±標準差（
）表示，組間比較采用 t 檢驗。P<0.05 為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 姜黃素、順鉑及姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞增殖的影響
不同濃度姜黃素對肺癌 A549 細胞的增殖有抑制作用，且濃度越高抑制作用越強，其中姜黃素濃度由 20 μmol/L 上升至 40 μmol/L 時與 5 μmol/L 上升至 10 μmol/L、10 μmol/L 上升至 20 μmol/L 相比，上升趨勢不明顯。不同濃度姜黃素之間相比，差異有統計學意義（P<0.01）；不同濃度姜黃素組與對照組相比，差異有統計學意義（P<0.01）；不同濃度順鉑對肺癌肺癌 A549 細胞的增殖抑制有作用，濃度增加，抑制作用越高，與對照組相比，差異有統計學意義（P<0.01）；姜黃素、順鉑聯用對肺癌的抑制作用比單一用藥組明顯增強，聯合組與單一用藥組比較，差異有統計學意義（P<0.01）。結果見表 1。
表1
不同濃度順鉑聯合姜黃素及兩者單用對肺癌 A549 細胞的增殖的影響（n=6，
）
表2
姜黃素、順鉑單用及兩者聯用對肺癌 A549 細胞的侵襲抑制率（
，n=3）
表3
各組 E-cadherin/GAPDH、MMP-9/GAPDH 灰度值比值（n=3，
）
2.2 姜黃素、順鉑及姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞侵襲轉移的影響
姜黃素組、順鉑組與對照組比較，聯合用藥組與同濃度單藥組比較，A549 細胞的穿透數差異均有統計學意義（P<0.01）。結果見圖 1 和表 2。
圖1
Transwell 小室檢測像 a. 對照組； b. 姜黃素組； c. 順鉑組； d. 聯合組。聯合用藥組細胞數較其他組明顯減少，用藥組較對照組細胞數減少
2.3 姜黃素、順鉑及姜黃素聯合順鉑對肺癌 A549 細胞 MMP-9、E-cadherin 蛋白的影響
姜黃素及順鉑均能抑制 MMP-9 蛋白的表達，促進 E-cadherin 蛋白的表達，聯用后效果明顯優于單用。結果見圖 2。各用藥組與對照組比較差異有統計學意義（P<0.01）；聯合用藥組與單藥組比較差異均有統計學意（P<0.01）。各組灰度值比較見表 3。
圖2
Western blot 檢測像 條帶 1：對照組；條帶 2：姜黃素組；條帶 3：順鉑組；條帶 4：聯合組。E-cadherin 蛋白的表達聯合組明顯優于其他組，單藥組優于對照組，MMP-9 蛋白的表達聯合組明顯低于其他組，單藥組低于于對照組
3 討論
徐煒等[2]研究表明姜黃素可以通過調控 LIMK-1/COFILIN 信號通路以及肺癌細胞微絲骨架結構來抑制癌細胞的侵襲及轉移。姜黃素能夠抑制乳腺癌、胃癌、結腸癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌等侵襲轉移[3～5]。大多數肺癌患者確診時已為晚期，目前臨床上有效的治療方法為化療。鉑類藥物是肺癌化療一線藥物。順鉑作為鉑類家族中一員，療效好，但不良反應也較多。姜黃素作為傳統中藥提取物，具有抑制腫瘤轉移的作用，其與順鉑聯用，既能加強療效，又可以減少順鉑的用量，從而減少不良反應。本實驗通過研究不同濃度的姜黃素、順鉑及兩者聯用對肺癌的作用得出結論，姜黃素與順鉑均能抑制肺癌細胞的侵襲轉移，但兩者聯用的效果更強，提示在使用順鉑時可以考慮加入姜黃素，既能減少順鉑的用量，降低不良反應，又可以達到治療的目的。
MTT 實驗中，姜黃素濃度從 5 μmol/L 上升至 40 μmol/L，作用 24 h 后，其對肺癌 A549 細胞的增殖抑制率從 6.50% 上升至 27.93%；順鉑濃度從 1 mg/L 上升至 4 mg/L ，其對肺癌 A549 細胞的增殖抑制率從 7.12% 上升至 26.88%；而 20 μmol/L 的姜黃素與 1 mg/L 的順鉑聯用時，其對肺癌 A549 細胞的增殖抑制率即可達到 28.37%。姜黃素和順鉑對肺癌 A549 細胞的增殖抑制率均呈濃度依賴性，濃度越高，增殖抑制能力越強。姜黃素與順鉑聯用的增殖抑制率明顯優于單藥組，而要達到同樣的增殖抑制率，姜黃素與順鉑聯用時的濃度也遠低于單藥使用時的濃度。
Transwell 實驗中，姜黃素 20 μmol/L 和順鉑 2 mg/L 均能抑制肺癌細胞的轉移，其侵襲抑制率分別 38.7%、36.5%，而兩者聯用后侵襲抑制率為 63.8%，較單一用藥組明顯升高（P<0.01）。結果進一步表明，姜黃素聯合順鉑與兩藥單用相比，能明顯增加對肺癌細胞的侵襲抑制作用。
研究表明，E-cadherin[6]、MMP-9[7-8]目前是評價惡性腫瘤侵襲與轉移的可靠指標。E-cadherin 蛋白屬于鈣黏素分子家族，在細胞骨架形成中具有錨定細胞的作用，當其表達受到干擾而降低時，錨定作用就會減弱，使單一的惡性腫瘤細胞從腫瘤細胞團中脫落，進入血液或者進入淋巴系統而形成新的轉移灶[9-10]。E-cadherin 表達下調普遍地存在于低分化及進展期腫瘤，所以 E-cadherin 被看作腫瘤轉移的抑制因素。同時有研究表明 E-cadherin 與肺癌的侵襲轉移有密切關系。MMP-9 作為目前已知的基質金屬蛋白酶家族中的重要成員，具有促進腫瘤細胞的生長和抑制凋亡，促進腫瘤組織新生血管生成，以及幫助腫瘤細胞逃逸免疫監視等作用，與腫瘤的侵襲、轉移和血管生成密切相關，是腫瘤轉移播散的機制之一[11]。而 MMP-9 在肺癌的侵襲轉移機制中發揮重要作用，MMP-9 可作為監測肺癌侵襲轉移的標記[12]。MMP-9 表達越高，非小細胞肺癌的預后越差[13]。這些研究結果提示 E-cadherin、MMP-9 均與肺癌的侵襲轉移相關。本實驗結果表明，姜黃素、順鉑都可以下調 MMP-9 蛋白，增加 E-cadherin 蛋白，由此說明姜黃素和順鉑可能通過影響 MMP-9 和 E-cadherin 蛋白從而抑制肺癌 A549 細胞的侵襲轉移。姜黃素和順鉑可能通過共同的通路抑制肺癌的轉移，至于具體機制目前還不十分清楚，還有待進一步深入研究。另外，本實驗存在不足處：本實驗沒有考慮藥物對正常細胞的影響，后續實驗應加入正常細胞進行對照；本實驗只研究了 MMP-9、E-cadherin 兩種蛋白，未對其他轉移相關因子如 MMP-2、上皮間充質轉化相關標志物波形蛋白以及神經鈣黏素等進行研究。
綜上所述，姜黃素、順鉑兩藥單用及聯用均能夠抑制腫瘤細胞的侵襲轉移，其可能是通過下調 MMP-9 蛋白，增加 E-cadherin 蛋白來實現。
