引用本文： 原慶會, 謝剛, 王安群, 何偉. 信號肽-CUB-EGF結構域蛋白3和特化蛋白1表達與乳腺癌患者臨床病理特征及預后的關系. 中國普外基礎與臨床雜志, 2022, 29(1): 72-77. doi: 10.7507/1007-9424.202104051 復制
對于具有相同臨床病理特征的乳腺癌患者，其臨床分期及分子亞型可能會有不同，因此，尋找有效的生物標志物對乳腺癌患者的病理狀態進行預測以及個體化治療及預后判斷均有重要意義[1-4]。信號肽-CUB-EGF 結構域蛋白 3（signal peptide-CUB-EGF-like domain containing protein 3，SCUBE3）是 SCUBE 基因家族的一種分泌型細胞表面糖蛋白，在骨細胞生物學和肢體骨長度測定中具有重要作用[5-7]。有研究[8]表明，SCUBE2 與乳腺癌患者臨床病理特征密切相關且可能參與乳腺疾病的發展。轉錄因子特化蛋白 1（specificity protein 1，SP1）主要表達于腎小管上皮核細胞和腎小球系膜細胞，與細胞增生、凋亡、腫瘤形成等過程密切相關[9-10]。有研究[11]發現，乳腺癌患者血清和組織中均存在 SP1 的高度表達，其水平與乳腺癌的病理類型、臟器遠處轉移及放化療有關。但目前關于 SCUBE3 在乳腺癌中的研究較少，本研究通過檢測乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 表達并探討二者與乳腺癌患者臨床病理特征的關系以及二者的相關性，以期為乳腺癌的個性化治療及預后評估提供參考。
1 資料與方法
1.1 一般資料
患者納入標準：① 臨床分期符合美國癌癥聯合會乳腺癌 TNM 分期標準[12]；② 入院前未進行過手術、放療、化療等治療；③ 為首發病；④ 臨床病理資料及隨訪資料齊全。排除標準：① 3 個月內使用過激素類藥物治療者；② 伴有其他惡性腫瘤者；③ 伴有其他嚴重臟器病變或已參加其他臨床試驗者。
本研究收集2013年2月至2015年10月期間綿陽市中心醫院收治的80例女性乳腺癌患者的乳腺癌組織及其相應的癌旁正常乳腺組織標本，均經組織病理學確診且重新進行切片復審。患者年齡30～70歲、（52.5±5.9）歲。80例患者中15例接受保留乳房手術，65例接受改良根治術。術后 13 例未接受輔助治療，5例接受放療，3 例接受化療或內分泌治療，59 例接受放療+化療或內分泌治療。腫瘤直徑≥2 cm 65例、<2 cm 15例；淋巴結有轉移47例、無轉移33例；臨床 TNM 分期Ⅰ期5例、Ⅱ期11例、Ⅲ期52例、Ⅳ期12例；分子亞型Luminal A型 16例、Luminal B型44例、HER-2陽性型 11 例、三陰性乳腺癌（TNBC）9 例；以Ki67陽性細胞百分數20%為界，取均值<20%為低表達（31 例）、≥20%為高表達（49 例）。本研究經綿陽市中心醫院倫理委員會批準（批準文號：S-2013-010），所有患者均簽署知情同意書。
1.2 免疫組織化學方法檢測組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達
1.2.1 主要試劑與儀器
通用超敏 SP 免疫組織化學試劑盒（貨號：SP0041）購自江西江藍純生物試劑有限公司，DAB 顯色試劑盒（貨號：DA1010）購自上海恒斐生物科技有限公司，SCUBE3 單克隆抗體（貨號：FNab07660）購自武漢菲恩生物科技有限公司，SP1 單克隆抗體（貨號：YKA-AF2028a）購自廈門研科生物技術有限公司。
1.2.2 檢測方法
采用免疫組織化學方法檢測組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達情況。將術中采集的組織標本經 10% 甲醛固定后進行梯度脫水、透明、浸蠟、包埋及切片（厚度 4 μm）。封閉后，滴加一抗 SCUBE3、SP1（1∶50 稀釋），磷酸鹽緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗作為陰性對照。生物素標記的二抗進行室溫孵育，孵育后滴加鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液，PBS 沖洗后 DBA 顯色，蘇木精復染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片并鏡檢。之后采取半定量法進行評分，隨機選 5 個高倍鏡（×400）視野進行觀察，按染色強度計分：棕褐色為 3 分，棕黃色為 2 分，淺黃色為 1 分，無特異著色為 0 分；按照陽性細胞百分數計分，陽性細胞百分數≤5% 為 0 分，5%～25% 為 1 分，25%～50% 為 2 分，50%～75% 為 3 分，>75% 為 4 分。將上述兩種得分相乘，總分<5 分為陰性，≥5 分為陽性。采用雙盲法進行結果判定，每張切片分別由 2 名病理科醫師判讀。
1.3 隨訪方法
采用電話或入戶方式隨訪記錄患者預后狀況（預后良好指患者生存，預后不良指患者死亡），術后第 1 年每個月隨訪 1 次，術后第 2 年每 3 個月隨訪 1 次，2 年后每半年隨訪 1 次。生存期從手術之日起計算，隨訪時間截至 2019 年 10 月或死亡。
1.4 統計學方法
采用 SPSS 23.0 軟件進行數據分析，計數資料以“例（%）”表示，組間比較采用χ2 檢驗，進一步兩兩比較采用Bonferroni調整法；采用 Spearman 等級相關法分析乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達的相關性；采用 Kaplan-Meier 法分析乳腺癌組織 SCUBE3、SP1 蛋白表達與患者總生存情況的關系并行 log-rank 檢驗；Cox 比例風險回歸模型多因素分析影響乳腺癌患者總生存時間的危險因素。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 乳腺癌組織及其癌旁正常乳腺組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達結果
免疫組織化學染色結果（圖 1）顯示，乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 較其相應的癌旁正常乳腺組織染色程度深，棕褐色細胞更多，其中 SCUBE3 主要在細胞質表達（圖 1a、1c），SP1 主要在細胞核表達（圖 1b、1d）。SCUBE3、SP1 蛋白表達陽性率在乳腺癌組織中分別為 86.25%（69/80）和65.00%（52/80），明顯高于其在相應的癌旁正常乳腺組織中的 10.00%（8/80）和16.25%（13/80），差異均有統計學意義（χ2=93.156、P<0.001；χ2=39.411，P<0.001）。
圖1
示 SCUBE3（SP ×200）和 SP1（SP ×100）蛋白分別在乳腺癌組織（a、b）及其相應的癌旁正常乳腺組織（c、d）中的表達結果
2.2 乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達與患者臨床病理參數的關系
結果見表 1。從表 1 可見，SCUBE3 蛋白表達陽性率與淋巴結轉移、TNM 分期、分子亞型、Ki67 表達有關，即在有淋巴結轉移、TNM Ⅱ～Ⅳ期、分子亞型為 Luminal A、B 型、Ki67 高表達的乳腺癌患者的癌組織中更高（P<0.05），而其與患者年齡、腫瘤直徑無關（P>0.05）；SP1 蛋白表達陽性率與淋巴結轉移及分子亞型有關，即在有淋巴結轉移、分子亞型為 Luminal A、B 型患者的乳腺癌組織中更高（P<0.05），而其與患者年齡、腫瘤直徑、TNM 分期及 Ki67 表達無關（P>0.05）。
表1
乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達與患者臨床病理參數的關系［例（%）］
2.3 乳腺癌組織中 SCUBE3 與 SP1 蛋白表達的相關性分析結果
乳腺癌組織中 SCUBE3 與 SP1 蛋白表達呈正相關（χ2=7.979，rs=0.316，P=0.005），見表 2。
表2
乳腺癌組織中 SCUBE3 與 SP1 蛋白表達的相關性分析結果（例）
2.4 乳腺癌患者生存分析結果
所有患者均隨訪 5 年，無一例失訪。SCUBE3 表達陽性患者中位生存時間為 44.7 個月，1、3、5 年生存率分別為 95.65%（66/69）、71.01%（49/69）、49.28%（34/69），SCUBE3 表達陰性患者 1、3、5 年生存率分別為 100%（11/11）、100%（11/11）、81.82%（9/11）。SP1 表達陽性患者中位生存時間為 43.0 個月，1、3、5 年生存率分別為 94.23%（49/52）、63.46%（33/52）、40.38%（21/52），SP1 表達陰性患者分別為 100%（28/28）、96.43%（27/28）、78.57%（22/28）。Kaplan-Meier 法生存曲線分析結果顯示，SCUBE3 和 SP1 表達陽性患者的生存情況差于其表達陰性患者（χ2=4.042，P=0.044；χ2=10.676，P=0.001），見圖 2。
圖2
示 SCUBE3（a）和 SP1（b）蛋白表達陽性和陰性患者的生存曲線
單因素分析影響乳腺癌患者總生存時間的因素發現，年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移、TNM 分期、分子亞型、Ki67 表達、SCUBE3 和 SP1 表達均與乳腺癌患者的總生存時間有關（P<0.05），見表 3；進一步對此進行 Cox 比例風險回歸模型多因素分析結果顯示，SCUBE3 陽性、SP1 陽性、有淋巴結轉移、Ki67 高表達是影響乳腺癌患者總生存時間的危險因素（P<0.05），見表 4。
表3
影響乳腺癌患者總生存時間的 Cox 比例風險回歸單因素分析結果
表4
影響乳腺癌患者總生存時間的 Cox 比例風險回歸多因素分析結果
3 討論
即便是接受過手術及規范治療的早期女性乳腺癌患者仍有部分會發生復發轉移，因此，尋找可靠有效的生物指標對于乳腺癌的個性化治療、預后評估等有重要意義[13-15]。有研究[5, 16]表明，SP1、SCUBE3 均是通過影響腫瘤細胞的血管生成進而在腫瘤中發揮作用。因此推測二者可能存在內部關聯，其是否也是通過影響乳腺癌細胞的血管新生而共同影響乳腺癌的發生、發展。
SCUBE 蛋白家族是近些年發現的一種分泌性糖蛋白家族，主要位于細胞膜表面，參與一系列生理、病理過程，且在器官發育、形成、分支形態發生等一系列過程中發揮重要作用[17-19]。SCUBE3 在正常組織中主要表達于中樞神經系統、骨、心臟、生殖腺等，有研究[20]表明，SCUBE2 低表達能預測乳腺癌預后不良。但關于 SCUBE3 在乳腺癌中的作用機制仍不明確。本研究結果顯示，SCUBE3 在乳腺癌組織較其相應的癌旁正常乳腺組織細胞質中染色程度深、棕褐色細胞更多，癌組織中 SCUBE3 表達陽性率明顯高于其癌旁正常乳腺組織且其在有淋巴結轉移、TNM Ⅱ～Ⅳ期、分子亞型為 Luminal A 型或 B 型、Ki67 高表達患者的癌組織中同樣更高，提示 SCUBE3 陽性表達可能與乳腺癌的發生、發展密切相關，該結果與文獻[20]報道 SCUBE2 蛋白在乳腺癌中的表達結果相反，可能是由于 SCUBE3 和 SCUBE2 調控腫瘤轉移及腫瘤血管生成的信號通路、具體作用機制不同，也可能是由于納入排除標準的差異及樣本數量的限制。SCUBE2 蛋白能抑制成熟骨形態發生蛋白 2（bone morphogenetic protein 2，BMP2）的分泌，且對其活性具有直接對抗作用，而 BMP2 可放大轉化生長因子 β 和 Hedgehog 信號系統的促血管形成及腫瘤增殖[5]。本研究結果中 SCUBE3 表達陽性患者總生存情況差于其表達陰性患者，進一步提示 SCUBE3 陽性表達可能與乳腺癌的發生、轉移、復發等密切相關，進而影響患者的生存。
SP1 是一種核轉錄因子，它能通過與其他蛋白質及基因調控區的 GC/GT 盒相互作用啟動許多靶基因的轉錄，從而在細胞凋亡、分化、器官纖維化等生理過程中發揮重要作用[21-23]。本研究結果顯示，SP1 在乳腺癌組織中較其相應的癌旁正常乳腺組織中核染色強度深、棕褐色細胞更多，其表達陽性率明顯高于其相應的癌旁正常乳腺組織，且存在淋巴結轉移、Luminal A 或 B 型的患者 SP1 蛋白表達陽性率同樣較高，提示 SP1 在乳腺癌組織中表達陽性率較高。本研究結果中 SP1 表達陽性患者總生存情況差于其表達陰性患者，進一步提示 SP1 陽性表達可能與乳腺癌的轉移和復發有關，可能機制是通過 PI3K/Akt、ERK1/2MAPK 或 Sp1/ACER2/S1P 等信號通路在乳腺癌細胞增殖及細胞周期中發揮重要作用[24-25]。
本研究結果顯示，乳腺癌組織 SCUBE3 與 SP1 蛋白表達呈正相關，提示 SCUBE3 與 SP1 可能通過協同調控共同參與乳腺癌的發生、發展、轉移等。多因素分析結果顯示，SCUBE3 陽性、SP1 陽性及有淋巴結轉移、Ki67 高表達均是影響乳腺癌患者總生存時間的獨立危險因素（P<0.05），提示對 SCUBE3 陽性、SP1 陽性、淋巴結轉移的乳腺癌患者，術后應積極予以輔助治療，可能對延長患者生存期有重要意義。
從本研究初步研究結果看，SCUBE3、SP1 可能在乳腺癌的發生、轉移、復發等過程中起重要作用，二者的陽性表達呈正相關性并與患者臨床病理特征淋巴結轉移及分子亞型及預后密切相關，提示這對乳腺癌患者的治療以及預后評估可能有一定的參考價值。關于 SCUBE3、SP1 與乳腺癌內在機制還有待進一步通過大樣本、多中心深入分析。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：謝剛、原慶會設計研究方案；原慶會、王安群完成論文書寫；何偉完成數據收集。
倫理聲明：本研究通過了綿陽市中心醫院倫理委員會審批（批文編號：S-2013-010）。
對于具有相同臨床病理特征的乳腺癌患者，其臨床分期及分子亞型可能會有不同，因此，尋找有效的生物標志物對乳腺癌患者的病理狀態進行預測以及個體化治療及預后判斷均有重要意義[1-4]。信號肽-CUB-EGF 結構域蛋白 3（signal peptide-CUB-EGF-like domain containing protein 3，SCUBE3）是 SCUBE 基因家族的一種分泌型細胞表面糖蛋白，在骨細胞生物學和肢體骨長度測定中具有重要作用[5-7]。有研究[8]表明，SCUBE2 與乳腺癌患者臨床病理特征密切相關且可能參與乳腺疾病的發展。轉錄因子特化蛋白 1（specificity protein 1，SP1）主要表達于腎小管上皮核細胞和腎小球系膜細胞，與細胞增生、凋亡、腫瘤形成等過程密切相關[9-10]。有研究[11]發現，乳腺癌患者血清和組織中均存在 SP1 的高度表達，其水平與乳腺癌的病理類型、臟器遠處轉移及放化療有關。但目前關于 SCUBE3 在乳腺癌中的研究較少，本研究通過檢測乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 表達并探討二者與乳腺癌患者臨床病理特征的關系以及二者的相關性，以期為乳腺癌的個性化治療及預后評估提供參考。
1 資料與方法
1.1 一般資料
患者納入標準：① 臨床分期符合美國癌癥聯合會乳腺癌 TNM 分期標準[12]；② 入院前未進行過手術、放療、化療等治療；③ 為首發病；④ 臨床病理資料及隨訪資料齊全。排除標準：① 3 個月內使用過激素類藥物治療者；② 伴有其他惡性腫瘤者；③ 伴有其他嚴重臟器病變或已參加其他臨床試驗者。
本研究收集2013年2月至2015年10月期間綿陽市中心醫院收治的80例女性乳腺癌患者的乳腺癌組織及其相應的癌旁正常乳腺組織標本，均經組織病理學確診且重新進行切片復審。患者年齡30～70歲、（52.5±5.9）歲。80例患者中15例接受保留乳房手術，65例接受改良根治術。術后 13 例未接受輔助治療，5例接受放療，3 例接受化療或內分泌治療，59 例接受放療+化療或內分泌治療。腫瘤直徑≥2 cm 65例、<2 cm 15例；淋巴結有轉移47例、無轉移33例；臨床 TNM 分期Ⅰ期5例、Ⅱ期11例、Ⅲ期52例、Ⅳ期12例；分子亞型Luminal A型 16例、Luminal B型44例、HER-2陽性型 11 例、三陰性乳腺癌（TNBC）9 例；以Ki67陽性細胞百分數20%為界，取均值<20%為低表達（31 例）、≥20%為高表達（49 例）。本研究經綿陽市中心醫院倫理委員會批準（批準文號：S-2013-010），所有患者均簽署知情同意書。
1.2 免疫組織化學方法檢測組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達
1.2.1 主要試劑與儀器
通用超敏 SP 免疫組織化學試劑盒（貨號：SP0041）購自江西江藍純生物試劑有限公司，DAB 顯色試劑盒（貨號：DA1010）購自上海恒斐生物科技有限公司，SCUBE3 單克隆抗體（貨號：FNab07660）購自武漢菲恩生物科技有限公司，SP1 單克隆抗體（貨號：YKA-AF2028a）購自廈門研科生物技術有限公司。
1.2.2 檢測方法
采用免疫組織化學方法檢測組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達情況。將術中采集的組織標本經 10% 甲醛固定后進行梯度脫水、透明、浸蠟、包埋及切片（厚度 4 μm）。封閉后，滴加一抗 SCUBE3、SP1（1∶50 稀釋），磷酸鹽緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗作為陰性對照。生物素標記的二抗進行室溫孵育，孵育后滴加鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液，PBS 沖洗后 DBA 顯色，蘇木精復染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片并鏡檢。之后采取半定量法進行評分，隨機選 5 個高倍鏡（×400）視野進行觀察，按染色強度計分：棕褐色為 3 分，棕黃色為 2 分，淺黃色為 1 分，無特異著色為 0 分；按照陽性細胞百分數計分，陽性細胞百分數≤5% 為 0 分，5%～25% 為 1 分，25%～50% 為 2 分，50%～75% 為 3 分，>75% 為 4 分。將上述兩種得分相乘，總分<5 分為陰性，≥5 分為陽性。采用雙盲法進行結果判定，每張切片分別由 2 名病理科醫師判讀。
1.3 隨訪方法
采用電話或入戶方式隨訪記錄患者預后狀況（預后良好指患者生存，預后不良指患者死亡），術后第 1 年每個月隨訪 1 次，術后第 2 年每 3 個月隨訪 1 次，2 年后每半年隨訪 1 次。生存期從手術之日起計算，隨訪時間截至 2019 年 10 月或死亡。
1.4 統計學方法
采用 SPSS 23.0 軟件進行數據分析，計數資料以“例（%）”表示，組間比較采用χ2 檢驗，進一步兩兩比較采用Bonferroni調整法；采用 Spearman 等級相關法分析乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達的相關性；采用 Kaplan-Meier 法分析乳腺癌組織 SCUBE3、SP1 蛋白表達與患者總生存情況的關系并行 log-rank 檢驗；Cox 比例風險回歸模型多因素分析影響乳腺癌患者總生存時間的危險因素。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 乳腺癌組織及其癌旁正常乳腺組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達結果
免疫組織化學染色結果（圖 1）顯示，乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 較其相應的癌旁正常乳腺組織染色程度深，棕褐色細胞更多，其中 SCUBE3 主要在細胞質表達（圖 1a、1c），SP1 主要在細胞核表達（圖 1b、1d）。SCUBE3、SP1 蛋白表達陽性率在乳腺癌組織中分別為 86.25%（69/80）和65.00%（52/80），明顯高于其在相應的癌旁正常乳腺組織中的 10.00%（8/80）和16.25%（13/80），差異均有統計學意義（χ2=93.156、P<0.001；χ2=39.411，P<0.001）。
圖1
示 SCUBE3（SP ×200）和 SP1（SP ×100）蛋白分別在乳腺癌組織（a、b）及其相應的癌旁正常乳腺組織（c、d）中的表達結果
2.2 乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達與患者臨床病理參數的關系
結果見表 1。從表 1 可見，SCUBE3 蛋白表達陽性率與淋巴結轉移、TNM 分期、分子亞型、Ki67 表達有關，即在有淋巴結轉移、TNM Ⅱ～Ⅳ期、分子亞型為 Luminal A、B 型、Ki67 高表達的乳腺癌患者的癌組織中更高（P<0.05），而其與患者年齡、腫瘤直徑無關（P>0.05）；SP1 蛋白表達陽性率與淋巴結轉移及分子亞型有關，即在有淋巴結轉移、分子亞型為 Luminal A、B 型患者的乳腺癌組織中更高（P<0.05），而其與患者年齡、腫瘤直徑、TNM 分期及 Ki67 表達無關（P>0.05）。
表1
乳腺癌組織中 SCUBE3、SP1 蛋白表達與患者臨床病理參數的關系［例（%）］
2.3 乳腺癌組織中 SCUBE3 與 SP1 蛋白表達的相關性分析結果
乳腺癌組織中 SCUBE3 與 SP1 蛋白表達呈正相關（χ2=7.979，rs=0.316，P=0.005），見表 2。
表2
乳腺癌組織中 SCUBE3 與 SP1 蛋白表達的相關性分析結果（例）
2.4 乳腺癌患者生存分析結果
所有患者均隨訪 5 年，無一例失訪。SCUBE3 表達陽性患者中位生存時間為 44.7 個月，1、3、5 年生存率分別為 95.65%（66/69）、71.01%（49/69）、49.28%（34/69），SCUBE3 表達陰性患者 1、3、5 年生存率分別為 100%（11/11）、100%（11/11）、81.82%（9/11）。SP1 表達陽性患者中位生存時間為 43.0 個月，1、3、5 年生存率分別為 94.23%（49/52）、63.46%（33/52）、40.38%（21/52），SP1 表達陰性患者分別為 100%（28/28）、96.43%（27/28）、78.57%（22/28）。Kaplan-Meier 法生存曲線分析結果顯示，SCUBE3 和 SP1 表達陽性患者的生存情況差于其表達陰性患者（χ2=4.042，P=0.044；χ2=10.676，P=0.001），見圖 2。
圖2
示 SCUBE3（a）和 SP1（b）蛋白表達陽性和陰性患者的生存曲線
單因素分析影響乳腺癌患者總生存時間的因素發現，年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移、TNM 分期、分子亞型、Ki67 表達、SCUBE3 和 SP1 表達均與乳腺癌患者的總生存時間有關（P<0.05），見表 3；進一步對此進行 Cox 比例風險回歸模型多因素分析結果顯示，SCUBE3 陽性、SP1 陽性、有淋巴結轉移、Ki67 高表達是影響乳腺癌患者總生存時間的危險因素（P<0.05），見表 4。
表3
影響乳腺癌患者總生存時間的 Cox 比例風險回歸單因素分析結果
表4
影響乳腺癌患者總生存時間的 Cox 比例風險回歸多因素分析結果
3 討論
即便是接受過手術及規范治療的早期女性乳腺癌患者仍有部分會發生復發轉移，因此，尋找可靠有效的生物指標對于乳腺癌的個性化治療、預后評估等有重要意義[13-15]。有研究[5, 16]表明，SP1、SCUBE3 均是通過影響腫瘤細胞的血管生成進而在腫瘤中發揮作用。因此推測二者可能存在內部關聯，其是否也是通過影響乳腺癌細胞的血管新生而共同影響乳腺癌的發生、發展。
SCUBE 蛋白家族是近些年發現的一種分泌性糖蛋白家族，主要位于細胞膜表面，參與一系列生理、病理過程，且在器官發育、形成、分支形態發生等一系列過程中發揮重要作用[17-19]。SCUBE3 在正常組織中主要表達于中樞神經系統、骨、心臟、生殖腺等，有研究[20]表明，SCUBE2 低表達能預測乳腺癌預后不良。但關于 SCUBE3 在乳腺癌中的作用機制仍不明確。本研究結果顯示，SCUBE3 在乳腺癌組織較其相應的癌旁正常乳腺組織細胞質中染色程度深、棕褐色細胞更多，癌組織中 SCUBE3 表達陽性率明顯高于其癌旁正常乳腺組織且其在有淋巴結轉移、TNM Ⅱ～Ⅳ期、分子亞型為 Luminal A 型或 B 型、Ki67 高表達患者的癌組織中同樣更高，提示 SCUBE3 陽性表達可能與乳腺癌的發生、發展密切相關，該結果與文獻[20]報道 SCUBE2 蛋白在乳腺癌中的表達結果相反，可能是由于 SCUBE3 和 SCUBE2 調控腫瘤轉移及腫瘤血管生成的信號通路、具體作用機制不同，也可能是由于納入排除標準的差異及樣本數量的限制。SCUBE2 蛋白能抑制成熟骨形態發生蛋白 2（bone morphogenetic protein 2，BMP2）的分泌，且對其活性具有直接對抗作用，而 BMP2 可放大轉化生長因子 β 和 Hedgehog 信號系統的促血管形成及腫瘤增殖[5]。本研究結果中 SCUBE3 表達陽性患者總生存情況差于其表達陰性患者，進一步提示 SCUBE3 陽性表達可能與乳腺癌的發生、轉移、復發等密切相關，進而影響患者的生存。
SP1 是一種核轉錄因子，它能通過與其他蛋白質及基因調控區的 GC/GT 盒相互作用啟動許多靶基因的轉錄，從而在細胞凋亡、分化、器官纖維化等生理過程中發揮重要作用[21-23]。本研究結果顯示，SP1 在乳腺癌組織中較其相應的癌旁正常乳腺組織中核染色強度深、棕褐色細胞更多，其表達陽性率明顯高于其相應的癌旁正常乳腺組織，且存在淋巴結轉移、Luminal A 或 B 型的患者 SP1 蛋白表達陽性率同樣較高，提示 SP1 在乳腺癌組織中表達陽性率較高。本研究結果中 SP1 表達陽性患者總生存情況差于其表達陰性患者，進一步提示 SP1 陽性表達可能與乳腺癌的轉移和復發有關，可能機制是通過 PI3K/Akt、ERK1/2MAPK 或 Sp1/ACER2/S1P 等信號通路在乳腺癌細胞增殖及細胞周期中發揮重要作用[24-25]。
本研究結果顯示，乳腺癌組織 SCUBE3 與 SP1 蛋白表達呈正相關，提示 SCUBE3 與 SP1 可能通過協同調控共同參與乳腺癌的發生、發展、轉移等。多因素分析結果顯示，SCUBE3 陽性、SP1 陽性及有淋巴結轉移、Ki67 高表達均是影響乳腺癌患者總生存時間的獨立危險因素（P<0.05），提示對 SCUBE3 陽性、SP1 陽性、淋巴結轉移的乳腺癌患者，術后應積極予以輔助治療，可能對延長患者生存期有重要意義。
從本研究初步研究結果看，SCUBE3、SP1 可能在乳腺癌的發生、轉移、復發等過程中起重要作用，二者的陽性表達呈正相關性并與患者臨床病理特征淋巴結轉移及分子亞型及預后密切相關，提示這對乳腺癌患者的治療以及預后評估可能有一定的參考價值。關于 SCUBE3、SP1 與乳腺癌內在機制還有待進一步通過大樣本、多中心深入分析。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：謝剛、原慶會設計研究方案；原慶會、王安群完成論文書寫；何偉完成數據收集。
倫理聲明：本研究通過了綿陽市中心醫院倫理委員會審批（批文編號：S-2013-010）。
