引用本文： 劉海潮, 白明輝, 蘇寶威, 劉少朋, 蔣珍. TNIK 在胃癌組織中的表達及其臨床意義. 中國普外基礎與臨床雜志, 2020, 27(3): 320-325. doi: 10.7507/1007-9424.201906081 復制
胃癌是危害人類健康的常見惡性腫瘤之一，全球發病率和死亡率分別排名第 5 位和第 3 位；盡管近年在胃癌的治療方面（包括化療、放療和外科技術）已取得很大的進展，但胃癌患者的存活率仍然很低[1]。胃癌復發與轉移是患者死亡的主要原因，且胃癌的侵襲和轉移是由多個細胞內及細胞外因素共同參與的復雜過程[2]。腫瘤壞死因子受體相關因子-2 和 Nck 相互作用蛋白激酶（Traf-2 and Nck-interacting protein kinase，TNIK）是一種由 TNIK 基因編碼的蛋白激酶，近年來相關研究發現，磷酸化 TNIK 在結直腸癌組織中的表達水平增高，TNIK 基因拷貝數在少數胃癌組織中顯著增高，TNIK 與結直腸癌和胃癌的發病有關[3-4]。本研究通過檢測 TNIK 蛋白在胃癌組織中的表達水平，并與癌旁組織及胃潰瘍組織相對比，進一步分析 TNIK 蛋白與胃癌患者臨床病理學特征的關系及其與生存預后的意義，以期為胃癌的臨床診治提供參考。
1 資料和方法
1.1 病例納入和排除標準
胃癌患者納入標準：① 術前未行放療或化療等其他輔助治療；② 術前未合并其他臟器轉移；③ 患者一般情況良好，能耐受全麻手術；④ 手術可切除，且術后由 2 名經驗豐富的病理科醫師對組織切片進行閱片并同時確診為胃癌。排除標準：① 術前合并其他臟器或淋巴結轉移；② 術前行輔助放療或化療治療；③ 術前一般情況差，不能耐受全麻手術；④ 術前評估無法手術切除或術中探查確認無法手術切除。
胃潰瘍患者納入標準：① 在首次入院時行胃鏡檢查并取組織活檢確診為胃潰瘍；② 未合并癌前病變和（或）癌變；③ 患者一般情況良好，能配合胃鏡檢查；④ 未合并其他腫瘤性疾病。排除標準：① 入院胃鏡檢查提示合并癌前病變和（或）癌變；② 患者基礎體質差，無法耐受胃鏡檢查；③ 合并其他腫瘤性疾病。
1.2 臨床資料
回顧性收集 2014 年 7 月至 2017 年 12 月期間經鄭州大學附屬洛陽中心醫院普通外科行手術切除、病理科確診為胃癌的 78 例患者（胃癌患者術前均未行放療或化療），同時選取患者對應的癌旁組織（距腫瘤邊緣>5 cm）78 例。此外選取同期 42 例胃潰瘍組織一并研究。首先將一部分組織標本立即置于液氮中，–80 ℃ 保存以備 RNA 和蛋白提取用；另一部分組織標本經石蠟包埋，以進行免疫組織化學染色。
78 例胃癌患者中，男 43 例，女 35 例；年齡 54～65 歲、（60±3）歲。42 例胃潰瘍患者中，男 22 例，女 20 例；年齡 52～61 歲、（57±1）歲。胃癌患者和胃潰瘍患者的年齡和性別比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。本研究患者的病歷資料完整，研究獲鄭州大學附屬洛陽中心醫院倫理委員會的批準以及受試對象的知情同意。
1.3 免疫組織化學檢測 TNIK 蛋白的表達及其結果判定
石蠟包塊組織以 4 μm 厚度連續切片，65 ℃ 烤片 45 min，常規脫蠟和水化；切片浸入枸櫞酸緩沖液（pH=8.0）中微波加熱修復 2 min；以 3% H2O2-甲醇氧化并室溫孵育 5 min；加入正常山羊血清封閉液，室溫靜置 15 min，甩去多余液體；加入兔抗人 TNIK 多克隆抗體，室溫孵育 30 min，4 ℃ 過夜；滴加生物素化山羊抗兔 IgG，室溫放置 30 min；室溫下 DAB 顯色 7 min，再行流水沖洗、蘇木精復染、常規梯度乙醇脫水、二甲苯透明和中性樹膠封片。對照設置：以 PBS 溶液替代一抗作為陰性對照。
光鏡（200 倍）下隨機選取 3 個視野，根據細胞的染色強度以及染色廣度（陽性細胞所占百分比）來確定 TNIK 蛋白的表達情況[5]。TNIK 蛋白陽性表達為細胞質染色，呈棕黃色至黃褐色；細胞核表達陰性，呈藍色。染色強度評分：0 分，無色；1 分，淡黃色；2 分，棕黃色；3 分，棕褐色。染色廣度評分：0 分，陽性細胞占比 0～5%；1 分，陽性細胞占比 6%～25%；2 分，陽性細胞占比 26%～50%；3 分，陽性細胞占比 51%～75%；4 分，陽性細胞占比 76%～100%。兩者積分相乘即為陽性評分：0 分為陰性（–），1～4 分為弱陽性（+），5～8 分為陽性（++），9～12 分為強陽性（+++）；陽性包括弱陽性、陽性及強陽性。
1.4 Western blot 法檢測 TNIK 蛋白的表達
分別提取 3 組的組織蛋白，用 Bradford 比色法測定蛋白質濃度，然后分別加入相同的細胞裂解液和緩沖液后放入沸水中 3 min；用考馬斯亮藍法測定蛋白濃度，取 100 μg 樣品上樣，行凝膠電泳、脫脂，并加入一抗，過夜后用 TBST 溶液洗滌，每次 15 min，共 3 次；再加入適量辣根過氧化物酶標記 IgG 二抗，于 37 ℃ 孵育 1 h，TBST 溶液洗滌 3 次，每 15 分鐘換液 1 次；用增強化學發光法（enhanced chemiluminescence，ECL） 試劑盒顯影，底片經掃描儀透掃，對結果進行灰度分析，半定量方法參照文獻 [6] 的方法進行。
1.5 隨訪
上述病例均通過定期來筆者所在醫院科室復查的方法進行隨訪。
1.6 統計學方法
采用 SPSS 17.0 軟件進行統計學處理。生存曲線采用 GraphPad Prism 軟件進行統計學處理。定量資料以均數±標準差（
±s）表示，計數資料以百分比（%）表示。定量資料的比較采用配對或成組t 檢驗；計數資料的比較采用配對或成組 χ2 檢驗；生存情況的比較采用 log-rank 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 免疫組織化學檢測結果
胃癌組織、癌旁組織和胃潰瘍組織中，TNIK 蛋白的陽性表達主要位于細胞質中（圖1a–1c），呈棕黃色或黃褐色。胃癌組中，TNIK 蛋白的陽性表達率為 66.67%（52/78），癌旁組織組為 11.54%（9/78），胃潰瘍組為 21.43%（9/42）。胃癌組的 TNIK 蛋白陽性表達率高于癌旁組織組和胃潰瘍組（P<0.05），但癌旁組織組和胃潰瘍組比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1 和表2。
圖1
示胃癌組織、癌旁組織及胃潰瘍組織中 TNIK 蛋白的表達情況（SP ×200）、TNIK 蛋白的電泳結果及其半定量結果，以及不同 TNIK 蛋白表達情況患者的生存曲線
a：胃癌組織中 TNIK 蛋白的表達；b：癌旁組織中 TNIK 蛋白的表達；c：胃潰瘍組織中 TNIK 蛋白的表達；d：TNIK 蛋白的電泳結果；e：TNIK 蛋白的半定量結果；f：TNIK 蛋白表達陽性及陰性胃癌患者的生存曲線
表1
胃癌組織與癌旁組織中 TNIK 蛋白的表達比較（例）
表2
胃癌組/癌旁組織組與胃潰瘍組中 TNIK 蛋白的表達比較（例）
2.2 Western blot 法檢測結果
Western blot 檢測結果提示，在胃癌組中，TNIK 蛋白的表達水平高于胃潰瘍組及癌旁組織組，差異均有統計學意義（t=5.134，P=0.002；t=10.473，P<0.001）；但癌旁組織組與胃潰瘍組比較差異無統計學意義（t=1.026，P=0.772），見圖1d 和圖1e。
2.3 TNIK 蛋白的表達與胃癌臨床病理學特征的關系
TNIK 蛋白的表達與胃癌患者的性別、CEA 值、腫瘤直徑及病理學類型均無關（P>0.05），但與胃癌患者的年齡、腫瘤 TNM 分期 ［國際抗癌聯盟/美國癌癥聯合委員會（UTCC/AJCC）第 8 版］ [7]、分化程度、遠處轉移及淋巴結的轉移密切相關，年齡≥60 歲，腫瘤分期Ⅲ+Ⅳ期、腫瘤分化程度為中低分化者、發生淋巴結及遠處轉移者，TNIK 蛋白的陽性表達率也較高（P<0.05），具體見表3。
表3
胃癌組織中 TNIK 蛋白的表達與胃癌臨床病理學特征的關系（例）
2.4 TNIK 蛋白表達與胃癌患者預后的關系
本組 78 例胃癌患者中，3 例胃癌患者術后 2 年半時因多次無法取得聯系而失訪，隨訪率為 96.2%。截至 2018 年 12 月 1 日，本組胃癌患者的隨訪時間為 9～36 個月，中位數為 22 個月。其中 TNIK 蛋白陽性胃癌患者的中位生存時間為 16.827 個月，TNIK 蛋白陰性胃癌患者為 28.512 個月。log-rank 檢驗結果顯示，與 TNIK 蛋白陰性患者相比，TNIK 蛋白陽性患者的生存情況較差（χ2=20.124，P<0.001），見表4 和圖1f。此外，年齡、TNM 分期、分化程度、遠處轉移和淋巴結轉移也是影響預后的因素（P<0.05），見表4。
表4
log-rank 檢驗分析結果
3 討論
TNIK 蛋白是生發中心激酶家族的成員之一，編碼基因位于 3q26.31，編碼含 1 360 個氨基酸的多肽鏈[10-14]。TNIK 是絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路的上游因子[15-16]。TNIK 蛋白具有諸多功能區域，包括 N 端激酶區域、C 端調節區域及中間同源性低的功能區域。在人體正常細胞中，它的前體 mRNA 通過選擇性剪切和接合，進而產生 8 種剪接體[17-18]，進一步與上游的 Nck、Traf-2 和小 G 蛋白 Rap-2 結合，分子內部構象發生變化，通過自身的磷酸化而激活，此后再激活下游底物，最終廣泛參與機體免疫反應、細胞增殖、分化、細胞周期調控、凋亡等重要過程[19]。研究[20]發現，早期胚胎的發育與腫瘤細胞的增殖、分化等行為存在著諸多相似之處，因此推斷，腫瘤的發生與胚胎發育存在著某種聯系，進而推測，參與胚胎發育的細胞因子都有可能在腫瘤的發生發展過程中發揮著一定作用。TNIK 蛋白最初被認為是參與多種細胞骨架調節和神經樹突延伸的組織激酶，后發現其與人類多種腫瘤的發生發展相關。最近有關報道[17, 21-22]稱，TNIK 蛋白是人類多種腫瘤治療的新靶點。
TNIK 分子廣泛參與了 Wnt/β-catenin、磷脂酰肌醇-3（PI3K）/蛋白激酶 B（Akt）、c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、核因子-κB（NF-kB）等信號通路傳導及轉錄調控，而這些通路已被證實與腫瘤的發生發展密切相關[23-28]。因此，采用特定手段敲除 TNIK 基因后，上述多種細胞內及細胞間的信號轉導通路就會受到影響，進而腫瘤的發生發展過程亦會受到一定影響[29-30]。相關研究[3]發現，磷酸化的 TNIK 蛋白在結直腸癌組織中呈高表達。Takahashi 等[31]研究發現，TNIK 蛋白的高表達是影響結直腸癌患者預后的相關獨立危險因素。Zhang 等[32]的研究顯示，TNIK 蛋白在胰腺癌組織中的表達水平顯著高于癌旁組織，且其表達水平與胰腺癌的 TNM 分期有關，即 TNM 分期越晚，TNIK 蛋白的表達水平越高。Liang 等[33]的研究證實，絲裂原激活蛋白激酶（HGK）與胰腺癌發病及其臨床病理學特征和臨床預后關系密切，是影響胰腺癌預后的獨立危險因素。而 TNIK 蛋白在結構上與 HGK 高度同源。結合已有研究，暗示 TNIK 蛋白與胰腺癌也有一定關系。Yu 等[4]研究發現，TNIK 基因拷貝數在少數胃癌組織中顯著增高。這說明 TNIK 分子與胃癌的發生可能有關。也有相關研究[12, 34]表明，TNIK 蛋白的活性在胃癌腫瘤形成中起著重要的作用，而抑制 TNIK 蛋白的表達可以顯著抑制胃癌腫瘤細胞的生長。本研究通過免疫組織化學染色方法及 Western blot 法分別檢測 78 例胃癌組織、距腫瘤邊緣>5 cm 的癌旁組織及胃潰瘍組織中 TNIK 蛋白的表達情況，結果發現，TNIK 蛋白在胃癌組織中的表達水平明顯高于癌旁組織及胃潰瘍組織，而癌旁組織與胃潰瘍組織的 TNIK 蛋白的表達水平卻無明顯差異。上述結果與目前相關研究[35-36]結果一致，這提示 TNIK 蛋白的高表達與胃癌的發生存在一定的關系。進一步對上述 78 例胃癌患者的臨床病理學特征資料進行分析后發現，TNIK 蛋白的表達與患者的性別、腫瘤直徑、病理學類型及術前 CEA 值無明顯關系，但與患者的年齡、腫瘤 TNM 分期、淋巴結轉移及遠處轉移相關，年齡越大、TNM 分期越晚、腫瘤分化程度越低、發生淋巴結及遠處轉移者的 TNIK 蛋白的陽性表達率越高。這提示 TNIK 蛋白不僅與胃癌有一定關系，且有可能參與了胃癌的進展過程，筆者猜測其對胃癌的發展及轉移可能具有某種促進作用。
進一步對上述 78 例胃癌患者進行為隨訪，結果發現，TNIK 蛋白表達陽性的 52 例胃癌患者的中位生存時間為 16.827 個月，而 TNIK 蛋白表達陰性的 26 例胃癌患者的中位生存時間為 28.512 個月。與 TNIK 陰性患者相比，TNIK 陽性胃癌患者的中位生存時間較短，預后較差，差異有統計學意義（P<0.001）。結合上述與臨床病理學特征之間的關系結果，這間接提示，TNIK 蛋白與胃癌的發生發展有著密切的聯系，筆者考慮可能是因為 TNIK 蛋白參與了胃癌的進展過程，對胃癌的發展及轉移可能具有一定的促進作用，因此，相較于 TNIK 蛋白表達陰性的胃癌患者，TNIK 表達陽性者的腫瘤進展更快，生存期更短。需說明的是，本研究 78 例胃癌患者中有少數患者術前合并胃周淋巴結轉移，卻并未合并胰腺、肝臟、盆腔等其他遠處臟器轉移，因此仍可行手術治療，且對本研究結果未造成影響。
綜上所述，本研究結果表明，TNIK 蛋白與胃癌的發生發展具有密切關系，檢測 TNIK 蛋白的表達對預測胃癌的復發與轉移有一定幫助，TNIK 蛋白可能成為胃癌的一個潛在治療靶點。本研究雖病例資料完整，但樣本量較小，因而隨訪患者較少，后續研究仍需更大的樣本數據來驗證該結果。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：劉海潮，負責本課題的試驗設計、試驗操作、標本取材及制作、數據統計等；白明輝、蘇寶威和劉少朋，協助完成相關試驗及數據的收集和整理；蔣珍，負責文章的校對及修改。
倫理聲明：本研究已通過鄭州大學附屬洛陽中心醫院的倫理審核批準（批準文號：201407）。
胃癌是危害人類健康的常見惡性腫瘤之一，全球發病率和死亡率分別排名第 5 位和第 3 位；盡管近年在胃癌的治療方面（包括化療、放療和外科技術）已取得很大的進展，但胃癌患者的存活率仍然很低[1]。胃癌復發與轉移是患者死亡的主要原因，且胃癌的侵襲和轉移是由多個細胞內及細胞外因素共同參與的復雜過程[2]。腫瘤壞死因子受體相關因子-2 和 Nck 相互作用蛋白激酶（Traf-2 and Nck-interacting protein kinase，TNIK）是一種由 TNIK 基因編碼的蛋白激酶，近年來相關研究發現，磷酸化 TNIK 在結直腸癌組織中的表達水平增高，TNIK 基因拷貝數在少數胃癌組織中顯著增高，TNIK 與結直腸癌和胃癌的發病有關[3-4]。本研究通過檢測 TNIK 蛋白在胃癌組織中的表達水平，并與癌旁組織及胃潰瘍組織相對比，進一步分析 TNIK 蛋白與胃癌患者臨床病理學特征的關系及其與生存預后的意義，以期為胃癌的臨床診治提供參考。
1 資料和方法
1.1 病例納入和排除標準
胃癌患者納入標準：① 術前未行放療或化療等其他輔助治療；② 術前未合并其他臟器轉移；③ 患者一般情況良好，能耐受全麻手術；④ 手術可切除，且術后由 2 名經驗豐富的病理科醫師對組織切片進行閱片并同時確診為胃癌。排除標準：① 術前合并其他臟器或淋巴結轉移；② 術前行輔助放療或化療治療；③ 術前一般情況差，不能耐受全麻手術；④ 術前評估無法手術切除或術中探查確認無法手術切除。
胃潰瘍患者納入標準：① 在首次入院時行胃鏡檢查并取組織活檢確診為胃潰瘍；② 未合并癌前病變和（或）癌變；③ 患者一般情況良好，能配合胃鏡檢查；④ 未合并其他腫瘤性疾病。排除標準：① 入院胃鏡檢查提示合并癌前病變和（或）癌變；② 患者基礎體質差，無法耐受胃鏡檢查；③ 合并其他腫瘤性疾病。
1.2 臨床資料
回顧性收集 2014 年 7 月至 2017 年 12 月期間經鄭州大學附屬洛陽中心醫院普通外科行手術切除、病理科確診為胃癌的 78 例患者（胃癌患者術前均未行放療或化療），同時選取患者對應的癌旁組織（距腫瘤邊緣>5 cm）78 例。此外選取同期 42 例胃潰瘍組織一并研究。首先將一部分組織標本立即置于液氮中，–80 ℃ 保存以備 RNA 和蛋白提取用；另一部分組織標本經石蠟包埋，以進行免疫組織化學染色。
78 例胃癌患者中，男 43 例，女 35 例；年齡 54～65 歲、（60±3）歲。42 例胃潰瘍患者中，男 22 例，女 20 例；年齡 52～61 歲、（57±1）歲。胃癌患者和胃潰瘍患者的年齡和性別比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。本研究患者的病歷資料完整，研究獲鄭州大學附屬洛陽中心醫院倫理委員會的批準以及受試對象的知情同意。
1.3 免疫組織化學檢測 TNIK 蛋白的表達及其結果判定
石蠟包塊組織以 4 μm 厚度連續切片，65 ℃ 烤片 45 min，常規脫蠟和水化；切片浸入枸櫞酸緩沖液（pH=8.0）中微波加熱修復 2 min；以 3% H2O2-甲醇氧化并室溫孵育 5 min；加入正常山羊血清封閉液，室溫靜置 15 min，甩去多余液體；加入兔抗人 TNIK 多克隆抗體，室溫孵育 30 min，4 ℃ 過夜；滴加生物素化山羊抗兔 IgG，室溫放置 30 min；室溫下 DAB 顯色 7 min，再行流水沖洗、蘇木精復染、常規梯度乙醇脫水、二甲苯透明和中性樹膠封片。對照設置：以 PBS 溶液替代一抗作為陰性對照。
光鏡（200 倍）下隨機選取 3 個視野，根據細胞的染色強度以及染色廣度（陽性細胞所占百分比）來確定 TNIK 蛋白的表達情況[5]。TNIK 蛋白陽性表達為細胞質染色，呈棕黃色至黃褐色；細胞核表達陰性，呈藍色。染色強度評分：0 分，無色；1 分，淡黃色；2 分，棕黃色；3 分，棕褐色。染色廣度評分：0 分，陽性細胞占比 0～5%；1 分，陽性細胞占比 6%～25%；2 分，陽性細胞占比 26%～50%；3 分，陽性細胞占比 51%～75%；4 分，陽性細胞占比 76%～100%。兩者積分相乘即為陽性評分：0 分為陰性（–），1～4 分為弱陽性（+），5～8 分為陽性（++），9～12 分為強陽性（+++）；陽性包括弱陽性、陽性及強陽性。
1.4 Western blot 法檢測 TNIK 蛋白的表達
分別提取 3 組的組織蛋白，用 Bradford 比色法測定蛋白質濃度，然后分別加入相同的細胞裂解液和緩沖液后放入沸水中 3 min；用考馬斯亮藍法測定蛋白濃度，取 100 μg 樣品上樣，行凝膠電泳、脫脂，并加入一抗，過夜后用 TBST 溶液洗滌，每次 15 min，共 3 次；再加入適量辣根過氧化物酶標記 IgG 二抗，于 37 ℃ 孵育 1 h，TBST 溶液洗滌 3 次，每 15 分鐘換液 1 次；用增強化學發光法（enhanced chemiluminescence，ECL） 試劑盒顯影，底片經掃描儀透掃，對結果進行灰度分析，半定量方法參照文獻 [6] 的方法進行。
1.5 隨訪
上述病例均通過定期來筆者所在醫院科室復查的方法進行隨訪。
1.6 統計學方法
采用 SPSS 17.0 軟件進行統計學處理。生存曲線采用 GraphPad Prism 軟件進行統計學處理。定量資料以均數±標準差（±s）表示，計數資料以百分比（%）表示。定量資料的比較采用配對或成組t 檢驗；計數資料的比較采用配對或成組 χ2 檢驗；生存情況的比較采用 log-rank 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 免疫組織化學檢測結果
胃癌組織、癌旁組織和胃潰瘍組織中，TNIK 蛋白的陽性表達主要位于細胞質中（圖1a–1c），呈棕黃色或黃褐色。胃癌組中，TNIK 蛋白的陽性表達率為 66.67%（52/78），癌旁組織組為 11.54%（9/78），胃潰瘍組為 21.43%（9/42）。胃癌組的 TNIK 蛋白陽性表達率高于癌旁組織組和胃潰瘍組（P<0.05），但癌旁組織組和胃潰瘍組比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1 和表2。
圖1
示胃癌組織、癌旁組織及胃潰瘍組織中 TNIK 蛋白的表達情況（SP ×200）、TNIK 蛋白的電泳結果及其半定量結果，以及不同 TNIK 蛋白表達情況患者的生存曲線
a：胃癌組織中 TNIK 蛋白的表達；b：癌旁組織中 TNIK 蛋白的表達；c：胃潰瘍組織中 TNIK 蛋白的表達；d：TNIK 蛋白的電泳結果；e：TNIK 蛋白的半定量結果；f：TNIK 蛋白表達陽性及陰性胃癌患者的生存曲線
表1
胃癌組織與癌旁組織中 TNIK 蛋白的表達比較（例）
表2
胃癌組/癌旁組織組與胃潰瘍組中 TNIK 蛋白的表達比較（例）
2.2 Western blot 法檢測結果
Western blot 檢測結果提示，在胃癌組中，TNIK 蛋白的表達水平高于胃潰瘍組及癌旁組織組，差異均有統計學意義（t=5.134，P=0.002；t=10.473，P<0.001）；但癌旁組織組與胃潰瘍組比較差異無統計學意義（t=1.026，P=0.772），見圖1d 和圖1e。
2.3 TNIK 蛋白的表達與胃癌臨床病理學特征的關系
TNIK 蛋白的表達與胃癌患者的性別、CEA 值、腫瘤直徑及病理學類型均無關（P>0.05），但與胃癌患者的年齡、腫瘤 TNM 分期 ［國際抗癌聯盟/美國癌癥聯合委員會（UTCC/AJCC）第 8 版］ [7]、分化程度、遠處轉移及淋巴結的轉移密切相關，年齡≥60 歲，腫瘤分期Ⅲ+Ⅳ期、腫瘤分化程度為中低分化者、發生淋巴結及遠處轉移者，TNIK 蛋白的陽性表達率也較高（P<0.05），具體見表3。
表3
胃癌組織中 TNIK 蛋白的表達與胃癌臨床病理學特征的關系（例）
2.4 TNIK 蛋白表達與胃癌患者預后的關系
本組 78 例胃癌患者中，3 例胃癌患者術后 2 年半時因多次無法取得聯系而失訪，隨訪率為 96.2%。截至 2018 年 12 月 1 日，本組胃癌患者的隨訪時間為 9～36 個月，中位數為 22 個月。其中 TNIK 蛋白陽性胃癌患者的中位生存時間為 16.827 個月，TNIK 蛋白陰性胃癌患者為 28.512 個月。log-rank 檢驗結果顯示，與 TNIK 蛋白陰性患者相比，TNIK 蛋白陽性患者的生存情況較差（χ2=20.124，P<0.001），見表4 和圖1f。此外，年齡、TNM 分期、分化程度、遠處轉移和淋巴結轉移也是影響預后的因素（P<0.05），見表4。
表4
log-rank 檢驗分析結果
3 討論
TNIK 蛋白是生發中心激酶家族的成員之一，編碼基因位于 3q26.31，編碼含 1 360 個氨基酸的多肽鏈[10-14]。TNIK 是絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路的上游因子[15-16]。TNIK 蛋白具有諸多功能區域，包括 N 端激酶區域、C 端調節區域及中間同源性低的功能區域。在人體正常細胞中，它的前體 mRNA 通過選擇性剪切和接合，進而產生 8 種剪接體[17-18]，進一步與上游的 Nck、Traf-2 和小 G 蛋白 Rap-2 結合，分子內部構象發生變化，通過自身的磷酸化而激活，此后再激活下游底物，最終廣泛參與機體免疫反應、細胞增殖、分化、細胞周期調控、凋亡等重要過程[19]。研究[20]發現，早期胚胎的發育與腫瘤細胞的增殖、分化等行為存在著諸多相似之處，因此推斷，腫瘤的發生與胚胎發育存在著某種聯系，進而推測，參與胚胎發育的細胞因子都有可能在腫瘤的發生發展過程中發揮著一定作用。TNIK 蛋白最初被認為是參與多種細胞骨架調節和神經樹突延伸的組織激酶，后發現其與人類多種腫瘤的發生發展相關。最近有關報道[17, 21-22]稱，TNIK 蛋白是人類多種腫瘤治療的新靶點。
TNIK 分子廣泛參與了 Wnt/β-catenin、磷脂酰肌醇-3（PI3K）/蛋白激酶 B（Akt）、c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、核因子-κB（NF-kB）等信號通路傳導及轉錄調控，而這些通路已被證實與腫瘤的發生發展密切相關[23-28]。因此，采用特定手段敲除 TNIK 基因后，上述多種細胞內及細胞間的信號轉導通路就會受到影響，進而腫瘤的發生發展過程亦會受到一定影響[29-30]。相關研究[3]發現，磷酸化的 TNIK 蛋白在結直腸癌組織中呈高表達。Takahashi 等[31]研究發現，TNIK 蛋白的高表達是影響結直腸癌患者預后的相關獨立危險因素。Zhang 等[32]的研究顯示，TNIK 蛋白在胰腺癌組織中的表達水平顯著高于癌旁組織，且其表達水平與胰腺癌的 TNM 分期有關，即 TNM 分期越晚，TNIK 蛋白的表達水平越高。Liang 等[33]的研究證實，絲裂原激活蛋白激酶（HGK）與胰腺癌發病及其臨床病理學特征和臨床預后關系密切，是影響胰腺癌預后的獨立危險因素。而 TNIK 蛋白在結構上與 HGK 高度同源。結合已有研究，暗示 TNIK 蛋白與胰腺癌也有一定關系。Yu 等[4]研究發現，TNIK 基因拷貝數在少數胃癌組織中顯著增高。這說明 TNIK 分子與胃癌的發生可能有關。也有相關研究[12, 34]表明，TNIK 蛋白的活性在胃癌腫瘤形成中起著重要的作用，而抑制 TNIK 蛋白的表達可以顯著抑制胃癌腫瘤細胞的生長。本研究通過免疫組織化學染色方法及 Western blot 法分別檢測 78 例胃癌組織、距腫瘤邊緣>5 cm 的癌旁組織及胃潰瘍組織中 TNIK 蛋白的表達情況，結果發現，TNIK 蛋白在胃癌組織中的表達水平明顯高于癌旁組織及胃潰瘍組織，而癌旁組織與胃潰瘍組織的 TNIK 蛋白的表達水平卻無明顯差異。上述結果與目前相關研究[35-36]結果一致，這提示 TNIK 蛋白的高表達與胃癌的發生存在一定的關系。進一步對上述 78 例胃癌患者的臨床病理學特征資料進行分析后發現，TNIK 蛋白的表達與患者的性別、腫瘤直徑、病理學類型及術前 CEA 值無明顯關系，但與患者的年齡、腫瘤 TNM 分期、淋巴結轉移及遠處轉移相關，年齡越大、TNM 分期越晚、腫瘤分化程度越低、發生淋巴結及遠處轉移者的 TNIK 蛋白的陽性表達率越高。這提示 TNIK 蛋白不僅與胃癌有一定關系，且有可能參與了胃癌的進展過程，筆者猜測其對胃癌的發展及轉移可能具有某種促進作用。
進一步對上述 78 例胃癌患者進行為隨訪，結果發現，TNIK 蛋白表達陽性的 52 例胃癌患者的中位生存時間為 16.827 個月，而 TNIK 蛋白表達陰性的 26 例胃癌患者的中位生存時間為 28.512 個月。與 TNIK 陰性患者相比，TNIK 陽性胃癌患者的中位生存時間較短，預后較差，差異有統計學意義（P<0.001）。結合上述與臨床病理學特征之間的關系結果，這間接提示，TNIK 蛋白與胃癌的發生發展有著密切的聯系，筆者考慮可能是因為 TNIK 蛋白參與了胃癌的進展過程，對胃癌的發展及轉移可能具有一定的促進作用，因此，相較于 TNIK 蛋白表達陰性的胃癌患者，TNIK 表達陽性者的腫瘤進展更快，生存期更短。需說明的是，本研究 78 例胃癌患者中有少數患者術前合并胃周淋巴結轉移，卻并未合并胰腺、肝臟、盆腔等其他遠處臟器轉移，因此仍可行手術治療，且對本研究結果未造成影響。
綜上所述，本研究結果表明，TNIK 蛋白與胃癌的發生發展具有密切關系，檢測 TNIK 蛋白的表達對預測胃癌的復發與轉移有一定幫助，TNIK 蛋白可能成為胃癌的一個潛在治療靶點。本研究雖病例資料完整，但樣本量較小，因而隨訪患者較少，后續研究仍需更大的樣本數據來驗證該結果。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：劉海潮，負責本課題的試驗設計、試驗操作、標本取材及制作、數據統計等；白明輝、蘇寶威和劉少朋，協助完成相關試驗及數據的收集和整理；蔣珍，負責文章的校對及修改。
倫理聲明：本研究已通過鄭州大學附屬洛陽中心醫院的倫理審核批準（批準文號：201407）。
