引用本文： 馬波, 姜淮蕪, 徐亮, 肖國, 楊思雨. 胃癌中STIM1表達與其惡性程度及淋巴結轉移的相關性研究. 中國普外基礎與臨床雜志, 2022, 29(4): 465-469. doi: 10.7507/1007-9424.202107031 復制
2018年全球癌癥統計報告，我國胃癌發病率在惡性腫瘤中高居第3位，病死率排第2位[1]。2020年統計全球新發胃癌病例1 089 103例，中國胃癌患者占比43.9%，而且我國早期胃癌占比很低，僅20%左右，大多數發現時已是進展期；中國胃癌病死率為48.6%，較2018年下降1位，居死亡譜第3位；總體來看，男性胃癌患者發病率和病死率均約為女性患者的2倍[2]。淋巴結轉移是胃癌最主要的轉移途徑，進展期胃癌患者的淋巴結轉移率可高達70%，早期胃癌患者的淋巴結轉移率仍可達18%以上[3-4]。淋巴結轉移是導致胃癌預后較差的重要原因，也是影響胃癌治療方式的關鍵因素[5]。因此尋找客觀指標預測淋巴結轉移范圍，評價手術淋巴結清掃效果，以便術后對其采取預防措施。基質相互作用分子1（stromal interaction molecule 1，STIM1）是一種由600～700個氨基酸殘基組成的廣泛分布于人體細胞中的單次跨膜蛋白，定位于細胞內質網膜上，感受內質網膜內Ca2+濃度，感受細胞內Ca2+ 濃度變化，在調節細胞生命活動方面發揮重要作用。本研究主要探討胃癌組織中STIM1蛋白表達與腫瘤惡性程度及淋巴結轉移的關系。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
收集2018年10月至2021年4月期間于西南醫科大學附屬醫院及四川綿陽四○四醫院確診為胃癌且行胃癌根治性切除+D2淋巴結清掃術的患者，同時獲取術后的癌組織標本。病例納入標準：① 年齡≤75歲，術前胃鏡檢查及組織病理學檢測確診的胃癌；② 施行R0切除，術后病理TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期；③ 無其他臟器原發或轉移腫瘤、術前未接受過放射和（或）化學治療；④ 淋巴結清掃總數≥15枚。病例排除標準：① 已實施新輔助化學治療和（或）放射治療者；② 腫瘤遠處轉移；③ 臨床病理資料不全者；④ 淋巴結清掃總數<15枚。嚴格依照病例納入和排除標準，本研究最終納入83例患者，其中男52例，女31例；年齡37～72歲、（52.5±9.1）歲。本研究經過相關單位倫理委員會的批準并與患者或其家屬簽署了知情同意書。
1.2 方法
1.2.1 免疫組織化學染色方法檢查組織中STIM1蛋白的表達
收集術后胃組織蠟塊行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，由四川綿陽四○四醫院病理科高年資醫師觀察切片，明確癌組織部位及癌旁正常組織，然后取癌組織及癌旁正常組織蠟塊切片，采用免疫組織化學染色方法檢測各組織中STIM1蛋白的表達情況。STIM1蛋白主要定位于細胞質，陽性染色細胞呈淺黃色至棕褐色顆粒狀物質彌散性分布于細胞質，染色越深表達程度越強（觀察著色細胞時應排除組織的邊緣及重疊部分）。結果判定采用著色細胞數和著色強度進行綜合評分[6]。著色強度：染色不明顯記0分，淡黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分；計數陽性細胞百分率，無陽性細胞記0分，陽性細胞百分率<10%記1分、11%～50%記2分、51%～75%記3分、>75%記4分。根據著色強度與陽性細胞百分率得分乘積判斷，0～1分為陰性記為（–）；2～12分為陽性且進一步劃分，2～4分為（+）、5～8分為（++）、9～12分為（+++），同時將2～4分界定為低表達，5～12分界定為高表達。
1.2.2 淋巴結收集
本研究收集的標本均是由手術醫師根據日本《胃癌處理規約》[7] 的規定，在標本離體30 min內從切除的全部標本中獲取，對獲取的淋巴結行石蠟切片和HE染色并由病理科醫師診斷，然后統計每例患者清掃淋巴結總數和陽性淋巴結數目并計算淋巴結轉移率。
1.3 統計學方法
應用SPSS 25.0統計軟件進行統計分析。本研究計量數據符合正態性、不符合方差齊性（P<0.10），組間比較采用Wilcoxon符號秩和檢驗（配對）或Wilcoxon秩和檢驗（成組）；計數資料比較采用配對設計或成組設計的卡方（χ2）檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 胃癌組織及其相應的癌旁正常胃組織中STIM1蛋白表達情況
免疫組織化學染色見STIM1蛋白主要定位于細胞質，陽性染色細胞呈淺黃色至棕褐色顆粒狀物質且呈彌散性分布，見圖1a～1c。STIM1蛋白在胃癌組織中表達陽性率為95.2%（79/83）且其在中低分化癌組織中免疫組織化學染色明顯加深，其中高表達患者62例（74.7%）、低表達患者21例（25.3%），而STIM1蛋白在癌旁正常胃組織中蛋白表達陽性率為41.0%（34/83）且無高表達，STIM1蛋白表達陽性率在胃癌組織中高于癌旁正常胃組織（χ2=58.078，P<0.001）。
圖1
示STIM1蛋白在低分化（a）、中分化（b）胃癌組織（免疫組織化學染色 ×400）及癌旁正常胃組織（免疫組織化學染色 ×200，c）中的表達
2.2 胃癌組織中STIM1蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關系
結果見表1。從表1可見，STIM1蛋白表達強度與胃癌患者的性別、年齡及腫瘤大小無關（均P>0.05）；STIM1蛋白高表達者在腫瘤分化程度低/未分化、浸潤深度T3+T4、TNM分期Ⅲ期及有淋巴結轉移胃癌患者中占比高于腫瘤分化程度高/中分化（χ2=11.052，P=0.001）、浸潤深度T1+T2（χ2=24.720，P<0.001）、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期（χ2=9.980，P=0.002）及無淋巴結轉移（χ2=6.097，P=0.014）者。
表1
STIM1在胃癌組織中的表達與胃癌患者臨床病理特征的關系
2.3 STIM1表達強度與淋巴結轉移的關系
83例胃癌患者的淋巴結轉移數目為（11.3±4.6）枚，淋巴結轉移率為（49.6±18.2）%，STIM1 蛋白不同表達強度的淋巴結轉移數目和淋巴結轉移率結果見表2，相關性分析結果（圖2）顯示，STIM1蛋白表達評分與淋巴結轉移數目和轉移率均呈正相關（淋巴結轉移數目：r=0.552，Z=–3.098，P=0.002；淋巴結轉移率：r=0.561，Z=–6.387，P<0.001）。
表2
STIM1蛋白不同表達強度患者的淋巴結轉移數目和淋巴結轉移率結果（
）
圖2
示STIM1評分與胃癌淋巴結轉移數目（a）和淋巴結轉移率（b）的相關性分析結果
3 討論
隨著診療技術的進步，胃癌領域也有較多的創新，取得了一定的發展及成就。盡管早期胃癌術后患者的5年生存率高達90%以上，但進展期及晚期患者的5年生存率僅為10%左右，其中術后復發和轉移是臨床工作中面臨的主要難題[8]。淋巴結轉移是胃癌最主要的轉移方式，是影響胃癌患者選擇治療方案以及治療效果的重要因素[9]。因此，尋找特異性和敏感性的分子標志物有助于評估淋巴結轉移情況，從而選擇最佳的治療方式[10]。
1997年Sabbioni等[11]在研究橫紋肌肉瘤細胞株的實驗中發現，STIM1能影響腫瘤細胞增殖和凋亡， 從而引發了眾多學者對于STIM1作用機制的研究熱情。STIM1廣泛分布于人體細胞中，定位于細胞內質網膜上，其作用是感受內質網膜內Ca2+ 濃度，協調Orai通道蛋白激活細胞膜上的鈣庫操縱鈣通道（store-operated Ca2+ channel，SOCC），介導鈣內流，從而參與細胞的生命活動[12-13]。在對腫瘤細胞方面的深入研究后發現，STIM1作為細胞SOCC中感受Ca2+ 濃度最重要的蛋白，能夠通過影響調節細胞與細胞外基質相互作用，影響腫瘤的黏附、移動和侵襲能力。已發現STIM1在前列腺癌[14]、乳腺癌[15-16]、宮頸癌[17]、咽癌[18]、肺癌[19]、肝癌[20]、頭頸部癌[21-22]等惡性腫瘤的發生及發展中起到了重要作用。在胃癌的研究中發現，敲低STIM1表達不改變腫瘤細胞增殖或凋亡，但會使胃癌細胞黏附能力增強，降低胃癌細胞的侵襲和轉移能力[7]，因此推測胃癌細胞侵襲和轉移可能不是通過胃癌細胞的大量堆積、腫瘤體積增大造成的，其機制可能與其直接影響腫瘤細胞與細胞外基質相互作用、改變腫瘤細胞形態、促進平滑肌細胞增殖和運動有關[23]，這與既往學者在前列腺癌[14]或乳腺癌[15-16]中的研究結果有差異，可能與腫瘤發生、發展的復雜性和STIM1基因作用機制的多樣性有關。在本研究中發現，STIM1的表達強度與腫瘤大小無關（P>0.05），與既往研究者[23-27]的研究結論基本一致；但在本研究中發現，STIM1蛋白高表達者在腫瘤分化程度低/未分化、浸潤深度T3+T4、TNM分期Ⅲ期及有淋巴結轉移胃癌患者中占比高于腫瘤分化程度高/中分化、浸潤深度T1+T2、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期及無淋巴結轉移者（P<0.05），并且還發現，淋巴結轉移數目和淋巴結轉移率與STIM1 蛋白表達強度呈正相關（P<0.05），據此推測STIM1高表達可能會影響腫瘤的侵襲和轉移，而侵襲和轉移是惡性腫瘤重要的生物學特性，又是導致患者死亡的主要原因，并且有無淋巴結轉移胃癌患者的5年生存率有明顯區別[28-31]。結果提示，胃癌組織中STIM1高表達率與腫瘤惡性程度及淋巴結轉移密切相關，這可以在一定程度上反映淋巴結轉移范圍，可以據此更科學地評估手術切除方式以及淋巴結清掃范圍，同時對胃癌術后隨訪及治療有一定的指導價值[32-33]。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：馬波試驗方案設計、資料采集、各項試驗的具體實施和論文撰寫；姜淮蕪指導試驗方案設計、主持研究的施行及科研質量把控；徐亮指正試驗方案的缺陷，幫助設計納入和排除標準；肖國協助設計試驗方案及實施試驗；楊思雨協助簽署知情同意書及收集資料。
倫理聲明：本研究已通過四川綿陽四○四醫院醫學倫理委員會［批文編號：2021年文章（10）號］和西南醫科大學附屬醫院臨床試驗倫理委員會（批文編號：KY2021244）審核批準。
志謝：伏陽燕老師指導切片及協助具體操作；陳俐巧老師指導并協助稀釋試劑；許婷婷老師指導病理分期和圖片采集。
2018年全球癌癥統計報告，我國胃癌發病率在惡性腫瘤中高居第3位，病死率排第2位[1]。2020年統計全球新發胃癌病例1 089 103例，中國胃癌患者占比43.9%，而且我國早期胃癌占比很低，僅20%左右，大多數發現時已是進展期；中國胃癌病死率為48.6%，較2018年下降1位，居死亡譜第3位；總體來看，男性胃癌患者發病率和病死率均約為女性患者的2倍[2]。淋巴結轉移是胃癌最主要的轉移途徑，進展期胃癌患者的淋巴結轉移率可高達70%，早期胃癌患者的淋巴結轉移率仍可達18%以上[3-4]。淋巴結轉移是導致胃癌預后較差的重要原因，也是影響胃癌治療方式的關鍵因素[5]。因此尋找客觀指標預測淋巴結轉移范圍，評價手術淋巴結清掃效果，以便術后對其采取預防措施。基質相互作用分子1（stromal interaction molecule 1，STIM1）是一種由600～700個氨基酸殘基組成的廣泛分布于人體細胞中的單次跨膜蛋白，定位于細胞內質網膜上，感受內質網膜內Ca2+濃度，感受細胞內Ca2+ 濃度變化，在調節細胞生命活動方面發揮重要作用。本研究主要探討胃癌組織中STIM1蛋白表達與腫瘤惡性程度及淋巴結轉移的關系。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
收集2018年10月至2021年4月期間于西南醫科大學附屬醫院及四川綿陽四○四醫院確診為胃癌且行胃癌根治性切除+D2淋巴結清掃術的患者，同時獲取術后的癌組織標本。病例納入標準：① 年齡≤75歲，術前胃鏡檢查及組織病理學檢測確診的胃癌；② 施行R0切除，術后病理TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期；③ 無其他臟器原發或轉移腫瘤、術前未接受過放射和（或）化學治療；④ 淋巴結清掃總數≥15枚。病例排除標準：① 已實施新輔助化學治療和（或）放射治療者；② 腫瘤遠處轉移；③ 臨床病理資料不全者；④ 淋巴結清掃總數<15枚。嚴格依照病例納入和排除標準，本研究最終納入83例患者，其中男52例，女31例；年齡37～72歲、（52.5±9.1）歲。本研究經過相關單位倫理委員會的批準并與患者或其家屬簽署了知情同意書。
1.2 方法
1.2.1 免疫組織化學染色方法檢查組織中STIM1蛋白的表達
收集術后胃組織蠟塊行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，由四川綿陽四○四醫院病理科高年資醫師觀察切片，明確癌組織部位及癌旁正常組織，然后取癌組織及癌旁正常組織蠟塊切片，采用免疫組織化學染色方法檢測各組織中STIM1蛋白的表達情況。STIM1蛋白主要定位于細胞質，陽性染色細胞呈淺黃色至棕褐色顆粒狀物質彌散性分布于細胞質，染色越深表達程度越強（觀察著色細胞時應排除組織的邊緣及重疊部分）。結果判定采用著色細胞數和著色強度進行綜合評分[6]。著色強度：染色不明顯記0分，淡黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分；計數陽性細胞百分率，無陽性細胞記0分，陽性細胞百分率<10%記1分、11%～50%記2分、51%～75%記3分、>75%記4分。根據著色強度與陽性細胞百分率得分乘積判斷，0～1分為陰性記為（–）；2～12分為陽性且進一步劃分，2～4分為（+）、5～8分為（++）、9～12分為（+++），同時將2～4分界定為低表達，5～12分界定為高表達。
1.2.2 淋巴結收集
本研究收集的標本均是由手術醫師根據日本《胃癌處理規約》[7] 的規定，在標本離體30 min內從切除的全部標本中獲取，對獲取的淋巴結行石蠟切片和HE染色并由病理科醫師診斷，然后統計每例患者清掃淋巴結總數和陽性淋巴結數目并計算淋巴結轉移率。
1.3 統計學方法
應用SPSS 25.0統計軟件進行統計分析。本研究計量數據符合正態性、不符合方差齊性（P<0.10），組間比較采用Wilcoxon符號秩和檢驗（配對）或Wilcoxon秩和檢驗（成組）；計數資料比較采用配對設計或成組設計的卡方（χ2）檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 胃癌組織及其相應的癌旁正常胃組織中STIM1蛋白表達情況
免疫組織化學染色見STIM1蛋白主要定位于細胞質，陽性染色細胞呈淺黃色至棕褐色顆粒狀物質且呈彌散性分布，見圖1a～1c。STIM1蛋白在胃癌組織中表達陽性率為95.2%（79/83）且其在中低分化癌組織中免疫組織化學染色明顯加深，其中高表達患者62例（74.7%）、低表達患者21例（25.3%），而STIM1蛋白在癌旁正常胃組織中蛋白表達陽性率為41.0%（34/83）且無高表達，STIM1蛋白表達陽性率在胃癌組織中高于癌旁正常胃組織（χ2=58.078，P<0.001）。
圖1
示STIM1蛋白在低分化（a）、中分化（b）胃癌組織（免疫組織化學染色 ×400）及癌旁正常胃組織（免疫組織化學染色 ×200，c）中的表達
2.2 胃癌組織中STIM1蛋白表達與胃癌患者臨床病理特征的關系
結果見表1。從表1可見，STIM1蛋白表達強度與胃癌患者的性別、年齡及腫瘤大小無關（均P>0.05）；STIM1蛋白高表達者在腫瘤分化程度低/未分化、浸潤深度T3+T4、TNM分期Ⅲ期及有淋巴結轉移胃癌患者中占比高于腫瘤分化程度高/中分化（χ2=11.052，P=0.001）、浸潤深度T1+T2（χ2=24.720，P<0.001）、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期（χ2=9.980，P=0.002）及無淋巴結轉移（χ2=6.097，P=0.014）者。
表1
STIM1在胃癌組織中的表達與胃癌患者臨床病理特征的關系
2.3 STIM1表達強度與淋巴結轉移的關系
83例胃癌患者的淋巴結轉移數目為（11.3±4.6）枚，淋巴結轉移率為（49.6±18.2）%，STIM1 蛋白不同表達強度的淋巴結轉移數目和淋巴結轉移率結果見表2，相關性分析結果（圖2）顯示，STIM1蛋白表達評分與淋巴結轉移數目和轉移率均呈正相關（淋巴結轉移數目：r=0.552，Z=–3.098，P=0.002；淋巴結轉移率：r=0.561，Z=–6.387，P<0.001）。
表2
STIM1蛋白不同表達強度患者的淋巴結轉移數目和淋巴結轉移率結果（）
圖2
示STIM1評分與胃癌淋巴結轉移數目（a）和淋巴結轉移率（b）的相關性分析結果
3 討論
隨著診療技術的進步，胃癌領域也有較多的創新，取得了一定的發展及成就。盡管早期胃癌術后患者的5年生存率高達90%以上，但進展期及晚期患者的5年生存率僅為10%左右，其中術后復發和轉移是臨床工作中面臨的主要難題[8]。淋巴結轉移是胃癌最主要的轉移方式，是影響胃癌患者選擇治療方案以及治療效果的重要因素[9]。因此，尋找特異性和敏感性的分子標志物有助于評估淋巴結轉移情況，從而選擇最佳的治療方式[10]。
1997年Sabbioni等[11]在研究橫紋肌肉瘤細胞株的實驗中發現，STIM1能影響腫瘤細胞增殖和凋亡， 從而引發了眾多學者對于STIM1作用機制的研究熱情。STIM1廣泛分布于人體細胞中，定位于細胞內質網膜上，其作用是感受內質網膜內Ca2+ 濃度，協調Orai通道蛋白激活細胞膜上的鈣庫操縱鈣通道（store-operated Ca2+ channel，SOCC），介導鈣內流，從而參與細胞的生命活動[12-13]。在對腫瘤細胞方面的深入研究后發現，STIM1作為細胞SOCC中感受Ca2+ 濃度最重要的蛋白，能夠通過影響調節細胞與細胞外基質相互作用，影響腫瘤的黏附、移動和侵襲能力。已發現STIM1在前列腺癌[14]、乳腺癌[15-16]、宮頸癌[17]、咽癌[18]、肺癌[19]、肝癌[20]、頭頸部癌[21-22]等惡性腫瘤的發生及發展中起到了重要作用。在胃癌的研究中發現，敲低STIM1表達不改變腫瘤細胞增殖或凋亡，但會使胃癌細胞黏附能力增強，降低胃癌細胞的侵襲和轉移能力[7]，因此推測胃癌細胞侵襲和轉移可能不是通過胃癌細胞的大量堆積、腫瘤體積增大造成的，其機制可能與其直接影響腫瘤細胞與細胞外基質相互作用、改變腫瘤細胞形態、促進平滑肌細胞增殖和運動有關[23]，這與既往學者在前列腺癌[14]或乳腺癌[15-16]中的研究結果有差異，可能與腫瘤發生、發展的復雜性和STIM1基因作用機制的多樣性有關。在本研究中發現，STIM1的表達強度與腫瘤大小無關（P>0.05），與既往研究者[23-27]的研究結論基本一致；但在本研究中發現，STIM1蛋白高表達者在腫瘤分化程度低/未分化、浸潤深度T3+T4、TNM分期Ⅲ期及有淋巴結轉移胃癌患者中占比高于腫瘤分化程度高/中分化、浸潤深度T1+T2、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期及無淋巴結轉移者（P<0.05），并且還發現，淋巴結轉移數目和淋巴結轉移率與STIM1 蛋白表達強度呈正相關（P<0.05），據此推測STIM1高表達可能會影響腫瘤的侵襲和轉移，而侵襲和轉移是惡性腫瘤重要的生物學特性，又是導致患者死亡的主要原因，并且有無淋巴結轉移胃癌患者的5年生存率有明顯區別[28-31]。結果提示，胃癌組織中STIM1高表達率與腫瘤惡性程度及淋巴結轉移密切相關，這可以在一定程度上反映淋巴結轉移范圍，可以據此更科學地評估手術切除方式以及淋巴結清掃范圍，同時對胃癌術后隨訪及治療有一定的指導價值[32-33]。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：馬波試驗方案設計、資料采集、各項試驗的具體實施和論文撰寫；姜淮蕪指導試驗方案設計、主持研究的施行及科研質量把控；徐亮指正試驗方案的缺陷，幫助設計納入和排除標準；肖國協助設計試驗方案及實施試驗；楊思雨協助簽署知情同意書及收集資料。
倫理聲明：本研究已通過四川綿陽四○四醫院醫學倫理委員會［批文編號：2021年文章（10）號］和西南醫科大學附屬醫院臨床試驗倫理委員會（批文編號：KY2021244）審核批準。
志謝：伏陽燕老師指導切片及協助具體操作；陳俐巧老師指導并協助稀釋試劑；許婷婷老師指導病理分期和圖片采集。
