引用本文： 王藝, 趙雪峰. 結直腸癌組織中HOXB7分子的表達及其臨床意義. 中國普外基礎與臨床雜志, 2019, 26(6): 673-677. doi: 10.7507/1007-9424.201902044 復制
結直腸癌（colorectal cancer，CRC）是當前全球上威脅人類健康的主要惡性腫瘤之一，現階段我國的 CRC 發病率呈增加趨勢，其發病率和病死率位居惡性腫瘤的前 5 位[1-2]。因此，尋找 CRC 的特異性的早期診斷及生物學靶點，對于提高 CRC 的治療效果、延長生存時間以及改善生存質量有著重要的意義[3]。近年的研究[4-6]證實，同源異型盒 B7（HOXB7）蛋白參與諸多惡性腫瘤的增殖、凋亡、轉移等過程，且在肺癌、肝癌及 CRC 組織中 HOXB7 蛋白呈高表達，并且其表達與預后密切相關。還有一些研究[7-8]證實，HOXB7 蛋白在 CRC 組織中表達上調，其高表達與患者的一些臨床病理因素和預后相關。但筆者團隊在進展期 CRC 的肝、肺轉移研究過程中，驚奇地發現，HOXB7 蛋白的表達程度不同于諸多前人的研究結果，且其腫瘤細胞的主要表達部位不在細胞質，而在細胞核中。為進一步證實 CRC 組織中 HOXB7 蛋白的表達量與預后的相關性，本研究采用 RT-PCR 法和免疫組織化學染色法檢測了 HOXB7 mRNA 及其蛋白在 CRC 組織中的表達，并分析其表達與臨床病理特征和患者生存的關系，以闡明 HOXB7 分子在 CRC 中的臨床意義。
1 資料與方法
1.1 病例納入和排除標準
納入所有結直腸癌患者，病例排除標準為：① 新輔助放化療患者；② 同時性癌（synchronous cancer）患者；③ 合并其他惡性腫瘤患者；④ 合并嚴重心肺疾病患者；⑤ 隨訪失聯患者；⑥ 不同意簽署知情同意書患者。
1.2 臨床資料
前瞻性收集 2018 年 1 月至 2018 年 3 月期間于大連大學附屬新華醫院普通外科行 CRC 手術患者的新鮮組織，包括 6 例結直腸癌旁組織（ACRM 組織，取材部位為手術切緣附近，離腫瘤組織以遠5 cm）和 6 例 CRC 組織標本（同一患者），所有標本取材后保存在液氮中，采用 RT-PCR 法檢測組織中 HOXB7 mRNA 的表達。
回顧性收集 2012 年 1 月至 2013 年 12 月期間于大連大學附屬新華醫院普通外科行 CRC 手術的 98 例 CRC 組織標本以及其中 30 例 ACRM 組織標本，所有病例均來自大連大學附屬新華醫院 CRC 數據庫，且均具有完整的隨訪資料（隨訪截至 2018 年 12 月 31 日）。采用免疫組織化學染色法檢測組織中 HOXB7 蛋白的表達。98 例 CRC 患者的年齡為 21～85 歲，中位年齡為 64 歲，其中≤64 歲 58 例；男 62 例，女 36 例；直腸癌 41 例，結腸癌 57 例；腫瘤直徑 1.0～10.9 cm，中位數為 4.3 cm，其中≤4.3 cm 56 例；腫瘤浸潤深度：T1～2 期 25 例，T3～4 期 73 例；淋巴結轉移：N0 期 56 例，N1～2 期 42 例；遠處轉移：M0 期 82 例，M1 期 16 例；TNM 分期：Ⅰ期 22 例，Ⅱ期 33 例，Ⅲ期 27 例，Ⅳ期 16 例。所有患者均已被告知入組，已簽署知情同意書，且研究方案經大連大學附屬新華醫院倫理委員會審核通過。
1.3 主要試劑
TRIzol 裂解液購自美國 Sigma 公司，反轉錄試劑盒購自日本 Takara 公司，PCR 引物由上海生物工程技術服務公司合成，HOXB7 免疫組織化學染色抗體（編號：ab196007）購自美國 Abcam 公司，二抗及免疫組織化學染色相關試劑盒購自日本 Takara 公司。
1.4 方法
1.4.1 RT-PCR 法
采用 TRIzol 一步法提取總 RNA。按反轉錄試劑盒兩步法合成 cDNA，逐步進行 PCR 擴增，收集的 PCR 產物用于瓊脂糖凝膠電泳，并利用凝膠成像系統進行拍照，再利用 Quantityone 4.2.0 軟件進行光密度掃描分析。反應條件：95 ℃ 2 min，55 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，30 個循環后 72 ℃ 延伸 5 min，4 ℃ 保存。反應體系見試劑盒說明書。HOXB7 基因的上下游引物：5′-TCGG-CTTCAGCCCTGTCTT-3′（上游），5′-AGAGT-AACTTCCGGATCTA-3′（下游），擴增產物長度為 129 bp；磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）基因的上下游引物：5′-ATCACTGCCACCCAGA-AGACT-3′（上游），5′-CTGTTGAAGTCAGAGGAGACCAC-3′（下游），擴增產物長度為 156 bp。HOXB7 mRNA 表達的半定量分析以 GAPDH 為內參照，HOXB7 mRNA 的表達水平=（HOXB7 基因條帶光密度值×面積）/（GAPDH 條帶光密度值×面積）[9]。
1.4.2 免疫組織化學染色法及評估標準
4 μm 厚度的石蠟標本切片后，由經脫蠟、抗原修復（pH=9.0）、一抗孵育（HOXB7 工作濃度 1∶100，4 ℃過夜）、二抗孵育（the polink-1 polymer HRP second antibody，常溫 1 h）、顯色（DAB 工作時間 10 s）及封片步驟，并在顯微鏡下觀察染色效果。腫瘤細胞染色陽性比例評分的評估標準：0 分（染色陽性比例≤5%），1 分（染色陽性比例為 6%～25%），2 分（染色陽性比例為 26%～50%），3 分（染色陽性比例>51%）；腫瘤細胞染色強度評分的評估標準：0 分（未染色），1 分（輕度染色，黃色），2 分（中度染色，棕黃色），3 分（重度染色，棕色）。按免疫反應積分法（腫瘤細胞染色陽性比例分值×腫瘤細胞染色強度分值）進行評分，免疫反應積分≥6 分判定為 HOXB7 蛋白表達呈陽性，≤4 判定為 HOXB7 蛋白表達呈陰性[10]。
1.4.3 觀察指標
① CRC 組織與 ACRM 組織中 HOXB7 mRNA 及其蛋白的表達；② CRC 組織中 HOXB7 蛋白表達與臨床病理學特征的關系；③ HOXB7 蛋白表達與生存預后的關系。
1.5 統計學方法
利用 SPSS 20.0 軟件包進行數據分析，HOXB7 蛋白的表達與臨床病理特征間的關系分析采用 Pearson χ2檢驗；生存曲線繪制采用 Kaplan-Meier 法，生存曲線比較采用 log-rank 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 HOXB7 mRNA 及其蛋白在 CRC 組織中的表達
RT-PCR 法檢測結果表明，CRC 組織中 HOXB7 mRNA 的表達水平高于 ACRM 組織，其差異有統計學意義（t=–2.444，P=0.003），見圖 1a 和 1b。免疫組織化學染色檢測結果顯示，HOXB7 蛋白的表達主要位于組織細胞的細胞核，HOXB7 蛋白的陽性表達呈棕黃色或棕色。CRC 組織中 HOXB7 蛋白表達陽性 39 例，陰性 59 例；ACRM 組織中 HOXB7 蛋白表達陽性 2 例，陰性 28 例，CRC 組織中 HOXB7 蛋白的表達陽性率高于 ACRM 組織（χ2=1.579，P=0.001），見圖 1c 和圖 1d。
圖1
示 ACRM 組織和 CRC 組織中 HOXB7 mRNA 及其蛋白的表達
a：HOXB7 mRNA 的 RT-PCR 電泳結果，N 代表 ACRM 組織，T 代表 CRC 組織，數字代表患者編號；b：HOXB7 mRNA 的量化比值結果；c：HOXB7 蛋白在 CRC 組織中呈陰性表達（SP ×200）；d：HOXB7 蛋白在 CRC 組織中呈陽性表達（SP ×200）；e：不同 HOXB7 蛋白表達狀態 CRC 患者的生存曲線
2.2 CRC 組織中 HOXB7 蛋白的表達與臨床病理學特征的相關性分析
HOXB7 蛋白的陽性表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及 TNM 分期密切相關（P<0.05），T3～4 期和 N1～2 期患者的 HOXB7 蛋白的表達陽性率相應高于 T1～2 期和 N0 期患者，且隨 TNM 分期增加，HOXB7 蛋白的表達陽性率增加；但 HOXB7 蛋白的表達與年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤直徑及遠處轉移均無關（P>0.05），見表 1。
表1
CRC 組織中 HOXB7 蛋白表達與 CRC 臨床病理特征間的關系 ［例（%） ］
2.3 HOXB7 蛋白表達對 CRC 患者生存的影響
至 2018 年 12 月 31 日，98 例 CRC 患者的隨訪時間為 2.2～63.6 個月，隨訪時間的中位數為 51.8 個月，隨訪期間復發轉移死亡 23 例。其中 HOXB7 蛋白表達陽性組的隨訪時間為 5.2～60.1 個月，隨訪時間的中位數為 53.4 個月，隨訪期間死亡 9 例（復發轉移死亡 8 例，其他疾病或意外死亡 1 例）；而 HOXB7 蛋白表達陰性組的隨訪時間為 2.2～63.6 個月，隨訪時間的中位數為 51.0 個月，隨訪期間死亡 14 例（復發轉移死亡 11 例，其他疾病或意外死亡 3 例）。生存分析結果顯示，HOXB7 蛋白陽性表達組患者的生存情況與陰性表達組比較差異無統計學意義（P=0.865），見圖 1e。
3 討論
由于學者對 CRC 浸潤和轉移機制研究的逐漸完善，且對 CRC 發生發展信號通路的不斷揭示，將 CRC 理論研究提升到了一定的高度，且顯著改善了 CRC 的治療效果[11-13]。但在實際臨床工作中，還時常遇到同一病理類型、同一臨床分期或同一治療方案的 CRC 患者有不同的預后和轉歸[14]。究其原因是，CRC 復發或遠處轉移具有較強的特異性，而其特性在 CRC 早期演變階段就已被決定[15-16]。因此，構建標準的 CRC 分子分型的早期診斷及預后判定體系仍是目前研究的重點。
HOX 基因的初期基礎研究發現，其作用機制只限制于調控胚胎發育期的細胞增殖與分化，而后期基礎研究逐漸發現，HOX 基因在惡性腫瘤中呈異常表達，且積極參與腫瘤的發展或預后[17-19]。HOXB7 基因的相關研究已明確：HOXB7 基因在胚胎生殖細胞中主控細胞增殖、分化及遷移，而在成體細胞中與上皮細胞間質轉化相關，且在惡性腫瘤細胞中主控癌細胞的增殖、侵襲、遷移、凋亡等[20]。近期研究[21]證實，在 CRC 中，通過阻斷 HOXB7-RNAi 表達，抑制 Notch1 信號通路，可降低癌細胞的惡性增殖，并誘導癌細胞凋亡。筆者所在研究中心的研究成果[22]表明：HOXB7 基因可促使裸鼠結腸癌肺轉移模型的轉移形成，且可作為結腸癌肺轉移的優良評價指標；HOXB7 基因的加入可反饋結腸癌肺轉移的模擬演變過程，且可成為理想的實驗小動物模型。筆者所在研究中心即將發表的成果有：HOXB7 基因敲減可有效抑制裸鼠模型的結腸癌肝轉移瘤形成，至于具體的抑癌模式和量化標準的制定有待于進一步考證。已有更多的研究[23-24]發現，HOXB7 蛋白在 CRC 組織中的表達上調，其高表達與 CRC 患者的臨床病理因素和預后密切相關。本研究結果顯示，CRC 組織中 HOXB7 mRNA 及其蛋白的表達高于 ACRM 組織，并隨臨床分期的增長 HOXB7 蛋白的表達陽性率呈逐漸升高趨勢，提示 HOXB7 可作為 CRC 進展的新型生物學標志物。此外，HOXB7 蛋白的陽性表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及 TNM 分期密切相關，但與遠處轉移無相關，提示 HOXB7 蛋白可能未參與 CRC 的遠處轉移過程。此外，生存分析結果顯示，HOXB7 蛋白陽性表達組的生存情況與陰性表達組相比差異不大，提示 HOXB7 蛋白作為影響 CRC 患者預后的獨立危險因素也不確切。
本研究結果與前人研究結果的不同之處在于：① HOXB7 蛋白表達主要位于組織細胞的細胞核，而不是細胞質；② HOXB7 蛋白的陽性表達與 CRC 患者的遠處轉移無相關；③ HOXB7 蛋白的陽性表達與 CRC 患者的預后無相關。在本研究結果中，HOXB7 蛋白的表達作為判斷 CRC 患者的預后標志物的觀點不明朗，有必要再考證或完善 CRC 相關 HOXB7 信號通路。
目前比較受認同的 CRC 相關 HOXB7 分子生物學機制研究發現，HOXB7 與 β-Catenin 及 Wnt 信號通路有著密切的關系[25-26]。HOXB7 mRNA 可以通過結合 β-Catenin，促進 β-Catenin 進入細胞核，定位于 TCF4/LEFl 啟動子區域，對增殖、侵襲及遷移相關基因進行調控，從而激活經典的 Wnt 信號通路，影響 CRC 細胞的增殖、侵襲、遷移及轉移能力[27-28]。希望有更多的新方法和新思路研究為 CRC 相關的 HOXB7 分子生物學機制提供理論依據。
綜上所述，HOXB7 蛋白表達可以作為評估 CRC 進展的新型的生物學指標，至于 HOXB7 蛋白表達對于 CRC 的預后評估價值，仍有待研究進一步考證。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：王藝，涉及實驗的具體操作及實施，并撰寫論文；趙雪峰，基金項目負責人，負責實驗設計、數據統計、整理及論文撰寫。
結直腸癌（colorectal cancer，CRC）是當前全球上威脅人類健康的主要惡性腫瘤之一，現階段我國的 CRC 發病率呈增加趨勢，其發病率和病死率位居惡性腫瘤的前 5 位[1-2]。因此，尋找 CRC 的特異性的早期診斷及生物學靶點，對于提高 CRC 的治療效果、延長生存時間以及改善生存質量有著重要的意義[3]。近年的研究[4-6]證實，同源異型盒 B7（HOXB7）蛋白參與諸多惡性腫瘤的增殖、凋亡、轉移等過程，且在肺癌、肝癌及 CRC 組織中 HOXB7 蛋白呈高表達，并且其表達與預后密切相關。還有一些研究[7-8]證實，HOXB7 蛋白在 CRC 組織中表達上調，其高表達與患者的一些臨床病理因素和預后相關。但筆者團隊在進展期 CRC 的肝、肺轉移研究過程中，驚奇地發現，HOXB7 蛋白的表達程度不同于諸多前人的研究結果，且其腫瘤細胞的主要表達部位不在細胞質，而在細胞核中。為進一步證實 CRC 組織中 HOXB7 蛋白的表達量與預后的相關性，本研究采用 RT-PCR 法和免疫組織化學染色法檢測了 HOXB7 mRNA 及其蛋白在 CRC 組織中的表達，并分析其表達與臨床病理特征和患者生存的關系，以闡明 HOXB7 分子在 CRC 中的臨床意義。
1 資料與方法
1.1 病例納入和排除標準
納入所有結直腸癌患者，病例排除標準為：① 新輔助放化療患者；② 同時性癌（synchronous cancer）患者；③ 合并其他惡性腫瘤患者；④ 合并嚴重心肺疾病患者；⑤ 隨訪失聯患者；⑥ 不同意簽署知情同意書患者。
1.2 臨床資料
前瞻性收集 2018 年 1 月至 2018 年 3 月期間于大連大學附屬新華醫院普通外科行 CRC 手術患者的新鮮組織，包括 6 例結直腸癌旁組織（ACRM 組織，取材部位為手術切緣附近，離腫瘤組織以遠5 cm）和 6 例 CRC 組織標本（同一患者），所有標本取材后保存在液氮中，采用 RT-PCR 法檢測組織中 HOXB7 mRNA 的表達。
回顧性收集 2012 年 1 月至 2013 年 12 月期間于大連大學附屬新華醫院普通外科行 CRC 手術的 98 例 CRC 組織標本以及其中 30 例 ACRM 組織標本，所有病例均來自大連大學附屬新華醫院 CRC 數據庫，且均具有完整的隨訪資料（隨訪截至 2018 年 12 月 31 日）。采用免疫組織化學染色法檢測組織中 HOXB7 蛋白的表達。98 例 CRC 患者的年齡為 21～85 歲，中位年齡為 64 歲，其中≤64 歲 58 例；男 62 例，女 36 例；直腸癌 41 例，結腸癌 57 例；腫瘤直徑 1.0～10.9 cm，中位數為 4.3 cm，其中≤4.3 cm 56 例；腫瘤浸潤深度：T1～2 期 25 例，T3～4 期 73 例；淋巴結轉移：N0 期 56 例，N1～2 期 42 例；遠處轉移：M0 期 82 例，M1 期 16 例；TNM 分期：Ⅰ期 22 例，Ⅱ期 33 例，Ⅲ期 27 例，Ⅳ期 16 例。所有患者均已被告知入組，已簽署知情同意書，且研究方案經大連大學附屬新華醫院倫理委員會審核通過。
1.3 主要試劑
TRIzol 裂解液購自美國 Sigma 公司，反轉錄試劑盒購自日本 Takara 公司，PCR 引物由上海生物工程技術服務公司合成，HOXB7 免疫組織化學染色抗體（編號：ab196007）購自美國 Abcam 公司，二抗及免疫組織化學染色相關試劑盒購自日本 Takara 公司。
1.4 方法
1.4.1 RT-PCR 法
采用 TRIzol 一步法提取總 RNA。按反轉錄試劑盒兩步法合成 cDNA，逐步進行 PCR 擴增，收集的 PCR 產物用于瓊脂糖凝膠電泳，并利用凝膠成像系統進行拍照，再利用 Quantityone 4.2.0 軟件進行光密度掃描分析。反應條件：95 ℃ 2 min，55 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，30 個循環后 72 ℃ 延伸 5 min，4 ℃ 保存。反應體系見試劑盒說明書。HOXB7 基因的上下游引物：5′-TCGG-CTTCAGCCCTGTCTT-3′（上游），5′-AGAGT-AACTTCCGGATCTA-3′（下游），擴增產物長度為 129 bp；磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）基因的上下游引物：5′-ATCACTGCCACCCAGA-AGACT-3′（上游），5′-CTGTTGAAGTCAGAGGAGACCAC-3′（下游），擴增產物長度為 156 bp。HOXB7 mRNA 表達的半定量分析以 GAPDH 為內參照，HOXB7 mRNA 的表達水平=（HOXB7 基因條帶光密度值×面積）/（GAPDH 條帶光密度值×面積）[9]。
1.4.2 免疫組織化學染色法及評估標準
4 μm 厚度的石蠟標本切片后，由經脫蠟、抗原修復（pH=9.0）、一抗孵育（HOXB7 工作濃度 1∶100，4 ℃過夜）、二抗孵育（the polink-1 polymer HRP second antibody，常溫 1 h）、顯色（DAB 工作時間 10 s）及封片步驟，并在顯微鏡下觀察染色效果。腫瘤細胞染色陽性比例評分的評估標準：0 分（染色陽性比例≤5%），1 分（染色陽性比例為 6%～25%），2 分（染色陽性比例為 26%～50%），3 分（染色陽性比例>51%）；腫瘤細胞染色強度評分的評估標準：0 分（未染色），1 分（輕度染色，黃色），2 分（中度染色，棕黃色），3 分（重度染色，棕色）。按免疫反應積分法（腫瘤細胞染色陽性比例分值×腫瘤細胞染色強度分值）進行評分，免疫反應積分≥6 分判定為 HOXB7 蛋白表達呈陽性，≤4 判定為 HOXB7 蛋白表達呈陰性[10]。
1.4.3 觀察指標
① CRC 組織與 ACRM 組織中 HOXB7 mRNA 及其蛋白的表達；② CRC 組織中 HOXB7 蛋白表達與臨床病理學特征的關系；③ HOXB7 蛋白表達與生存預后的關系。
1.5 統計學方法
利用 SPSS 20.0 軟件包進行數據分析，HOXB7 蛋白的表達與臨床病理特征間的關系分析采用 Pearson χ2檢驗；生存曲線繪制采用 Kaplan-Meier 法，生存曲線比較采用 log-rank 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 HOXB7 mRNA 及其蛋白在 CRC 組織中的表達
RT-PCR 法檢測結果表明，CRC 組織中 HOXB7 mRNA 的表達水平高于 ACRM 組織，其差異有統計學意義（t=–2.444，P=0.003），見圖 1a 和 1b。免疫組織化學染色檢測結果顯示，HOXB7 蛋白的表達主要位于組織細胞的細胞核，HOXB7 蛋白的陽性表達呈棕黃色或棕色。CRC 組織中 HOXB7 蛋白表達陽性 39 例，陰性 59 例；ACRM 組織中 HOXB7 蛋白表達陽性 2 例，陰性 28 例，CRC 組織中 HOXB7 蛋白的表達陽性率高于 ACRM 組織（χ2=1.579，P=0.001），見圖 1c 和圖 1d。
圖1
示 ACRM 組織和 CRC 組織中 HOXB7 mRNA 及其蛋白的表達
a：HOXB7 mRNA 的 RT-PCR 電泳結果，N 代表 ACRM 組織，T 代表 CRC 組織，數字代表患者編號；b：HOXB7 mRNA 的量化比值結果；c：HOXB7 蛋白在 CRC 組織中呈陰性表達（SP ×200）；d：HOXB7 蛋白在 CRC 組織中呈陽性表達（SP ×200）；e：不同 HOXB7 蛋白表達狀態 CRC 患者的生存曲線
2.2 CRC 組織中 HOXB7 蛋白的表達與臨床病理學特征的相關性分析
HOXB7 蛋白的陽性表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及 TNM 分期密切相關（P<0.05），T3～4 期和 N1～2 期患者的 HOXB7 蛋白的表達陽性率相應高于 T1～2 期和 N0 期患者，且隨 TNM 分期增加，HOXB7 蛋白的表達陽性率增加；但 HOXB7 蛋白的表達與年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤直徑及遠處轉移均無關（P>0.05），見表 1。
表1
CRC 組織中 HOXB7 蛋白表達與 CRC 臨床病理特征間的關系 ［例（%） ］
2.3 HOXB7 蛋白表達對 CRC 患者生存的影響
至 2018 年 12 月 31 日，98 例 CRC 患者的隨訪時間為 2.2～63.6 個月，隨訪時間的中位數為 51.8 個月，隨訪期間復發轉移死亡 23 例。其中 HOXB7 蛋白表達陽性組的隨訪時間為 5.2～60.1 個月，隨訪時間的中位數為 53.4 個月，隨訪期間死亡 9 例（復發轉移死亡 8 例，其他疾病或意外死亡 1 例）；而 HOXB7 蛋白表達陰性組的隨訪時間為 2.2～63.6 個月，隨訪時間的中位數為 51.0 個月，隨訪期間死亡 14 例（復發轉移死亡 11 例，其他疾病或意外死亡 3 例）。生存分析結果顯示，HOXB7 蛋白陽性表達組患者的生存情況與陰性表達組比較差異無統計學意義（P=0.865），見圖 1e。
3 討論
由于學者對 CRC 浸潤和轉移機制研究的逐漸完善，且對 CRC 發生發展信號通路的不斷揭示，將 CRC 理論研究提升到了一定的高度，且顯著改善了 CRC 的治療效果[11-13]。但在實際臨床工作中，還時常遇到同一病理類型、同一臨床分期或同一治療方案的 CRC 患者有不同的預后和轉歸[14]。究其原因是，CRC 復發或遠處轉移具有較強的特異性，而其特性在 CRC 早期演變階段就已被決定[15-16]。因此，構建標準的 CRC 分子分型的早期診斷及預后判定體系仍是目前研究的重點。
HOX 基因的初期基礎研究發現，其作用機制只限制于調控胚胎發育期的細胞增殖與分化，而后期基礎研究逐漸發現，HOX 基因在惡性腫瘤中呈異常表達，且積極參與腫瘤的發展或預后[17-19]。HOXB7 基因的相關研究已明確：HOXB7 基因在胚胎生殖細胞中主控細胞增殖、分化及遷移，而在成體細胞中與上皮細胞間質轉化相關，且在惡性腫瘤細胞中主控癌細胞的增殖、侵襲、遷移、凋亡等[20]。近期研究[21]證實，在 CRC 中，通過阻斷 HOXB7-RNAi 表達，抑制 Notch1 信號通路，可降低癌細胞的惡性增殖，并誘導癌細胞凋亡。筆者所在研究中心的研究成果[22]表明：HOXB7 基因可促使裸鼠結腸癌肺轉移模型的轉移形成，且可作為結腸癌肺轉移的優良評價指標；HOXB7 基因的加入可反饋結腸癌肺轉移的模擬演變過程，且可成為理想的實驗小動物模型。筆者所在研究中心即將發表的成果有：HOXB7 基因敲減可有效抑制裸鼠模型的結腸癌肝轉移瘤形成，至于具體的抑癌模式和量化標準的制定有待于進一步考證。已有更多的研究[23-24]發現，HOXB7 蛋白在 CRC 組織中的表達上調，其高表達與 CRC 患者的臨床病理因素和預后密切相關。本研究結果顯示，CRC 組織中 HOXB7 mRNA 及其蛋白的表達高于 ACRM 組織，并隨臨床分期的增長 HOXB7 蛋白的表達陽性率呈逐漸升高趨勢，提示 HOXB7 可作為 CRC 進展的新型生物學標志物。此外，HOXB7 蛋白的陽性表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及 TNM 分期密切相關，但與遠處轉移無相關，提示 HOXB7 蛋白可能未參與 CRC 的遠處轉移過程。此外，生存分析結果顯示，HOXB7 蛋白陽性表達組的生存情況與陰性表達組相比差異不大，提示 HOXB7 蛋白作為影響 CRC 患者預后的獨立危險因素也不確切。
本研究結果與前人研究結果的不同之處在于：① HOXB7 蛋白表達主要位于組織細胞的細胞核，而不是細胞質；② HOXB7 蛋白的陽性表達與 CRC 患者的遠處轉移無相關；③ HOXB7 蛋白的陽性表達與 CRC 患者的預后無相關。在本研究結果中，HOXB7 蛋白的表達作為判斷 CRC 患者的預后標志物的觀點不明朗，有必要再考證或完善 CRC 相關 HOXB7 信號通路。
目前比較受認同的 CRC 相關 HOXB7 分子生物學機制研究發現，HOXB7 與 β-Catenin 及 Wnt 信號通路有著密切的關系[25-26]。HOXB7 mRNA 可以通過結合 β-Catenin，促進 β-Catenin 進入細胞核，定位于 TCF4/LEFl 啟動子區域，對增殖、侵襲及遷移相關基因進行調控，從而激活經典的 Wnt 信號通路，影響 CRC 細胞的增殖、侵襲、遷移及轉移能力[27-28]。希望有更多的新方法和新思路研究為 CRC 相關的 HOXB7 分子生物學機制提供理論依據。
綜上所述，HOXB7 蛋白表達可以作為評估 CRC 進展的新型的生物學指標，至于 HOXB7 蛋白表達對于 CRC 的預后評估價值，仍有待研究進一步考證。
重要聲明
利益沖突聲明：本文全體作者閱讀并理解了《中國普外基礎與臨床雜志》的政策聲明，我們沒有相互競爭的利益。
作者貢獻聲明：王藝，涉及實驗的具體操作及實施，并撰寫論文；趙雪峰，基金項目負責人，負責實驗設計、數據統計、整理及論文撰寫。
