引用本文： 湯蕊, 楊慧芳, 高慶軍, 羅雪, 陳星宏, 趙代偉. 甲狀腺乳頭狀癌長鏈非編碼 RNA FoxP4-AS1 表達與淋巴結轉移的相關性研究. 中國普外基礎與臨床雜志, 2021, 28(5): 566-570. doi: 10.7507/1007-9424.202101002 復制
甲狀腺乳頭狀癌（PTC）占甲狀腺癌的 80% 以上[1]。PTC 生物學行為良好，惡性程度不高，但其周圍淋巴結較豐富，早期易發生淋巴結轉移，從而影響患者的長期生存率及生活質量[2-3]。預防性清掃淋巴結作為臨床有效的治療方案，目前仍存在較大爭議，這使得與 PTC 發生、侵襲及轉移相關的因素成為近年來研究的熱點[4-5]。近年來大量研究[6-17]證明，長鏈非編碼 RNAs（lncRNAs）紊亂在各種疾病的發生及發展中發揮關鍵作用。其中 lncRNA FoxP4-AS1 已被證實在結直腸癌[18]、肝癌[19]等惡性腫瘤中表達失調且能夠調控細胞的多種生物學功能。然而 FoxP4-AS1 是否參與 PTC 的發生發展及其與淋巴結轉移的相關性尚不明確。因此，本研究探討 FoxP4-AS1 在 PTC 中的表達情況及其與淋巴結轉移的相關性，旨在為 PTC 淋巴結轉移尋找有效的診斷標志物和治療靶點。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
1.1.1 病例納入和排除標準
納入標準：① 2019 年 10 月至 2020 年 9 月期間于貴州醫科大學附屬醫院（簡稱“我院”）甲狀腺外科行手術切除的 PTC 癌組織及其癌旁（距腫瘤邊緣≥2 cm）非腫瘤組織（簡稱“癌旁組織”），所獲得的組織樣本迅速放入液氮中快速冷凍并在–80 ℃ 下保存；② 術后病理檢查結果證實為 PTC；③ 術前均未接受放化療治療；④ 手術至少切除一側甲狀腺腺葉；⑤ 淋巴結清掃范圍包括中央區和（或）頸側區；⑥ 患者均獲得知情同意且經我院倫理委員會批準。排除標準：① 曾行甲狀腺結節局部消融術治療者；② 曾接受甲狀腺其他腫瘤切除術者；③ 甲狀腺相關檢查資料缺失者。
1.1.2 資料收集及評定標準
患者的人口學資料包括性別、年齡；臨床標本的生物學特性，包括腫瘤直徑、腺外侵犯、多灶性、雙側性、合并橋本甲狀腺炎（HT）及淋巴結轉移情況。評定標準：① 腫瘤直徑，指術中切除腫瘤后直接測量腫瘤的長徑，對于多發病灶和雙側病灶者取最大直徑；② 腺外侵犯，指術中觀察到下列情況之一均可視為腺外侵犯，如腫瘤突出甲狀腺包膜侵犯胸骨甲狀肌、甲狀腺周圍軟組織、喉、氣管、食管、血管、神經、皮下軟組織等；③ 多灶性，指單側甲狀腺腺葉 PTC 病灶數目≥2 個；④ 雙側性，指兩側甲狀腺腺葉均發現 PTC 病變；⑤ 合并 HT，指甲狀腺功能檢查提示甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體陽性和（或）病理學檢查、穿刺活檢證實為 HT；⑥ 淋巴結轉移，指經病理學檢查證實有淋巴結轉移。
1.2 細胞系、試劑及耗材
人 PTC 細胞 TPC-1、B-CPAP 購自武漢普諾賽生命科技有限公司，人 PTC 細胞 K1 及人正常甲狀腺濾泡上皮細胞 Nthy-ori3-1 購自上海市長海醫院。RPMI-1640 培養基（批號：8120192）、DMEM 培養基（批號：8120126）購自美國 Gibco 公司；CellMax 胎牛血清（批號：20200328）購自蘭州民海生物工程有限公司；TRIzol 試劑（批號：257402）購自美國 Invitrogen 公司；細胞總 RNA 提取試劑盒（批號：U8526）、反轉錄試劑盒（批號：U8305）、實時熒光定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）試劑盒（批號：U8820）均購自天根生化科技有限公司；引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成；N50 核酸蛋白測定儀購自德國 Implen 公司；CO2 細胞培養箱購自 Thermo Scientific 公司；CFX96 qRT-PCR 儀、ChemiDoc XRS+凝膠成像儀購自美國 BIO-RAD 公司。
1.3 qRT-PCR 檢測方法
① 細胞培養。人 PTC 細胞 TPC-1、B-CPAP 和人正常甲狀腺濾泡上皮細胞 Nthy-ori3-1 均采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養基培養，人 PTC 細胞 K1 采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基培養。恒溫培養箱的條件為 5% CO2、37 ℃。② 取 50～100 mg 組織磨碎。使用 TRIzol 試劑提取組織總 RNA，按照細胞總 RNA 提取試劑盒說明書提取細胞總 RNA。使用 N50 核酸蛋白測定儀和 1.5% 變形瓊脂糖凝膠檢測總 RNA 濃度和純度。使用反轉錄試劑盒將總 RNA 反轉錄為 cDNA 后使用 qRT-PCR 檢測試劑盒進行擴增，以 GAPDH 為內參。相關引物序列（5′ -3′ ）：FoxP4-AS1 上游引物為 GTGAGCTTCTGGGTTCGACA、下游引物為 ATTGAGGGTTAGGGCAGCAC，擴增片段長度 20 bp；GAPDH 上游引物為 CACCCACTCCTCCACCTTTG、下游引物為 CCACCACCCTGTTGCTGTAG，擴增片段長度 20 bp。FoxP4-AS1 的相對表達量通過 2?ΔΔCt法計算。同時將每例癌組織樣本的 FoxP4-AS1 表達量與其對應的癌旁組織的表達量相比較，表達量高于癌旁組織者為 FoxP4-AS1 高表達，反之則為低表達。
1.4 統計學方法
分別采用 SPSS 22.0、Graphpad prism 6.0 軟件進行統計學分析和繪圖，對符合正態分布的計量資料以均數±標準差（
±s）表示，2 組間比較采用配對樣本 t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析并進行多重比較 。計數資料采用 Pearson χ2 檢驗（當 1≤理論頻數<5 時采用連續性校正的 χ2 檢驗），應用二分類 logistic 回歸模型進行多因素分析；繪制受試者操作特征（ROC）曲線并確定其曲線下面積（AUC）、靈敏度和特異度，通過 AUC 評估影響因素的預測價值。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 本研究納入患者的基本情況以及 FoxP4-AS1 在不同組織及細胞中的表達情況
本研究共收集到符合納排標準的 52 例癌組織及其對應的癌旁組織。男 19 例、女 33 例，年齡<55 歲 43 例、≥55 歲 9 例；腫瘤直徑≤1 cm 者 20 例、>1 cm 者 32 例；有腺外侵犯 14 例，多灶性 18 例，雙側 16 例，合并 HT 者 13 例，有淋巴結轉移者 35 例。FoxP4-AS1 表達水平在 PTC 癌組織中低于癌旁組織（t=7.898，P<0.001）；其在多種細胞中總體比較差異有統計學意義（F=29.866，P<0.001），多重比較顯示， TPC-1 細胞和 K1 細胞中的表達水平低于 Nthy-ori3-1 細胞（ P<0.001），而 B-CPAP 細胞和 Nthy-ori3-1 細胞比較差異無統計學意義（P>0.05），見表 1。
表1
FoxP4-AS1 在不同組織及細胞中的表達情況（
）
2.2 PTC 淋巴結轉移的單因素和多因素分析結果
單因素分析結果（表 2）顯示，有腺外侵犯（χ2=4.205，P=0.040）和 FoxP4-AS1 低表達（χ2=7.144，P=0.008）是 PTC 淋巴結轉移的影響因素，而性別、年齡、腫瘤直徑、多灶性、雙側性、合并 HT 對 PTC 淋巴結轉移無影響（P>0.05）。多因素分析結果（表 3）顯示，有腺外侵犯 ［OR=9.455，95%CI（1.120，79.835），P=0.039］和 FoxP4-AS1 低表達 ［OR=5.437，95%CI（1.488，19.873），P=0.010］是 PTC 淋巴結轉移的危險因素，未發現腫瘤直徑、多灶性、雙側性、合并 HT 是 PTC 淋巴結轉移的危險因素（P>0.05）。
表2
影響 PTC 淋巴結轉移的單因素分析結果（例）
表3
PTC 淋巴結轉移影響因素的多因素分析結果
2.3 FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯對 PTC 淋巴結轉移的預測價值
由于腺外侵犯和 FoxP4-AS1 低表達是 PTC 淋巴結轉移的危險因素，因此，繪制 ROC 曲線分別得到 FoxP4-AS1 低表達、腺外侵犯單獨及二者聯合檢測（將兩項指標聯合通過二分類 logistic 回歸分析得到預測值，采用預測值繪制 ROC 曲線）的 AUC 值、敏感度及特異度，結果表明，FoxP4-AS1 低表達對 PTC 淋巴結轉移具有一定的預測價值，將 FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯兩個影響因素聯合檢測對 PTC 淋巴結轉移的預測價值更高，見表 4、圖 1。
表4
各影響因素的 ROC 曲線分析結果
圖1
示 FoxP4-AS1 低表達、腺外侵犯以及二者聯合預測 PTC 患者淋巴結轉移的 ROC 曲線
3 討論
甲狀腺癌大多起源于甲狀腺濾泡上皮細胞，是內分泌系統最常見的惡性腫瘤[20]。其中 PTC 是甲狀腺癌中最常見的組織學類型，侵襲性 PTC 早期易發生淋巴結轉移且 10%～15% 的 PTC 患者出現遠處轉移和復發，患者二次手術和圍術期并發癥增加[21-22]。有研究[23]發現，淋巴結轉移是 PTC 術后復發、預后的獨立影響因素。因此，尋找 PTC 淋巴結轉移的有效分子標志物及治療靶點具有重要意義。
lncRNA 是一類長度超過 200 個核苷酸、無蛋白質編碼能力的轉錄物[24]。近年來，隨著基因芯片、高通量測序以及分子生物學技術的發展，越來越多的 lncRNAs 被證實可通過表觀遺傳調控、轉錄調控和轉錄后調控參與基因的表達[25]，在人體的生理和病理反應中起著綜合調節作用，包括細胞生長、發育、分化、癌變等[26-27]。張冬雪等[28]發現，在 PTC 患者血漿中 lncRNA GAS8-AS1 表達水平降低，其較低的表達水平與 PTC 患者淋巴結轉移密切相關。Zhang 等[29]研究發現，lncRNA BANCR 在 PTC 中表達下調，其與 PTC 淋巴結轉移呈負相關。相反，劉玲等[30]發現 lncRNA TCONS-00020455 和 TCONS-00020457 在 PTC 中高表達且與淋巴結轉移具有相關性。另有一項研究[31]證實 lncRNA SNHG22 在 PTC 中過表達，其與 PTC 淋巴結轉移呈正相關。上述研究表明，lncRNAs 在 PTC 的發生發展過程中發揮著促癌基因或抑癌基因的作用，其表達失調與惡性腫瘤的發生、侵襲和轉移有關。
lncRNA FoxP4-AS1 首次在結直腸癌中被研究報道[18]，此后，人們從多方面探究 FoxP4-AS1 在惡性腫瘤中的作用機制。一方面，FoxP4-AS1 通過與 LSD1 和 EZH2 結合，在轉錄水平參與骨肉瘤和胃癌的發生發展，并且 FoxP4-AS1 是骨肉瘤和胃癌預后的獨立危險因素[32-33]；另一方面，因其含有 miRNA 結合位點，在前列腺癌和宮頸癌中，FoxP4-AS1 作為競爭性內源性 RNA 分別與 miR-3184-5P、miR-136-5P 相互作用，進而參與惡性腫瘤的發生發展，而且 FoxP4-AS1 的表達與患者較差的預后和總體生存率有關[34-35]。另有研究[36]表明，特異性蛋白 1 可上調 FoxP4-AS1 的表達，促進結直腸癌細胞增殖；同時 FoxP4-AS1 也在食管鱗狀細胞癌[37]、胰腺導管腺癌[38]及鼻咽癌[39]中被報道。
在本研究中發現，FoxP4-AS1 在 PTC 組織中的表達水平低于癌旁組織，并進一步檢測了 FoxP4-AS1 在 PTC 細胞中的表達情況，結果表明，與正常甲狀腺濾泡上皮細胞相比，FoxP4-AS1 在 PTC 細胞中表達下調，這提示 FoxP4-AS1 可能在 PTC 中起到抑癌作用。本研究結果還發現，PTC 淋巴結轉移與 FoxP4-AS1 較低的表達水平有關，為明確 FoxP4-AS 表達水平與 PTC 淋巴結轉移之間是否存在相關性，單因素分析結果表明，FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯是 PTC 淋巴結發生轉移的影響因素，二分類 logistic 回歸分析表明 FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯是 PTC 淋巴結轉移的危險因素，通過繪制 ROC 曲線評估 FoxP4-AS1 對 PTC 淋巴結轉移的預測價值，發現 FoxP4-AS1 低表達對 PTC 淋巴結轉移具有一定的預測價值，且 FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯聯合檢測時更能提高對 PTC 淋巴結轉移的預測價值。因此，檢測 PTC 組織中 lncRNA FoxP4-AS1 的表達水平有可能為 PTC 淋巴結轉移的診斷提供理論依據，為患者選擇更加合適的個體化治療方案提供理論參考。
基于本研究的初步研究結果，可進一步擴大樣本量、建立多中心研究深入探討 FoxP4-AS1 與 PTC 發展過程中淋巴結轉移的關系及其具體作用機制，以期讓 FoxP4-AS1 在 PTC 的診斷、治療及預后評估中發揮更有利的作用。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：湯蕊負責臨床試驗設計、觀察病例、收集數據、統計分析、論文撰寫與修改；楊慧芳負責組織標本、數據收集、統計分析；高慶軍負責指導臨床試驗設計、論文修改；羅雪和陳星宏負責觀察病例、收集數據；趙代偉負責臨床試驗設計指導、數據及統計分析結果審核、論文修改。
倫理聲明：本研究通過了貴州醫科大學附屬醫院倫理委員會審批［批文編號：2018 倫審第（027）號］。
甲狀腺乳頭狀癌（PTC）占甲狀腺癌的 80% 以上[1]。PTC 生物學行為良好，惡性程度不高，但其周圍淋巴結較豐富，早期易發生淋巴結轉移，從而影響患者的長期生存率及生活質量[2-3]。預防性清掃淋巴結作為臨床有效的治療方案，目前仍存在較大爭議，這使得與 PTC 發生、侵襲及轉移相關的因素成為近年來研究的熱點[4-5]。近年來大量研究[6-17]證明，長鏈非編碼 RNAs（lncRNAs）紊亂在各種疾病的發生及發展中發揮關鍵作用。其中 lncRNA FoxP4-AS1 已被證實在結直腸癌[18]、肝癌[19]等惡性腫瘤中表達失調且能夠調控細胞的多種生物學功能。然而 FoxP4-AS1 是否參與 PTC 的發生發展及其與淋巴結轉移的相關性尚不明確。因此，本研究探討 FoxP4-AS1 在 PTC 中的表達情況及其與淋巴結轉移的相關性，旨在為 PTC 淋巴結轉移尋找有效的診斷標志物和治療靶點。
1 資料與方法
1.1 臨床資料
1.1.1 病例納入和排除標準
納入標準：① 2019 年 10 月至 2020 年 9 月期間于貴州醫科大學附屬醫院（簡稱“我院”）甲狀腺外科行手術切除的 PTC 癌組織及其癌旁（距腫瘤邊緣≥2 cm）非腫瘤組織（簡稱“癌旁組織”），所獲得的組織樣本迅速放入液氮中快速冷凍并在–80 ℃ 下保存；② 術后病理檢查結果證實為 PTC；③ 術前均未接受放化療治療；④ 手術至少切除一側甲狀腺腺葉；⑤ 淋巴結清掃范圍包括中央區和（或）頸側區；⑥ 患者均獲得知情同意且經我院倫理委員會批準。排除標準：① 曾行甲狀腺結節局部消融術治療者；② 曾接受甲狀腺其他腫瘤切除術者；③ 甲狀腺相關檢查資料缺失者。
1.1.2 資料收集及評定標準
患者的人口學資料包括性別、年齡；臨床標本的生物學特性，包括腫瘤直徑、腺外侵犯、多灶性、雙側性、合并橋本甲狀腺炎（HT）及淋巴結轉移情況。評定標準：① 腫瘤直徑，指術中切除腫瘤后直接測量腫瘤的長徑，對于多發病灶和雙側病灶者取最大直徑；② 腺外侵犯，指術中觀察到下列情況之一均可視為腺外侵犯，如腫瘤突出甲狀腺包膜侵犯胸骨甲狀肌、甲狀腺周圍軟組織、喉、氣管、食管、血管、神經、皮下軟組織等；③ 多灶性，指單側甲狀腺腺葉 PTC 病灶數目≥2 個；④ 雙側性，指兩側甲狀腺腺葉均發現 PTC 病變；⑤ 合并 HT，指甲狀腺功能檢查提示甲狀腺過氧化物酶抗體、甲狀腺球蛋白抗體陽性和（或）病理學檢查、穿刺活檢證實為 HT；⑥ 淋巴結轉移，指經病理學檢查證實有淋巴結轉移。
1.2 細胞系、試劑及耗材
人 PTC 細胞 TPC-1、B-CPAP 購自武漢普諾賽生命科技有限公司，人 PTC 細胞 K1 及人正常甲狀腺濾泡上皮細胞 Nthy-ori3-1 購自上海市長海醫院。RPMI-1640 培養基（批號：8120192）、DMEM 培養基（批號：8120126）購自美國 Gibco 公司；CellMax 胎牛血清（批號：20200328）購自蘭州民海生物工程有限公司；TRIzol 試劑（批號：257402）購自美國 Invitrogen 公司；細胞總 RNA 提取試劑盒（批號：U8526）、反轉錄試劑盒（批號：U8305）、實時熒光定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）試劑盒（批號：U8820）均購自天根生化科技有限公司；引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成；N50 核酸蛋白測定儀購自德國 Implen 公司；CO2 細胞培養箱購自 Thermo Scientific 公司；CFX96 qRT-PCR 儀、ChemiDoc XRS+凝膠成像儀購自美國 BIO-RAD 公司。
1.3 qRT-PCR 檢測方法
① 細胞培養。人 PTC 細胞 TPC-1、B-CPAP 和人正常甲狀腺濾泡上皮細胞 Nthy-ori3-1 均采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養基培養，人 PTC 細胞 K1 采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基培養。恒溫培養箱的條件為 5% CO2、37 ℃。② 取 50～100 mg 組織磨碎。使用 TRIzol 試劑提取組織總 RNA，按照細胞總 RNA 提取試劑盒說明書提取細胞總 RNA。使用 N50 核酸蛋白測定儀和 1.5% 變形瓊脂糖凝膠檢測總 RNA 濃度和純度。使用反轉錄試劑盒將總 RNA 反轉錄為 cDNA 后使用 qRT-PCR 檢測試劑盒進行擴增，以 GAPDH 為內參。相關引物序列（5′ -3′ ）：FoxP4-AS1 上游引物為 GTGAGCTTCTGGGTTCGACA、下游引物為 ATTGAGGGTTAGGGCAGCAC，擴增片段長度 20 bp；GAPDH 上游引物為 CACCCACTCCTCCACCTTTG、下游引物為 CCACCACCCTGTTGCTGTAG，擴增片段長度 20 bp。FoxP4-AS1 的相對表達量通過 2?ΔΔCt法計算。同時將每例癌組織樣本的 FoxP4-AS1 表達量與其對應的癌旁組織的表達量相比較，表達量高于癌旁組織者為 FoxP4-AS1 高表達，反之則為低表達。
1.4 統計學方法
分別采用 SPSS 22.0、Graphpad prism 6.0 軟件進行統計學分析和繪圖，對符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，2 組間比較采用配對樣本 t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析并進行多重比較 。計數資料采用 Pearson χ2 檢驗（當 1≤理論頻數<5 時采用連續性校正的 χ2 檢驗），應用二分類 logistic 回歸模型進行多因素分析；繪制受試者操作特征（ROC）曲線并確定其曲線下面積（AUC）、靈敏度和特異度，通過 AUC 評估影響因素的預測價值。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 本研究納入患者的基本情況以及 FoxP4-AS1 在不同組織及細胞中的表達情況
本研究共收集到符合納排標準的 52 例癌組織及其對應的癌旁組織。男 19 例、女 33 例，年齡<55 歲 43 例、≥55 歲 9 例；腫瘤直徑≤1 cm 者 20 例、>1 cm 者 32 例；有腺外侵犯 14 例，多灶性 18 例，雙側 16 例，合并 HT 者 13 例，有淋巴結轉移者 35 例。FoxP4-AS1 表達水平在 PTC 癌組織中低于癌旁組織（t=7.898，P<0.001）；其在多種細胞中總體比較差異有統計學意義（F=29.866，P<0.001），多重比較顯示， TPC-1 細胞和 K1 細胞中的表達水平低于 Nthy-ori3-1 細胞（ P<0.001），而 B-CPAP 細胞和 Nthy-ori3-1 細胞比較差異無統計學意義（P>0.05），見表 1。
表1
FoxP4-AS1 在不同組織及細胞中的表達情況（）
2.2 PTC 淋巴結轉移的單因素和多因素分析結果
單因素分析結果（表 2）顯示，有腺外侵犯（χ2=4.205，P=0.040）和 FoxP4-AS1 低表達（χ2=7.144，P=0.008）是 PTC 淋巴結轉移的影響因素，而性別、年齡、腫瘤直徑、多灶性、雙側性、合并 HT 對 PTC 淋巴結轉移無影響（P>0.05）。多因素分析結果（表 3）顯示，有腺外侵犯 ［OR=9.455，95%CI（1.120，79.835），P=0.039］和 FoxP4-AS1 低表達 ［OR=5.437，95%CI（1.488，19.873），P=0.010］是 PTC 淋巴結轉移的危險因素，未發現腫瘤直徑、多灶性、雙側性、合并 HT 是 PTC 淋巴結轉移的危險因素（P>0.05）。
表2
影響 PTC 淋巴結轉移的單因素分析結果（例）
表3
PTC 淋巴結轉移影響因素的多因素分析結果
2.3 FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯對 PTC 淋巴結轉移的預測價值
由于腺外侵犯和 FoxP4-AS1 低表達是 PTC 淋巴結轉移的危險因素，因此，繪制 ROC 曲線分別得到 FoxP4-AS1 低表達、腺外侵犯單獨及二者聯合檢測（將兩項指標聯合通過二分類 logistic 回歸分析得到預測值，采用預測值繪制 ROC 曲線）的 AUC 值、敏感度及特異度，結果表明，FoxP4-AS1 低表達對 PTC 淋巴結轉移具有一定的預測價值，將 FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯兩個影響因素聯合檢測對 PTC 淋巴結轉移的預測價值更高，見表 4、圖 1。
表4
各影響因素的 ROC 曲線分析結果
圖1
示 FoxP4-AS1 低表達、腺外侵犯以及二者聯合預測 PTC 患者淋巴結轉移的 ROC 曲線
3 討論
甲狀腺癌大多起源于甲狀腺濾泡上皮細胞，是內分泌系統最常見的惡性腫瘤[20]。其中 PTC 是甲狀腺癌中最常見的組織學類型，侵襲性 PTC 早期易發生淋巴結轉移且 10%～15% 的 PTC 患者出現遠處轉移和復發，患者二次手術和圍術期并發癥增加[21-22]。有研究[23]發現，淋巴結轉移是 PTC 術后復發、預后的獨立影響因素。因此，尋找 PTC 淋巴結轉移的有效分子標志物及治療靶點具有重要意義。
lncRNA 是一類長度超過 200 個核苷酸、無蛋白質編碼能力的轉錄物[24]。近年來，隨著基因芯片、高通量測序以及分子生物學技術的發展，越來越多的 lncRNAs 被證實可通過表觀遺傳調控、轉錄調控和轉錄后調控參與基因的表達[25]，在人體的生理和病理反應中起著綜合調節作用，包括細胞生長、發育、分化、癌變等[26-27]。張冬雪等[28]發現，在 PTC 患者血漿中 lncRNA GAS8-AS1 表達水平降低，其較低的表達水平與 PTC 患者淋巴結轉移密切相關。Zhang 等[29]研究發現，lncRNA BANCR 在 PTC 中表達下調，其與 PTC 淋巴結轉移呈負相關。相反，劉玲等[30]發現 lncRNA TCONS-00020455 和 TCONS-00020457 在 PTC 中高表達且與淋巴結轉移具有相關性。另有一項研究[31]證實 lncRNA SNHG22 在 PTC 中過表達，其與 PTC 淋巴結轉移呈正相關。上述研究表明，lncRNAs 在 PTC 的發生發展過程中發揮著促癌基因或抑癌基因的作用，其表達失調與惡性腫瘤的發生、侵襲和轉移有關。
lncRNA FoxP4-AS1 首次在結直腸癌中被研究報道[18]，此后，人們從多方面探究 FoxP4-AS1 在惡性腫瘤中的作用機制。一方面，FoxP4-AS1 通過與 LSD1 和 EZH2 結合，在轉錄水平參與骨肉瘤和胃癌的發生發展，并且 FoxP4-AS1 是骨肉瘤和胃癌預后的獨立危險因素[32-33]；另一方面，因其含有 miRNA 結合位點，在前列腺癌和宮頸癌中，FoxP4-AS1 作為競爭性內源性 RNA 分別與 miR-3184-5P、miR-136-5P 相互作用，進而參與惡性腫瘤的發生發展，而且 FoxP4-AS1 的表達與患者較差的預后和總體生存率有關[34-35]。另有研究[36]表明，特異性蛋白 1 可上調 FoxP4-AS1 的表達，促進結直腸癌細胞增殖；同時 FoxP4-AS1 也在食管鱗狀細胞癌[37]、胰腺導管腺癌[38]及鼻咽癌[39]中被報道。
在本研究中發現，FoxP4-AS1 在 PTC 組織中的表達水平低于癌旁組織，并進一步檢測了 FoxP4-AS1 在 PTC 細胞中的表達情況，結果表明，與正常甲狀腺濾泡上皮細胞相比，FoxP4-AS1 在 PTC 細胞中表達下調，這提示 FoxP4-AS1 可能在 PTC 中起到抑癌作用。本研究結果還發現，PTC 淋巴結轉移與 FoxP4-AS1 較低的表達水平有關，為明確 FoxP4-AS 表達水平與 PTC 淋巴結轉移之間是否存在相關性，單因素分析結果表明，FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯是 PTC 淋巴結發生轉移的影響因素，二分類 logistic 回歸分析表明 FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯是 PTC 淋巴結轉移的危險因素，通過繪制 ROC 曲線評估 FoxP4-AS1 對 PTC 淋巴結轉移的預測價值，發現 FoxP4-AS1 低表達對 PTC 淋巴結轉移具有一定的預測價值，且 FoxP4-AS1 低表達和腺外侵犯聯合檢測時更能提高對 PTC 淋巴結轉移的預測價值。因此，檢測 PTC 組織中 lncRNA FoxP4-AS1 的表達水平有可能為 PTC 淋巴結轉移的診斷提供理論依據，為患者選擇更加合適的個體化治療方案提供理論參考。
基于本研究的初步研究結果，可進一步擴大樣本量、建立多中心研究深入探討 FoxP4-AS1 與 PTC 發展過程中淋巴結轉移的關系及其具體作用機制，以期讓 FoxP4-AS1 在 PTC 的診斷、治療及預后評估中發揮更有利的作用。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：湯蕊負責臨床試驗設計、觀察病例、收集數據、統計分析、論文撰寫與修改；楊慧芳負責組織標本、數據收集、統計分析；高慶軍負責指導臨床試驗設計、論文修改；羅雪和陳星宏負責觀察病例、收集數據；趙代偉負責臨床試驗設計指導、數據及統計分析結果審核、論文修改。
倫理聲明：本研究通過了貴州醫科大學附屬醫院倫理委員會審批［批文編號：2018 倫審第（027）號］。
