引用本文： 王艷秋, 許麗麗, 江濤, 薛娟. 血清LncRNA ANRIL水平對潰瘍性結腸炎的診斷價值分析. 中國普外基礎與臨床雜志, 2021, 28(11): 1439-1444. doi: 10.7507/1007-9424.202103100 復制
潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種具有非特異性病因、復發性的慢性結腸炎癥疾病，以腹痛、黏液血便、腹瀉為主要臨床表現，嚴重威脅患者的健康安全[1-2]。UC 的發病機制尚未完全明確，目前，多數專家學者認為 UC 發病不僅與遺傳、炎癥反應有關，還與長鏈非編碼 RNA（long non-coding RNA，LncRNA）有關[3-4]。有關文獻報道顯示，LncRNA 在炎癥性腸病中表達失調，與腸道疾病的發生發展相關，有望成為診斷腸道疾病的生物標志物[5]。近期研究顯示，LncRNA ANRIL（long non-coding RNA antisense non-coding RNA INK4 locus）在 UC 患者的結腸黏膜組織中表達上調，其可能通過調節有關信號途徑，進而參與 UC 的發病進程[6]。但 LncRNA ANRIL 對 UC 的診斷價值鮮有報道。因此，本研究通過檢測 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平，分析其對 UC 的預測價值，以期為臨床早期診斷 UC 和評估其疾病程度提供參考依據。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
納入標準：① 所有患者均經病理學及內鏡檢查，結合臨床表現確診為 UC，且符合 UC 的診斷標準，診斷標準參考《潰瘍性結腸炎診療指南》中的 UC 診斷標準[7]；② 所有受試者的臨床檢查資料齊全；③ 所有受試者知情同意。排除標準：① 合并類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡或其他自身免疫性疾病者；② 既往患有結核、肝炎者；③ 近期服用抗生素、免疫抑制劑或其他特殊藥物者。
回顧性收集 2015 年 2 月至 2019 年 11 月期間河南科技大學第一附屬醫院收治的 143 例 UC 患者為 UC 組，其中男 67 例，女 76 例；年齡 32～71 歲、（48.6±14.8）歲；根據 Truelove-Witts 評分標準[8]將 UC 患者分為輕度組 41 例、中度組 59 例、重度組 43 例；病變累及部位：左半結腸 49 例、乙狀結腸 41 例、全結腸 29 例、直腸 24 例；按 Truelove 標準[9]將 UC 患者進行內鏡分級劃分：Ⅰ級 38 例、Ⅱ級 65 例、Ⅲ級 40 例。并回顧性收集河南科技大學第一附屬醫院同期的 145 例健康體檢正常者為對照組，均無胃腸道或其他嚴重疾病，其中男 66 例，女 79 例；年齡 31～72 歲、（48.8±15.1）歲。UC 組和對照組的性別（χ2=0.052，P=0.820）和年齡（t=0.080，P=0.937）比較差異均無統計學意義，具有較好的可比性。所有受試者知情同意，且本研究獲得河南科技大學第一附屬醫院倫理委員會批準，研究所用方法符合《赫爾辛基宣言》。
1.2 試劑與儀器
總 RNA 提取試劑 TRIzol（貨號：R21086）購自上海源葉生物科技有限公司，PrimeScriptTM RT Master Mix Kit（貨號：RR036A）購自上海浩然生物技術有限公司，SYBR Green Realtime PCR Master Mix（貨號：QPK-201）購自北京索萊寶科技有限公司；人降鈣素原（procalcitonin，PCT）酶聯免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（貨號：BP-E10643）購自上海朗頓生物科技有限公司；人白細胞介素-17（interleukin-17，IL-17）ELISA 試劑盒（貨號：FK-R0179）購自上海樊克生物科技有限公司。
超微量分光光度計（型號：NP80-Touch）購自廣州浩翰儀器有限公司，實時熒光定量 PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）儀（型號：ABI 9700）購自南京貝登電子商務有限公司，酶標儀（型號：21261000）購自北京安麥格貿易有限公司。
1.3 方法
1.3.1 標本采集
收集所有受試者清晨空腹外周血 6～7 mL，室溫下凝集 35 min，4 ℃ 6 000 g/min 離心 8 min，取上層血清并分裝于 1.5 mL 無 RNA 酶的凍存管中，–80 ℃ 冰箱中凍存，用于檢測血清 LncRNAANRIL、PCT 和 IL-17 水平。
1.3.2 qRT-PCR 法檢測血清 LncRNA ANRIL 水平
從 –80 ℃ 冰箱中取出凍存血清標本，冰上解凍，加 TRIzol 試劑抽提血清樣本總 RNA，操作環節嚴格按照 TRIzol 試劑盒說明書有關步驟進行。采用超微量分光光度計檢測血清樣本在 260 nm 及 280 nm 處的吸光度（A）值，A260/A280 比值范圍在 1.8～2.0 的 RNA 符合后續實驗要求，于 –80 ℃ 冰箱中凍存、備用。根據逆轉錄試劑盒 PrimeScriptTM RT Master Mix Kit 說明書的注意事項及操作步驟配制逆轉錄反應體系，將 RNA 逆轉錄為 cDNA。依據 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 說明書配制反應體系，利用 qRT-PCR 儀檢測 LncRNA ANRIL 的 Ct 值。LncRNA ANRIL 以 β-actin 為內參。LncRNA ANRIL 的上游引物序列為 5′-GCGCCGGACTAGGACTATTT-3′，下游引物序列為 5′-GCCAGGACGCAGATCAGATG-3′，擴增長度為 628 bp；β-actin 的上游引物序列為 5′-CAGCCATGTACGTTGCTATCCAGG-3′，下游引物序列為 5′-AGGTCCAGACGCAGGATGGCATG-3′，擴增長度為 416 bp。采用 2-??Ct法計算 LncRNA ANRIL 的相對表達量，每個樣本設置 3 個復孔，其平均值為受試者血清 LncRNA ANRIL 的表達水平。
1.3.3 ELISA 法檢測血清 PCT 和 IL-17 水平
將凍存血清樣本從 –80 ℃ 冰箱中取出，室溫解凍，嚴格按照 PCT 和 IL-17 試劑盒說明書檢測所有受試者的血清 PCT 和 IL-17 水平。
1.4 統計學方法
所得試驗數據均采用 SPSS 22.0 統計學軟件進行分析。服從正態分布的計量資料以均數±標準差（
±s）形式表示，2 組間的試驗數據比較采用成組t檢驗，多組間比較采用方差分析，有統計學意義者，進一步行 LSD-t檢驗；以 Pearson 簡單相關分析法分析 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平的相關性；以受試者工作特征曲線（ROC 曲線）分析血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平對 UC 的診斷價值。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 2 組患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和IL-17 水平比較
與對照組相比，UC 組患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.001），見表 1。
表1
2 組患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較（
）
2.2 不同程度 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較
輕度組、中度組、重度組 UC 患者的性別和年齡比較差異均無統計學意義（P>0.05）。與輕度組相比，中度組、重度組 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.05）；與中度組相比，重度組 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.05）。詳見表 2。
表2
不同程度 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較
2.3 不同內鏡分級 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較
Ⅰ級、Ⅱ級和Ⅲ級 UC 患者的性別和年齡比較差異均無統計學意義（P>0.05）。與Ⅰ級組患者相比，Ⅱ、Ⅲ級組 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.05）；與Ⅱ級組相比，Ⅲ級組 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.05）。詳見表 3。
表3
不同內鏡分級 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較
2.4 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平的相關性
Pearson 簡單相關分析結果顯示，UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平均呈正相關（r=0.596，P<0.001；r=0.492，P<0.001）。詳見圖 1a 和圖 1b。
圖1
示 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平的相關性散點圖，以及血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平診斷 UC 的 ROC 曲線
a：UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 水平的相關性散點圖；b：UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 IL-17 水平的相關性散點圖；c：血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平診斷 UC 的 ROC 曲線
2.5 血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平對 UC 的診斷價值
以臨床研究較多的 UC 指標—PCT 和 IL-17 為對照，進行 ROC 曲線分析，結果顯示，血清 LncRNA ANRIL 水平和 PCT 水平診斷 UC 的曲線下面積（area under curve，AUC）分別為 0.851 和 0.804，診斷價值較高，高于 IL-17（ZLncRNA ANRIL 比 IL-17=3.481，P=0.001；ZPCT 比 IL-17=2.675，P=0.007），當血清 LncRNA ANRIL 水平>1.29 時，其診斷 UC 的靈敏度為 75.5%，特異度為 83.4%。且 LncRNA ANRIL 水平的診斷價值高于 PCT 水平（Z=2.283，P=0.022）。以 LncRNA ANRIL、PCT 水平為自變量，UC 發生情況為因變量，擬合二分類 logistic 回歸模型，并繪制模型的 ROC 曲線，結果顯示，血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 水平聯合預測 UC 的AUC為 0.898，診斷價值高于 LncRNA ANRIL、PCT 水平單獨檢測（Z聯合比 LncRNA ANRIL=2.102，P=0.036；Z聯合比 PCT=4.204，P<0.001）。詳見表 4和圖 1c。
表4
各項指標對 UC 的診斷價值
3 討論
UC 是臨床常見的炎癥性腸道疾病，發病率呈逐年上升趨勢，已引起世界范圍內的廣泛關注[10-11]。UC 患者體內不僅存在炎癥反應，還多伴有高凝狀態，可形成微血栓，進而引發血管堵塞，影響組織再生，甚至引起組織壞死，影響抗炎藥物的治療效果，使病情復發[12-13]；此外，由于 UC 的臨床表現輕重不一，無明顯特異性，難以早期檢測出 UC，因此，尋找可有效診斷 UC 的方法，對正確評估患者病情進而指導臨床治療具有重要意義，以在最大程度上改善患者的生存質量。
LncRNA 是存在于血液、多種器官組織中的長度大于 200 個核苷酸的非編碼 RNA，在個體發育、細胞生長、免疫調節、炎癥反應等生物學過程中起重要調節作用[14-15]。LncRNA 在 UC、克羅恩病、結腸癌等腸道疾病中表達異常，其可能通過調節腸上皮細胞凋亡和 T 細胞功能，增強炎癥反應，進而參與 UC 的疾病發展過程，可作為 UC 診療的潛在分子靶標[16-18]。有關研究[19]顯示，LncRNA H19 在 UC 患者組織中呈過表達，其可能通過影響腸上皮屏障功能，進而在 UC 的疾病進展中發揮重要作用，有望成為 UC 的潛在診治靶點。另有研究發現，LncRNA MORT 在結直腸癌患者的腫瘤組織中表達下調，其可能通過影響結腸癌細胞的侵襲和遷移，從而影響結直腸癌的發展過程[20]。以上研究證實，異常表達的 LncRNA 與腸道炎癥性疾病密切相關。此外，LncRNA ANRIL 在結直腸癌中的表達水平明顯升高，其可通過影響癌細胞增殖、遷移和侵襲，進而參與癌癥的發生發展[21]。本研究顯示，UC 組患者的血清 LncRNA ANRIL 水平升高，與其在 UC 患者結腸黏膜組織中的表達趨勢一致[6]，且 LncRNA ANRIL 在 UC 患者血清中的表達水平隨 UC 病情加重、內鏡分級的升高而升高，提示 LncRNA ANRIL 表達失調與 UC 的病理發展程度有關。推測可能原因是，LncRNA ANRIL 可能作為 LncRNA 中的一員，通過影響細胞增殖、免疫炎癥反應進而在 UC 的發展進程中起作用。
PCT 是由甲狀腺泡分泌的一種降鈣素前體肽，在自身免疫性疾病、慢性炎癥、敗血癥等疾病中具有重要作用，其可作為炎性反應指標，反映全身炎癥反應的程度[22-23]。據相關文獻顯示，PCT 在急性重癥 UC 中的表達水平明顯升高，其可能參與 UC 的發病過程，可一定程度預測 UC 的預后[24]。既往研究顯示，IL-17 主要是由 Th 細胞分泌的促炎細胞因子，可促進炎癥反應，其在炎癥類疾病中起一定作用[25]。此外，馬乾章等[26]發現，IL-17 在 UC 患者血清中的表達水平明顯升高，經白頭翁湯加味與美沙拉嗪緩釋片聯合治療后，其表達水平降低，IL-17 可能在 UC 的發生發展中發揮促炎作用。本研究顯示，UC 患者的血清 PCT、IL-17 水平明顯上調，且血清 PCT、IL-17 水平隨 UC 疾病的加重而升高，提示 PCT、IL-17 可能在 UC 的病理發展中發揮一定的促炎作用，兩者有利于 UC 患者的病情評估。
本研究中 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平均呈正相關，提示 LncRNA ANRIL 可能與 PCT/IL-17 相互影響，從而協同作用于 UC 的發病進程。本研究探究了血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 對 UC 的診斷價值，結果顯示，血清 LncRNA ANRIL 診斷 UC 的AUC值為 0.851，當血清 LncRNA ANRIL 相對表達量>1.29 時，患有 UC 的風險增加，提示 LncRNA ANRIL 對 UC 有一定的診斷效能，且其診斷價值高于 PCT 和 IL-17 水平，血清 LncRNA ANRIL 有望成為診斷 UC 的潛在分子標志物。為了更好地診斷 UC，本研究還將血清 LncRNA ANRIL 與 PCT 聯合，以探究其對 UC 的診斷價值，結果顯示，血清 LncRNA ANRIL 與 PCT 聯合預測 UC 的AUC為 0.898，靈敏度和特異度分別為 81.8% 及 87.6%，提示血清 LncRNA ANRIL 聯合 PCT 預測 UC 的價值高于 LncRNA ANRIL，PCT 可一定程度提高診斷 UC 的靈敏度，可更好地篩選 UC 患者。
綜上所述，UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 表達上調，LncRNA ANRIL 可能與 PCT 和 IL-17 相互作用，進而共同影響 UC 的發生與發展。但本研究仍存在一定不足之處：本研究所選取的樣本量較少，可能會造成結果出現一定的偏倚；另外，LncRNA ANRIL 在 UC 中的具體機制尚未深入研究，后期將增加樣本量、從多角度探究 LncRNA ANRIL 在 UC 中的作用機制，以期為臨床診治 UC 提供更有力的參考。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們無相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：王艷秋參與資料收集、研究方案設計、實施過程及論文撰寫；許麗麗參與數據分析及論文修改；江濤參與研究方案設計及論文審核；薛娟提出研究方向及思路，并對數據進行統計分析和論文審校。
倫理聲明：本研究已通過河南科技大學第一附屬醫院倫理委員會批準（批文編號：2014-09-B013）。
潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種具有非特異性病因、復發性的慢性結腸炎癥疾病，以腹痛、黏液血便、腹瀉為主要臨床表現，嚴重威脅患者的健康安全[1-2]。UC 的發病機制尚未完全明確，目前，多數專家學者認為 UC 發病不僅與遺傳、炎癥反應有關，還與長鏈非編碼 RNA（long non-coding RNA，LncRNA）有關[3-4]。有關文獻報道顯示，LncRNA 在炎癥性腸病中表達失調，與腸道疾病的發生發展相關，有望成為診斷腸道疾病的生物標志物[5]。近期研究顯示，LncRNA ANRIL（long non-coding RNA antisense non-coding RNA INK4 locus）在 UC 患者的結腸黏膜組織中表達上調，其可能通過調節有關信號途徑，進而參與 UC 的發病進程[6]。但 LncRNA ANRIL 對 UC 的診斷價值鮮有報道。因此，本研究通過檢測 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平，分析其對 UC 的預測價值，以期為臨床早期診斷 UC 和評估其疾病程度提供參考依據。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
納入標準：① 所有患者均經病理學及內鏡檢查，結合臨床表現確診為 UC，且符合 UC 的診斷標準，診斷標準參考《潰瘍性結腸炎診療指南》中的 UC 診斷標準[7]；② 所有受試者的臨床檢查資料齊全；③ 所有受試者知情同意。排除標準：① 合并類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡或其他自身免疫性疾病者；② 既往患有結核、肝炎者；③ 近期服用抗生素、免疫抑制劑或其他特殊藥物者。
回顧性收集 2015 年 2 月至 2019 年 11 月期間河南科技大學第一附屬醫院收治的 143 例 UC 患者為 UC 組，其中男 67 例，女 76 例；年齡 32～71 歲、（48.6±14.8）歲；根據 Truelove-Witts 評分標準[8]將 UC 患者分為輕度組 41 例、中度組 59 例、重度組 43 例；病變累及部位：左半結腸 49 例、乙狀結腸 41 例、全結腸 29 例、直腸 24 例；按 Truelove 標準[9]將 UC 患者進行內鏡分級劃分：Ⅰ級 38 例、Ⅱ級 65 例、Ⅲ級 40 例。并回顧性收集河南科技大學第一附屬醫院同期的 145 例健康體檢正常者為對照組，均無胃腸道或其他嚴重疾病，其中男 66 例，女 79 例；年齡 31～72 歲、（48.8±15.1）歲。UC 組和對照組的性別（χ2=0.052，P=0.820）和年齡（t=0.080，P=0.937）比較差異均無統計學意義，具有較好的可比性。所有受試者知情同意，且本研究獲得河南科技大學第一附屬醫院倫理委員會批準，研究所用方法符合《赫爾辛基宣言》。
1.2 試劑與儀器
總 RNA 提取試劑 TRIzol（貨號：R21086）購自上海源葉生物科技有限公司，PrimeScriptTM RT Master Mix Kit（貨號：RR036A）購自上海浩然生物技術有限公司，SYBR Green Realtime PCR Master Mix（貨號：QPK-201）購自北京索萊寶科技有限公司；人降鈣素原（procalcitonin，PCT）酶聯免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（貨號：BP-E10643）購自上海朗頓生物科技有限公司；人白細胞介素-17（interleukin-17，IL-17）ELISA 試劑盒（貨號：FK-R0179）購自上海樊克生物科技有限公司。
超微量分光光度計（型號：NP80-Touch）購自廣州浩翰儀器有限公司，實時熒光定量 PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）儀（型號：ABI 9700）購自南京貝登電子商務有限公司，酶標儀（型號：21261000）購自北京安麥格貿易有限公司。
1.3 方法
1.3.1 標本采集
收集所有受試者清晨空腹外周血 6～7 mL，室溫下凝集 35 min，4 ℃ 6 000 g/min 離心 8 min，取上層血清并分裝于 1.5 mL 無 RNA 酶的凍存管中，–80 ℃ 冰箱中凍存，用于檢測血清 LncRNAANRIL、PCT 和 IL-17 水平。
1.3.2 qRT-PCR 法檢測血清 LncRNA ANRIL 水平
從 –80 ℃ 冰箱中取出凍存血清標本，冰上解凍，加 TRIzol 試劑抽提血清樣本總 RNA，操作環節嚴格按照 TRIzol 試劑盒說明書有關步驟進行。采用超微量分光光度計檢測血清樣本在 260 nm 及 280 nm 處的吸光度（A）值，A260/A280 比值范圍在 1.8～2.0 的 RNA 符合后續實驗要求，于 –80 ℃ 冰箱中凍存、備用。根據逆轉錄試劑盒 PrimeScriptTM RT Master Mix Kit 說明書的注意事項及操作步驟配制逆轉錄反應體系，將 RNA 逆轉錄為 cDNA。依據 SYBR Green Realtime PCR Master Mix 說明書配制反應體系，利用 qRT-PCR 儀檢測 LncRNA ANRIL 的 Ct 值。LncRNA ANRIL 以 β-actin 為內參。LncRNA ANRIL 的上游引物序列為 5′-GCGCCGGACTAGGACTATTT-3′，下游引物序列為 5′-GCCAGGACGCAGATCAGATG-3′，擴增長度為 628 bp；β-actin 的上游引物序列為 5′-CAGCCATGTACGTTGCTATCCAGG-3′，下游引物序列為 5′-AGGTCCAGACGCAGGATGGCATG-3′，擴增長度為 416 bp。采用 2-??Ct法計算 LncRNA ANRIL 的相對表達量，每個樣本設置 3 個復孔，其平均值為受試者血清 LncRNA ANRIL 的表達水平。
1.3.3 ELISA 法檢測血清 PCT 和 IL-17 水平
將凍存血清樣本從 –80 ℃ 冰箱中取出，室溫解凍，嚴格按照 PCT 和 IL-17 試劑盒說明書檢測所有受試者的血清 PCT 和 IL-17 水平。
1.4 統計學方法
所得試驗數據均采用 SPSS 22.0 統計學軟件進行分析。服從正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）形式表示，2 組間的試驗數據比較采用成組t檢驗，多組間比較采用方差分析，有統計學意義者，進一步行 LSD-t檢驗；以 Pearson 簡單相關分析法分析 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平的相關性；以受試者工作特征曲線（ROC 曲線）分析血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平對 UC 的診斷價值。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 2 組患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和IL-17 水平比較
與對照組相比，UC 組患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.001），見表 1。
表1
2 組患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較（）
2.2 不同程度 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較
輕度組、中度組、重度組 UC 患者的性別和年齡比較差異均無統計學意義（P>0.05）。與輕度組相比，中度組、重度組 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.05）；與中度組相比，重度組 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.05）。詳見表 2。
表2
不同程度 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較
2.3 不同內鏡分級 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較
Ⅰ級、Ⅱ級和Ⅲ級 UC 患者的性別和年齡比較差異均無統計學意義（P>0.05）。與Ⅰ級組患者相比，Ⅱ、Ⅲ級組 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.05）；與Ⅱ級組相比，Ⅲ級組 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平均升高（P<0.05）。詳見表 3。
表3
不同內鏡分級 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平比較
2.4 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平的相關性
Pearson 簡單相關分析結果顯示，UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平均呈正相關（r=0.596，P<0.001；r=0.492，P<0.001）。詳見圖 1a 和圖 1b。
圖1
示 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平的相關性散點圖，以及血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平診斷 UC 的 ROC 曲線
a：UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 水平的相關性散點圖；b：UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 IL-17 水平的相關性散點圖；c：血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平診斷 UC 的 ROC 曲線
2.5 血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 水平對 UC 的診斷價值
以臨床研究較多的 UC 指標—PCT 和 IL-17 為對照，進行 ROC 曲線分析，結果顯示，血清 LncRNA ANRIL 水平和 PCT 水平診斷 UC 的曲線下面積（area under curve，AUC）分別為 0.851 和 0.804，診斷價值較高，高于 IL-17（ZLncRNA ANRIL 比 IL-17=3.481，P=0.001；ZPCT 比 IL-17=2.675，P=0.007），當血清 LncRNA ANRIL 水平>1.29 時，其診斷 UC 的靈敏度為 75.5%，特異度為 83.4%。且 LncRNA ANRIL 水平的診斷價值高于 PCT 水平（Z=2.283，P=0.022）。以 LncRNA ANRIL、PCT 水平為自變量，UC 發生情況為因變量，擬合二分類 logistic 回歸模型，并繪制模型的 ROC 曲線，結果顯示，血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 水平聯合預測 UC 的AUC為 0.898，診斷價值高于 LncRNA ANRIL、PCT 水平單獨檢測（Z聯合比 LncRNA ANRIL=2.102，P=0.036；Z聯合比 PCT=4.204，P<0.001）。詳見表 4和圖 1c。
表4
各項指標對 UC 的診斷價值
3 討論
UC 是臨床常見的炎癥性腸道疾病，發病率呈逐年上升趨勢，已引起世界范圍內的廣泛關注[10-11]。UC 患者體內不僅存在炎癥反應，還多伴有高凝狀態，可形成微血栓，進而引發血管堵塞，影響組織再生，甚至引起組織壞死，影響抗炎藥物的治療效果，使病情復發[12-13]；此外，由于 UC 的臨床表現輕重不一，無明顯特異性，難以早期檢測出 UC，因此，尋找可有效診斷 UC 的方法，對正確評估患者病情進而指導臨床治療具有重要意義，以在最大程度上改善患者的生存質量。
LncRNA 是存在于血液、多種器官組織中的長度大于 200 個核苷酸的非編碼 RNA，在個體發育、細胞生長、免疫調節、炎癥反應等生物學過程中起重要調節作用[14-15]。LncRNA 在 UC、克羅恩病、結腸癌等腸道疾病中表達異常，其可能通過調節腸上皮細胞凋亡和 T 細胞功能，增強炎癥反應，進而參與 UC 的疾病發展過程，可作為 UC 診療的潛在分子靶標[16-18]。有關研究[19]顯示，LncRNA H19 在 UC 患者組織中呈過表達，其可能通過影響腸上皮屏障功能，進而在 UC 的疾病進展中發揮重要作用，有望成為 UC 的潛在診治靶點。另有研究發現，LncRNA MORT 在結直腸癌患者的腫瘤組織中表達下調，其可能通過影響結腸癌細胞的侵襲和遷移，從而影響結直腸癌的發展過程[20]。以上研究證實，異常表達的 LncRNA 與腸道炎癥性疾病密切相關。此外，LncRNA ANRIL 在結直腸癌中的表達水平明顯升高，其可通過影響癌細胞增殖、遷移和侵襲，進而參與癌癥的發生發展[21]。本研究顯示，UC 組患者的血清 LncRNA ANRIL 水平升高，與其在 UC 患者結腸黏膜組織中的表達趨勢一致[6]，且 LncRNA ANRIL 在 UC 患者血清中的表達水平隨 UC 病情加重、內鏡分級的升高而升高，提示 LncRNA ANRIL 表達失調與 UC 的病理發展程度有關。推測可能原因是，LncRNA ANRIL 可能作為 LncRNA 中的一員，通過影響細胞增殖、免疫炎癥反應進而在 UC 的發展進程中起作用。
PCT 是由甲狀腺泡分泌的一種降鈣素前體肽，在自身免疫性疾病、慢性炎癥、敗血癥等疾病中具有重要作用，其可作為炎性反應指標，反映全身炎癥反應的程度[22-23]。據相關文獻顯示，PCT 在急性重癥 UC 中的表達水平明顯升高，其可能參與 UC 的發病過程，可一定程度預測 UC 的預后[24]。既往研究顯示，IL-17 主要是由 Th 細胞分泌的促炎細胞因子，可促進炎癥反應，其在炎癥類疾病中起一定作用[25]。此外，馬乾章等[26]發現，IL-17 在 UC 患者血清中的表達水平明顯升高，經白頭翁湯加味與美沙拉嗪緩釋片聯合治療后，其表達水平降低，IL-17 可能在 UC 的發生發展中發揮促炎作用。本研究顯示，UC 患者的血清 PCT、IL-17 水平明顯上調，且血清 PCT、IL-17 水平隨 UC 疾病的加重而升高，提示 PCT、IL-17 可能在 UC 的病理發展中發揮一定的促炎作用，兩者有利于 UC 患者的病情評估。
本研究中 UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 水平與 PCT 和 IL-17 水平均呈正相關，提示 LncRNA ANRIL 可能與 PCT/IL-17 相互影響，從而協同作用于 UC 的發病進程。本研究探究了血清 LncRNA ANRIL、PCT 和 IL-17 對 UC 的診斷價值，結果顯示，血清 LncRNA ANRIL 診斷 UC 的AUC值為 0.851，當血清 LncRNA ANRIL 相對表達量>1.29 時，患有 UC 的風險增加，提示 LncRNA ANRIL 對 UC 有一定的診斷效能，且其診斷價值高于 PCT 和 IL-17 水平，血清 LncRNA ANRIL 有望成為診斷 UC 的潛在分子標志物。為了更好地診斷 UC，本研究還將血清 LncRNA ANRIL 與 PCT 聯合，以探究其對 UC 的診斷價值，結果顯示，血清 LncRNA ANRIL 與 PCT 聯合預測 UC 的AUC為 0.898，靈敏度和特異度分別為 81.8% 及 87.6%，提示血清 LncRNA ANRIL 聯合 PCT 預測 UC 的價值高于 LncRNA ANRIL，PCT 可一定程度提高診斷 UC 的靈敏度，可更好地篩選 UC 患者。
綜上所述，UC 患者的血清 LncRNA ANRIL 表達上調，LncRNA ANRIL 可能與 PCT 和 IL-17 相互作用，進而共同影響 UC 的發生與發展。但本研究仍存在一定不足之處：本研究所選取的樣本量較少，可能會造成結果出現一定的偏倚；另外，LncRNA ANRIL 在 UC 中的具體機制尚未深入研究，后期將增加樣本量、從多角度探究 LncRNA ANRIL 在 UC 中的作用機制，以期為臨床診治 UC 提供更有力的參考。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們無相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：王艷秋參與資料收集、研究方案設計、實施過程及論文撰寫；許麗麗參與數據分析及論文修改；江濤參與研究方案設計及論文審核；薛娟提出研究方向及思路，并對數據進行統計分析和論文審校。
倫理聲明：本研究已通過河南科技大學第一附屬醫院倫理委員會批準（批文編號：2014-09-B013）。
