引用本文： 牛榮, 王轉兄, 白悅, 趙文濤, 呼永華, 田一虹, 李海龍. miR-143-3p 在胃癌組織中的表達和臨床意義研究以及生信分析. 中國普外基礎與臨床雜志, 2019, 26(5): 538-544. doi: 10.7507/1007-9424.201901023 復制
胃癌是全球高發的惡性腫瘤之一，據 2015 年我國國家癌癥中心統計，胃癌在我國惡性腫瘤死亡率排名第 3 位[1]。近年來，microRNAs（miRNAs）作為腫瘤標志物，參與胃癌的發生發展、侵襲轉移及化療抵抗，受到學術界越來越多的關注。有報道[2-7]指出，胃癌組織中 miR-143 的表達低于癌旁組織，并且與眾多臨床病理特征如腫瘤大小、分化程度、有無淋巴結轉移及 TNM 分期密切相關[4]。但在這些研究中，不同作者所報道的臨床病理學特征并不一致，并且其臨床意義研究結論也不完全一致；另外，該基因在不同分化程度的胃癌細胞中的表達情況研究欠缺，以至于其調控靶點和參與調控的信號通路方面缺少系統研究。因此，本研究將對 miR-143-3p 在胃癌細胞和胃癌組織中的表達情況進行檢測，并進行臨床意義分析和生物信息學研究，以明確其表達和意義，為胃癌分子標志物研究提供實驗依據。
1 材料與方法
1.1 主要材料和設備
1.1.1 細胞株
包括正常胃黏膜上皮細胞 GES-1 和不同分化程度的胃癌細胞（SGC-7901、MKN-45、MGC-803、BGC-823 及 HGC-27），購自中科院上海細胞庫、北京協和腫瘤研究所細胞庫和上海和元生物公司。
1.1.2 試劑和儀器
胎牛血清 FBS（四季青，杭州天杭生物公司），RNA 裂解液 RNAiso Plus（大連寶生物公司），miRNA 逆轉錄試劑盒（All-in-OneTM miRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit）、內參 U6 引物（引物序列編號：HmiRQP9001）、miR-143-3p 特異引物（引物序列編號：HmiRQP0188）和通用引物均購自廣州復能基因公司。儀器包括超微量分光光度計（P100+，Pultton 公司）和實時定量 PCR 儀（LightCycler 9600，羅氏公司）。
1.2 組織樣本
回顧性收集 2009 年 10 月至 2010 年 4 月期間來自于甘肅省腫瘤醫院接受手術治療的 58 例胃癌患者作為研究對象。手術后獲取胃癌及其周圍癌組織（距離癌灶 5 cm 以遠，且經 HE 染色證實均無癌細胞）進行實驗研究，其中癌組織和對應癌旁組織均為 58 例。術中取材后將組織樣本立即放入液氮中保存并轉入–80 ℃ 條件下長期保存。腫瘤 TNM 分期以國際癌癥聯合會/美國癌癥聯合委員會 ［International Union against Cancer（UICC）/Amerian Joint Committee on Cancer（AJCC）］ TNM 病理分期第八版[8]為標準。以上患者均保存有完整的臨床資料，包括姓名、性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、分化程度、浸潤深度、TNM 分期、淋巴結轉移等。58 例患者中，男 33 例，女 25 例，男女比例為 1.3∶1.0；年齡在 35～76 歲之間，中位年齡為 56 歲。所有患者術前均未接受過放、化療。
1.3 方法
1.3.1 細胞培養
用含 10% 胎牛血清 FBS 的高糖 DMEM，加入青霉素（100 U/mL）和鏈霉素（100 U/mL），在 37 ℃、5% CO2 的細胞培養箱中常規培養 GES-1 細胞和 5 種胃癌細胞 ［包括 SGC-7901（中分化）、MKN-45（中分化）、MGC-803（低分化）、BGC-823（低分化）和 HGC-27（未分化）細胞］。每隔 2～3 天換完全培養基，待細胞密度達 90% 左右時按 1∶2 比例傳代。待所有細胞增殖至對數生長期，用 PBS 緩沖液洗滌，收集細胞用于下一步實驗。
1.3.2 實時熒光定量 PCR 檢測
采用熒光定量 PCR 檢測 miR-143-3p 的表達。采用 RNAiso Plus 試劑從培養的 GES-1 和 5 種胃癌細胞、胃癌組織和癌旁組織樣本中提取總 RNA，而后進行加尾反應和逆轉錄反應，反應條件如下：37 ℃ 60 min，85 ℃ 5 s。而后進行 PCR 反應，條件：預變性 95 ℃ 10 s，變性 95 ℃ 10 s，退火 60 ℃ 20 s，40 個循環。擴增反應結束后分析溶解曲線，判斷擴增產物是否存在非特異性擴增；分析擴增曲線，計算 Ct 值，以 U6 作為內參基因。釆用 2–ΔΔCt法計算 miR-143-3p 的相對表達量，其相對表達量計算以癌旁組織中的表達量為 1，觀察在胃癌組織與癌旁組織間的表達差異倍數。實驗重復 3 次，計算平均值。
1.3.3 基于生物信息學分析 miR-143-3p 在胃癌組織中的表達
基于 OncomiR 生物信息學數據庫（http://www.oncomir.org/）和 YM500 生物信息學數據庫（http://ngs.ym.edu.tw/ym500v2/index.php）分析 miR-143-3p 和 miR-143-5p 在胃癌組織及癌旁組織中的表達。
1.3.4 miRNA 靶基因預測和靶基因富集信號通路分析
對 miR-143-3p 的靶基因預測和分析，使用 miRecords 網站中集成的 DIANAmT、Micro- Inspector、miRanda、MirTarget2、miTarget、NBmiRTar、PicTar、PITA、RNA22、RNAhybrid 及 Targetscan 軟件進行靶基因預測，選取至少 3 個軟件支持的靶基因進行信號通路分析。對所檢索到的靶基因使用 DAVID 6.7 軟件進行 KEGG Pathway 信號通路富集分析，富集聚類分析采用 Fisher 檢驗，方法同文獻 [7， 9]。
1.4 統計學方法
應用 SPSS 17.0 統計軟件處理數據。將胃癌組織與相對應癌旁組織間的表達差異倍數轉換為差異表達頻數制作頻數圖，其制作參照文獻 [9-10] 的方法。計數資料采用成組 χ2 檢驗；計量資料 2 組間比較采用配對 t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（兩兩比較采用 LSD 法）。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 不同分化程度胃癌細胞中 miR-143-3p 的表達
實驗結果表明：相對于正常胃黏膜上皮細胞 GES-1，miR-143-3p 在不同分化程度的胃癌細胞包括 SGC-7901（中分化）、MKN-45（中分化）、MGC-803（低分化）、BGC-823（低分化）和 HGC-27（未分化）細胞中的表達均明顯下調（P<0.001），見圖 1a–1g。
圖1
示 miR-143-3p 在正常胃黏膜上皮細胞和 5 種類型胃癌細胞中的表達以及在胃癌組織及其癌旁組織中的表達
a：GES-1 細胞（×100）；b：MGC-803 細胞（×100）；c：BGC-803 細胞（×100）；d：HGC-27 細胞（×100）；e：MKN-45 細胞（×100）；f：SGC-7901 細胞（×100）；g：6 種細胞中 miR-143-3p 的表達水平，與 GES-1 細胞比較，*
2.2 胃癌組織和癌旁組織中 miR-143-3p 的表達
實時熒光定量 PCR 檢測結果表明：相對于癌旁組織，miR-143-3p 在胃癌組織中的表達有 36 例下調，18 例上調，4 例變化不明顯（圖 1h 和圖 1i）。臨床病理特征分析發現，miR-143-3p 在胃癌組織中的表達與淋巴結轉移（P=0.003）和浸潤深度有關（P=0.034），而與年齡、性別、組織學分級、淋巴管侵犯、血管侵犯、Borrmann 分型和 TNM 分期均沒有相關性（P>0.05），見表 1。
表1
胃癌組織中 miR-143-3p 表達與其臨床病理學特征的關系（例）
2.3 基于生信數據庫進行 miR-143-3p 在胃癌中的表達分析
經 OncomiR 數據庫和 YM500 數據庫檢索發現，miR-143-3p 和 miR-143-5p 在胃癌組織中的表達顯著低于癌旁組織（P<0.05），具體見圖 2。
圖2
示基于 OncomiR 和 YM500 數據庫分析的 miR-143-3p 和 miR-143-5p 在胃癌組織和癌旁組織中的表達
a: OncomiR 數據庫miR-143-3p的表達；b：OncomiR 數據庫 miR-143-5p的表達；c：YM500 數據庫miR-143-3p的表達；d：YM500 數據庫miR-143-5p的表達；相對于癌旁組織，miR-143-3p 和 miR-143-5p 在胃癌組織中的表達顯著下調
2.4 miR-143-3p 的靶基因預測和生物信息學分析
本研究選取 3 個軟件支持的靶基因進行信號通路分析，共檢索到 3 225 個 miRNAs 的預測靶基因。生物信息學研究發現，miR-143-3p 的預測靶基因富集在 94 個信號通路中，其中與腫瘤有密切關系的有 38 個，具體見表 2。
表2
miR-143 的靶基因富集信號通路分析結果
3 討論
人類 miR-143（MI0000459）位于人類染色體 5q32。miR-143-3p（MIMAT0000435）和 miR-143-5p（MIMAT0004599）是其剪切成熟體，miR-143-3p 的序列為 UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC。相關研究表明：miR-143 在胃癌[2-6，11]、乳腺癌[12]、膽囊癌[13]、骨肉瘤[14-15]、卵巢癌[16]以及黑色素瘤[17]組織中的表達明顯下調，并且通過過表達實驗研究[2-13]發現，在上述腫瘤細胞中上調 miR-143 的表達，可以抑制腫瘤細胞的增殖、遷移以及侵襲，甚至促進腫瘤細胞的凋亡。
眾多研究[2-3, 5-6, 11]均指出，miR-143-3p 在胃癌中的表達量低于癌旁組織；miR-143 表達與胃癌腫瘤大小、TNM 分期、淋巴結轉移及復發密切相關。邢曉芳等[5]報道，miR-143-3p 在胃癌旁組織中的表達量低于胃癌組織，并且其下調表達與侵襲轉移有關；Huang 等[18]報道，miR-143-3p 在胃癌旁組織中的表達量低于胃癌組織，且淋巴結組織中的表達量低于原發灶。Obermannova 等[2]報道，miR-143-3p 表達下調與胃癌惡性程度分級具有相關性；Jiang 等[3]報道，采用多元 logistic 回歸模型探索了以 4 種循環 miRNAs（miR-501-3p、miR-143-3p、miR-451a 和 miR-146a）預測淋巴結侵襲轉移的準確性，其曲線下面積為 0.891 ［95% CI 為（0.840，0.930）］，具有較高的預測精度。Guo 等[6]報道，miR-143 在胃癌組織中的表達與胃癌浸潤深度和淋巴結轉移相關。本研究發現，miR-143-3p 在胃癌組織中的表達量明顯低于其癌旁組織；臨床病理特征分析發現，miR-143-3p 在胃癌組織中的表達與腫瘤的淋巴結轉移以及浸潤深度具有臨床相關性，而與患者的年齡、性別、腫瘤 TNM 分期、組織學分級、淋巴管侵犯、血管侵犯以及 Borrmann 分型均沒有相關性。本組患者資料來自甘肅省胃癌高發地區，樣本具有一定的代表性[19]，且本研究結果與其他文獻報道的結果[2-6，11]一致。因此，miR-143-3p 是與胃癌臨床病理特征有明顯相關性的低表達抑癌基因，值得進一步深入探討其功能。
在胃癌細胞的實驗研究中，過表達 miR-143 可抑制胃癌細胞增殖并抑制侵襲轉移[20-22]，誘導細胞周期阻滯于 G0/G1 期[23]，此外 miR-143 可部分通過靶向胰島素樣生長因子 1 受體（IGF1R）和 B 細胞淋巴瘤2（BCL2）參與人胃癌細胞株對順鉑的耐藥[24]。通過這些實驗說明，miR-143 參與調控胃癌眾多的生物學行為。通過生物信息學預測、蛋白印跡實驗和熒光素酶報告實驗證實，miR-143-3p 調控腫瘤細胞生物學行為的能力，是通過靶向調控 MAPK7[14]、FOSL2[15]、ERK5[17]、MYO6[20]、DNMT3A[21]、COX-2[22]、GATA6[23]、Bcl-2[24]及 KRAS[25]基因的表達來實現的。
本研究的生物信息學研究發現，miR-143-3p 的預測靶基因富集在 94 個信號通路中，其中與腫瘤有密切關系的有 38 個。因此，從預測靶基因的功能和富集信號通路分析看，miR-143-3p 與腫瘤表型關系密切，參與了 PI3K-Akt、mTOR、ErbB、HIF-1、Ras、AMPK、TGF-β、Hippo、Wnt、p53、ECM-受體相互作用、VEGF、趨化因子、Jak-STAT、MAPK 及 Toll 樣受體信號通路。這些通路都是與腫瘤生物學行為如增殖、侵襲轉移、細胞周期、耐藥等密切相關的信號通路，這與前述的關于細胞周期和耐藥實驗的研究結論具有一致性[22-24]。生物信息學分析 miR-143-3p 靶向調控的信號通路可以為深入研究其機制提供重要指導方向，深入闡明 miR-143 對這些通路的調控有助于理解其參與胃癌發生發展的分子機制。
綜上所述，本研究通過實驗發現，miR-143-3p 是胃癌中表達下調的抑癌基因，臨床病理學特征分析和生物信息學分析結果均提示，miR-143-3p 是胃癌發病和進展中具有價值的分子標志物，具備深入研究的潛在價值。另外，本組資料結果顯示，胃癌組織中 miR-143-3p 表達下調與臨床病理特征即淋巴結侵襲轉移以及浸潤深度有關，與其他文獻[2]報道并不完全一致。其差異或與臨床樣本的選擇造成的偏倚有關，有待未來通過循證醫學的方法進一步科學評價其價值。
胃癌是全球高發的惡性腫瘤之一，據 2015 年我國國家癌癥中心統計，胃癌在我國惡性腫瘤死亡率排名第 3 位[1]。近年來，microRNAs（miRNAs）作為腫瘤標志物，參與胃癌的發生發展、侵襲轉移及化療抵抗，受到學術界越來越多的關注。有報道[2-7]指出，胃癌組織中 miR-143 的表達低于癌旁組織，并且與眾多臨床病理特征如腫瘤大小、分化程度、有無淋巴結轉移及 TNM 分期密切相關[4]。但在這些研究中，不同作者所報道的臨床病理學特征并不一致，并且其臨床意義研究結論也不完全一致；另外，該基因在不同分化程度的胃癌細胞中的表達情況研究欠缺，以至于其調控靶點和參與調控的信號通路方面缺少系統研究。因此，本研究將對 miR-143-3p 在胃癌細胞和胃癌組織中的表達情況進行檢測，并進行臨床意義分析和生物信息學研究，以明確其表達和意義，為胃癌分子標志物研究提供實驗依據。
1 材料與方法
1.1 主要材料和設備
1.1.1 細胞株
包括正常胃黏膜上皮細胞 GES-1 和不同分化程度的胃癌細胞（SGC-7901、MKN-45、MGC-803、BGC-823 及 HGC-27），購自中科院上海細胞庫、北京協和腫瘤研究所細胞庫和上海和元生物公司。
1.1.2 試劑和儀器
胎牛血清 FBS（四季青，杭州天杭生物公司），RNA 裂解液 RNAiso Plus（大連寶生物公司），miRNA 逆轉錄試劑盒（All-in-OneTM miRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit）、內參 U6 引物（引物序列編號：HmiRQP9001）、miR-143-3p 特異引物（引物序列編號：HmiRQP0188）和通用引物均購自廣州復能基因公司。儀器包括超微量分光光度計（P100+，Pultton 公司）和實時定量 PCR 儀（LightCycler 9600，羅氏公司）。
1.2 組織樣本
回顧性收集 2009 年 10 月至 2010 年 4 月期間來自于甘肅省腫瘤醫院接受手術治療的 58 例胃癌患者作為研究對象。手術后獲取胃癌及其周圍癌組織（距離癌灶 5 cm 以遠，且經 HE 染色證實均無癌細胞）進行實驗研究，其中癌組織和對應癌旁組織均為 58 例。術中取材后將組織樣本立即放入液氮中保存并轉入–80 ℃ 條件下長期保存。腫瘤 TNM 分期以國際癌癥聯合會/美國癌癥聯合委員會 ［International Union against Cancer（UICC）/Amerian Joint Committee on Cancer（AJCC）］ TNM 病理分期第八版[8]為標準。以上患者均保存有完整的臨床資料，包括姓名、性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、分化程度、浸潤深度、TNM 分期、淋巴結轉移等。58 例患者中，男 33 例，女 25 例，男女比例為 1.3∶1.0；年齡在 35～76 歲之間，中位年齡為 56 歲。所有患者術前均未接受過放、化療。
1.3 方法
1.3.1 細胞培養
用含 10% 胎牛血清 FBS 的高糖 DMEM，加入青霉素（100 U/mL）和鏈霉素（100 U/mL），在 37 ℃、5% CO2 的細胞培養箱中常規培養 GES-1 細胞和 5 種胃癌細胞 ［包括 SGC-7901（中分化）、MKN-45（中分化）、MGC-803（低分化）、BGC-823（低分化）和 HGC-27（未分化）細胞］。每隔 2～3 天換完全培養基，待細胞密度達 90% 左右時按 1∶2 比例傳代。待所有細胞增殖至對數生長期，用 PBS 緩沖液洗滌，收集細胞用于下一步實驗。
1.3.2 實時熒光定量 PCR 檢測
采用熒光定量 PCR 檢測 miR-143-3p 的表達。采用 RNAiso Plus 試劑從培養的 GES-1 和 5 種胃癌細胞、胃癌組織和癌旁組織樣本中提取總 RNA，而后進行加尾反應和逆轉錄反應，反應條件如下：37 ℃ 60 min，85 ℃ 5 s。而后進行 PCR 反應，條件：預變性 95 ℃ 10 s，變性 95 ℃ 10 s，退火 60 ℃ 20 s，40 個循環。擴增反應結束后分析溶解曲線，判斷擴增產物是否存在非特異性擴增；分析擴增曲線，計算 Ct 值，以 U6 作為內參基因。釆用 2–ΔΔCt法計算 miR-143-3p 的相對表達量，其相對表達量計算以癌旁組織中的表達量為 1，觀察在胃癌組織與癌旁組織間的表達差異倍數。實驗重復 3 次，計算平均值。
1.3.3 基于生物信息學分析 miR-143-3p 在胃癌組織中的表達
基于 OncomiR 生物信息學數據庫（http://www.oncomir.org/）和 YM500 生物信息學數據庫（http://ngs.ym.edu.tw/ym500v2/index.php）分析 miR-143-3p 和 miR-143-5p 在胃癌組織及癌旁組織中的表達。
1.3.4 miRNA 靶基因預測和靶基因富集信號通路分析
對 miR-143-3p 的靶基因預測和分析，使用 miRecords 網站中集成的 DIANAmT、Micro- Inspector、miRanda、MirTarget2、miTarget、NBmiRTar、PicTar、PITA、RNA22、RNAhybrid 及 Targetscan 軟件進行靶基因預測，選取至少 3 個軟件支持的靶基因進行信號通路分析。對所檢索到的靶基因使用 DAVID 6.7 軟件進行 KEGG Pathway 信號通路富集分析，富集聚類分析采用 Fisher 檢驗，方法同文獻 [7， 9]。
1.4 統計學方法
應用 SPSS 17.0 統計軟件處理數據。將胃癌組織與相對應癌旁組織間的表達差異倍數轉換為差異表達頻數制作頻數圖，其制作參照文獻 [9-10] 的方法。計數資料采用成組 χ2 檢驗；計量資料 2 組間比較采用配對 t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（兩兩比較采用 LSD 法）。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 不同分化程度胃癌細胞中 miR-143-3p 的表達
實驗結果表明：相對于正常胃黏膜上皮細胞 GES-1，miR-143-3p 在不同分化程度的胃癌細胞包括 SGC-7901（中分化）、MKN-45（中分化）、MGC-803（低分化）、BGC-823（低分化）和 HGC-27（未分化）細胞中的表達均明顯下調（P<0.001），見圖 1a–1g。
圖1
示 miR-143-3p 在正常胃黏膜上皮細胞和 5 種類型胃癌細胞中的表達以及在胃癌組織及其癌旁組織中的表達
a：GES-1 細胞（×100）；b：MGC-803 細胞（×100）；c：BGC-803 細胞（×100）；d：HGC-27 細胞（×100）；e：MKN-45 細胞（×100）；f：SGC-7901 細胞（×100）；g：6 種細胞中 miR-143-3p 的表達水平，與 GES-1 細胞比較，*
2.2 胃癌組織和癌旁組織中 miR-143-3p 的表達
實時熒光定量 PCR 檢測結果表明：相對于癌旁組織，miR-143-3p 在胃癌組織中的表達有 36 例下調，18 例上調，4 例變化不明顯（圖 1h 和圖 1i）。臨床病理特征分析發現，miR-143-3p 在胃癌組織中的表達與淋巴結轉移（P=0.003）和浸潤深度有關（P=0.034），而與年齡、性別、組織學分級、淋巴管侵犯、血管侵犯、Borrmann 分型和 TNM 分期均沒有相關性（P>0.05），見表 1。
表1
胃癌組織中 miR-143-3p 表達與其臨床病理學特征的關系（例）
2.3 基于生信數據庫進行 miR-143-3p 在胃癌中的表達分析
經 OncomiR 數據庫和 YM500 數據庫檢索發現，miR-143-3p 和 miR-143-5p 在胃癌組織中的表達顯著低于癌旁組織（P<0.05），具體見圖 2。
圖2
示基于 OncomiR 和 YM500 數據庫分析的 miR-143-3p 和 miR-143-5p 在胃癌組織和癌旁組織中的表達
a: OncomiR 數據庫miR-143-3p的表達；b：OncomiR 數據庫 miR-143-5p的表達；c：YM500 數據庫miR-143-3p的表達；d：YM500 數據庫miR-143-5p的表達；相對于癌旁組織，miR-143-3p 和 miR-143-5p 在胃癌組織中的表達顯著下調
2.4 miR-143-3p 的靶基因預測和生物信息學分析
本研究選取 3 個軟件支持的靶基因進行信號通路分析，共檢索到 3 225 個 miRNAs 的預測靶基因。生物信息學研究發現，miR-143-3p 的預測靶基因富集在 94 個信號通路中，其中與腫瘤有密切關系的有 38 個，具體見表 2。
表2
miR-143 的靶基因富集信號通路分析結果
3 討論
人類 miR-143（MI0000459）位于人類染色體 5q32。miR-143-3p（MIMAT0000435）和 miR-143-5p（MIMAT0004599）是其剪切成熟體，miR-143-3p 的序列為 UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC。相關研究表明：miR-143 在胃癌[2-6，11]、乳腺癌[12]、膽囊癌[13]、骨肉瘤[14-15]、卵巢癌[16]以及黑色素瘤[17]組織中的表達明顯下調，并且通過過表達實驗研究[2-13]發現，在上述腫瘤細胞中上調 miR-143 的表達，可以抑制腫瘤細胞的增殖、遷移以及侵襲，甚至促進腫瘤細胞的凋亡。
眾多研究[2-3, 5-6, 11]均指出，miR-143-3p 在胃癌中的表達量低于癌旁組織；miR-143 表達與胃癌腫瘤大小、TNM 分期、淋巴結轉移及復發密切相關。邢曉芳等[5]報道，miR-143-3p 在胃癌旁組織中的表達量低于胃癌組織，并且其下調表達與侵襲轉移有關；Huang 等[18]報道，miR-143-3p 在胃癌旁組織中的表達量低于胃癌組織，且淋巴結組織中的表達量低于原發灶。Obermannova 等[2]報道，miR-143-3p 表達下調與胃癌惡性程度分級具有相關性；Jiang 等[3]報道，采用多元 logistic 回歸模型探索了以 4 種循環 miRNAs（miR-501-3p、miR-143-3p、miR-451a 和 miR-146a）預測淋巴結侵襲轉移的準確性，其曲線下面積為 0.891 ［95% CI 為（0.840，0.930）］，具有較高的預測精度。Guo 等[6]報道，miR-143 在胃癌組織中的表達與胃癌浸潤深度和淋巴結轉移相關。本研究發現，miR-143-3p 在胃癌組織中的表達量明顯低于其癌旁組織；臨床病理特征分析發現，miR-143-3p 在胃癌組織中的表達與腫瘤的淋巴結轉移以及浸潤深度具有臨床相關性，而與患者的年齡、性別、腫瘤 TNM 分期、組織學分級、淋巴管侵犯、血管侵犯以及 Borrmann 分型均沒有相關性。本組患者資料來自甘肅省胃癌高發地區，樣本具有一定的代表性[19]，且本研究結果與其他文獻報道的結果[2-6，11]一致。因此，miR-143-3p 是與胃癌臨床病理特征有明顯相關性的低表達抑癌基因，值得進一步深入探討其功能。
在胃癌細胞的實驗研究中，過表達 miR-143 可抑制胃癌細胞增殖并抑制侵襲轉移[20-22]，誘導細胞周期阻滯于 G0/G1 期[23]，此外 miR-143 可部分通過靶向胰島素樣生長因子 1 受體（IGF1R）和 B 細胞淋巴瘤2（BCL2）參與人胃癌細胞株對順鉑的耐藥[24]。通過這些實驗說明，miR-143 參與調控胃癌眾多的生物學行為。通過生物信息學預測、蛋白印跡實驗和熒光素酶報告實驗證實，miR-143-3p 調控腫瘤細胞生物學行為的能力，是通過靶向調控 MAPK7[14]、FOSL2[15]、ERK5[17]、MYO6[20]、DNMT3A[21]、COX-2[22]、GATA6[23]、Bcl-2[24]及 KRAS[25]基因的表達來實現的。
本研究的生物信息學研究發現，miR-143-3p 的預測靶基因富集在 94 個信號通路中，其中與腫瘤有密切關系的有 38 個。因此，從預測靶基因的功能和富集信號通路分析看，miR-143-3p 與腫瘤表型關系密切，參與了 PI3K-Akt、mTOR、ErbB、HIF-1、Ras、AMPK、TGF-β、Hippo、Wnt、p53、ECM-受體相互作用、VEGF、趨化因子、Jak-STAT、MAPK 及 Toll 樣受體信號通路。這些通路都是與腫瘤生物學行為如增殖、侵襲轉移、細胞周期、耐藥等密切相關的信號通路，這與前述的關于細胞周期和耐藥實驗的研究結論具有一致性[22-24]。生物信息學分析 miR-143-3p 靶向調控的信號通路可以為深入研究其機制提供重要指導方向，深入闡明 miR-143 對這些通路的調控有助于理解其參與胃癌發生發展的分子機制。
綜上所述，本研究通過實驗發現，miR-143-3p 是胃癌中表達下調的抑癌基因，臨床病理學特征分析和生物信息學分析結果均提示，miR-143-3p 是胃癌發病和進展中具有價值的分子標志物，具備深入研究的潛在價值。另外，本組資料結果顯示，胃癌組織中 miR-143-3p 表達下調與臨床病理特征即淋巴結侵襲轉移以及浸潤深度有關，與其他文獻[2]報道并不完全一致。其差異或與臨床樣本的選擇造成的偏倚有關，有待未來通過循證醫學的方法進一步科學評價其價值。
