引用本文： 姚林, 譚望, 楊發才, 向萬平, 肖江衛. 長鏈非編碼 RNA POU6F2-AS2 在人胃癌組織中的表達及臨床意義. 中國普外基礎與臨床雜志, 2019, 26(5): 563-567. doi: 10.7507/1007-9424.201812073 復制
根據統計，2018 年全球有超過 1 000 000 例的新增胃癌患者和大約 783 000 例死于胃癌，胃癌的發病率在所有惡性腫瘤中位于第 5 位，死亡率位于第 3 位，嚴重影響著人類的健康[1]。而中國更是胃癌的高發國家，胃癌是中國人群因惡性腫瘤死亡的第二大病因[2]。由于大多數胃癌患者早期無癥狀[3]，初次診斷時即很多處于進展期，預后往往較差[4]，因此進一步探明胃癌發生、發展、侵襲及轉移的分子機制并尋找新的胃癌標志物對胃癌治療及提高患者生存率有著重大意義。長鏈非編碼 RNA（lncRNA）是一類長度超過 200 個核苷酸、缺乏開放閱讀框的 RNA，越來越多的研究[5-7]表明 lncRNA 在基因表達過程中起著關鍵調控作用。近年來研究[8-12]發現，許多異常表達的 lncRNA 參與到腫瘤發生及發展的各個階段，與腫瘤的增殖、凋亡、侵襲、轉移和不良的預后有著密切的關系。POU6F2-AS2 為基因 POU6F2 的自然反義轉錄本，是 lncRNA 的一種，其是否參與了腫瘤發生及發展過程，本研究對此在胃癌組織中的表達情況以及其與胃癌患者臨床病理特征的關系進行了探討。
1 資料與方法
1.1 病例資料
收集 2017 年 5 月至 2018 年 5 月期間川北醫學院附屬醫院普外科收治的 73 例行胃癌根治手術患者的胃癌組織及其配對的距離癌組織 5 cm 處的癌旁胃黏膜組織標本，術后均經病理檢查證實。73 例胃癌患者中男 62 例，女 11 例；發病年齡 41～78 歲，平均年齡 63 歲，中位年齡 63 歲；腫瘤直徑 1.1～15.0 cm，平均直徑 4.4 cm。TNM 分期根據美國癌癥聯合會（AJCC）2010 年第 7 版胃癌 TNM 分期標準[13-14]，Ⅰ期 7 例，Ⅱ期 19 例，Ⅲ期 43 例，Ⅳ期 4 例。采集標本前均經患者同意并簽署同意書。組織標本取得后立即浸入液氮中迅速降溫，隨后放置于–80 ℃ 冰箱內保存。該研究通過了川北醫學院附屬醫院倫理委員會的審批 ［2018ER（A）010］。
1.2 方法
1.2.1 主要試劑及儀器
RNA 提取試劑 Trizol 購自美國 Invitrogen 公司，cDNA 合成試劑盒購自美國 Promega 公司，實時熒光定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）試劑購自瑞士 Roche 公司。POU6F2-AS2 引物及內參 β-肌動蛋白（β-actin）引物均購自中國上海生工生物工程有限公司。β-actin 上游引物為5′-TCCCTGGAGAAGAGCTACGA-3′，下游引物為 5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′，擴增片段長度為 194 bp；POU6F2-AS2 上游引物為 5′-ACAGCAGTGCCAGAAGGAGT-3′，下游引物為 5′-TTTGCAGACCTGAGCTTGTG-3′，擴增片段長度為 122 bp。
1.2.2 總 RNA 的提取
從–80 ℃ 冰箱中取出組織，剪取 50 mg，用液氮研磨至粉末狀，收集到 1.5 mL 無酶的 EP 管中，加入 1 mL Trizol，靜置 5 min，其余步驟嚴格按說明書進行操作。
1.2.3 RNA 純度測定以及 cDNA 的合成
提取的 RNA 經紫外分光光度計檢測，吸光度（A）260/A280 在 1.9～2.1 視為提取的 RNA 的純度很高，經測定符合實驗要求。cDNA 合成體系：Ribonuclease Inhibitor 1 μL，5×Reaction Buffer 緩沖液 5 μL，dNTPs 1.25 μL，Reverse Transcriptase 1 μL，MgCl2 4 μL，Oligo(dT) 15 primer 1 μL，Random primer 1 μL，無核酸酶的雙蒸水至總體積 25 μL。其余步驟嚴格按照說明書進行操作。
1.2.4 qRT-PCR 法檢測 POU6F2-AS2 的表達水平
采用 20 μL 體系，其中 cDNA 1.5 μL，上游引物 0.4 μL，下游引物 0.4 μL，2×SYBR Green Master Mix 10 μL，無核酸酶的雙蒸水 7.7 μL。PCR 反應條件：95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，70 ℃ 30 s，擴增 45 個循環。以β-actin為內參照。目的基因 Ct 值用內參基因來進行統一標準化（ΔCt=Ct目的基因–Ct內參基因），結果采用 –ΔΔCt=–（ΔCt癌組織–ΔCt癌旁組織平均值）進行基因表達的相對定量分析[15]。將每一例胃癌患者癌組織中 POU6F2-AS2 表達水平與對應癌旁組織進行比較，并將胃癌組織及對應癌旁組織中 POU6F2-AS2 的表達水平通過 log102（ΔΔCt 癌旁組織–ΔΔCt 癌組織）進行轉換，其結果為：2–ΔΔCt癌組織–2–ΔΔCt癌旁組織>0為高表達，2–ΔΔCt癌組織–2–ΔΔCt癌旁組織<0為低表達。
1.3 POU6F2-AS2 表達水平與患者預后的相關性分析
由于本研究收集的 73 例胃癌患者中有 41 例患者隨訪時間不到 1 年，目前無法通過患者實際的生存情況作出科學的生存分析，因此本研究通過 Kaplan Meier Plotter（http://kmplot.com/）數據庫分析胃癌患者中 POU6F2-AS2 的表達水平與患者總體生存率的關系。
1.4 統計學方法
使用 SPSS 20.0 和 GraphPad Prism 7.0 對本研究中的數據進行分析。計量資料采用均數±標準差（
±s）表示并采用 t 檢驗。POU6F2-AS2 表達水平與患者臨床病理特征之間的關系采用卡方檢驗或 Fisher 精確概率計算法（雙側）。采用 Kaplan-Meier 法繪制生存曲線并行 log-rank 檢驗。檢驗水準 α=0.050。
2 結果
2.1 POU6F2-AS2 在胃癌組織中的表達水平
結果見圖 1。胃癌組織中 POU6F2-AS2 相對表達水平明顯高于其對應的癌旁組織，差異有統計學意義（t=2.049，P<0.050），見圖 1a。將每例胃癌患者的胃癌組織中 POU6F2-AS2 的表達水平與其對應的癌旁組織進行比較，在 73 例胃癌組織中，有 43 例胃癌組織中 POU6F2-AS2 的相對表達水平高于其癌旁組織即高表達（43/73，58.9%），有 30 例胃癌組織中 POU6F2-AS2 的相對表達水平低于其癌旁組織即低表達（30/73，41.1%），見圖 1b。
圖1
示本組 73 例患者胃癌組織中 POU6F2-AS2 相對表達水平（a）和每例胃癌患者癌組織與其對應癌旁組織中 POU6F2-AS2 表達情況（b) 以及 Kaplan Meier Plotter 數據庫中胃癌患者癌組織中 POU6F2-AS2 相對表達水平與總體生存率的關系（c）
2.2 POU6F2-AS2 在胃癌組織中的表達與胃癌患者臨床病理特征的關系
POU6F2-AS2 表達高低與胃癌患者臨床病理特征的關系見表 1。從表 1 可見，POU6F2-AS2 高表達與腫瘤浸潤深度（P=0.022）和 TNM 分期（P=0.032）有關，而與胃癌患者的性別、年齡、是否吸煙、是否飲酒、腫瘤直徑、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移、脈管浸潤、神經浸潤、肝臟轉移、有無腹水及脂肪結節是否轉移均無關（P>0.050）。
表1
POU6F2-AS2 表達水平與胃癌患者臨床病理特征的關系
2.3 POU6F2-AS2 的表達與胃癌患者總體生存率的關系
通過 Kaplan Meier Plotter 數據庫數據分析 631 例胃癌患者（其中 POU6F2-AS2 低表達患者 283 例，POU6F2-AS2 高表達患者 348 例）POU6F2-AS2 表達水平與患者總體生存率的關系發現，POU6F2-AS2 高表達組相對于 POU6F2-AS2 低表達組預后更差，差異具有統計學意義（P=0.001），見圖 1c。
3 討論
胃癌嚴重影響著人類健康，雖然近幾年隨著新輔助化療、分子靶向藥物等治療方式的出現，在胃癌的治療方面取得了一定的突破，但胃癌患者的生存率依然很低。胃癌惡性程度高，進展迅速，且早期癥狀不明顯，因此，提高早期診斷率是改善胃癌預后的關鍵[3]。提高胃癌早期診斷率就意味著需要找到一種創傷性小且經濟的早期篩查方式。現階段，由于胃鏡是有創的檢查方式，患者不易接受，而 CT、MRI 等影像學方法由于價格較貴，都不適合作為胃癌的最佳早期篩查方式，所以探索胃癌特異性的腫瘤標志物，找到其最理想的早篩方式，依然是我們目前研究的熱點。
近年來，關于 lncRNA 的研究已經越來越多。lncRNA 可在表觀遺傳水平、轉錄水平和轉錄后水平對基因的表達進行調控，參與到腫瘤的發生、發展過程中[16-18]。大量的研究已經發現，異常表達的 lncRNA 與胃癌發生、發展有著密切聯系，其可能作為胃癌早期診斷和預后評估的生物標志物，如 Zeng 等[19]發現，胃癌中低表達的 lncRNA LINC00675與淋巴結轉移和 TNM 分期顯著相關，LINC00675 可以與波形蛋白相互作用，促進其磷酸化水平，從而發揮抑癌基因的作用，LINC00675 可以作為胃癌診斷和預后的新的腫瘤標志物；Yang 等[20]發現，lncRNA LINC01133 在胃癌組織和細胞中表達下調，低表達的 LINC01133 與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移和 TNM 分期顯著相關且預示著不良的預后，LINC01133 可以作為 ceRNA 吸附 miR-106a-3p 從而調控 APC 基因的表達和 Wnt/β-catenin 信號通路的變化，結果提示，LINC01133 可以作為潛在的提示胃癌不良預后的生物標志物；Zhang 等[21]發現 lncRNA UFC1 在胃癌中高表達，與腫瘤大小、淋巴結轉移和 TNM 分期明顯相關，可以作為胃癌診斷和預后的生物標志物，并為胃癌治療提供潛在的靶點；Zhao 等[22]發現，胃癌患者血漿中高表達的 HOTTIP 與胃癌浸潤深度和 TNM 分期顯著相關，其診斷的特異性和敏感性均高于 CEA 和 CA19-9，可以作為潛在的胃癌早期篩查的理想生物標志物。
POU6F2-AS2 是基因 POU6F2 的自然反義轉錄本，是 lncRNA 的一種，目前尚未發現其在胃癌中表達的相關研究文獻。但 Liu 等[23]研究發現，POU6F2-AS2 在食管癌中通過調控 DNA 的損傷修復來調節食管癌的發生及發展，結果提示，POU6F2-AS2 與腫瘤發生及發展有關。本研究結合本課題組之前做的 lncRNA 芯片發現，POU6F2-AS2 在胃癌組織中較其對應的癌旁組織中明顯增高[24-25]；同時我們再通過比較 73 例胃癌組織及配對的癌旁組織中 POU6F2-AS2 的表達發現，與配對的癌旁組織比較，胃癌組織中 POU6F2-AS2 呈明顯高表達；進一步分析 POU6F2-AS2 的表達與胃癌患者臨床病理特征之間的關系發現，POU6F2-AS2 的表達與患者性別、年齡、吸煙、飲酒、腫瘤直徑、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移、脈管浸潤、神經浸潤、肝臟轉移、腹水、脂肪結節轉移無明顯關系（P>0.050），但與浸潤深度和 TNM 分期有關（P<0.050）。該結果提示， POU6F2-AS2 可能參與了胃癌的發生及發展過程。由于目前 73 例胃癌患者的隨訪時間較短，無法做出科學的生存曲線，因此本研究通過對 Kaplan Meier Plotter 數據庫數據分析發現，POU6F2-AS2 高表達組胃癌患者的生存率與 POU6F2-AS2 低表達組相比更低，預后更差，該結果進一步提示 POU6F2-AS2 可能作為潛在的評估胃癌患者預后的生物標志物。
綜上，POU6F2-AS2 在胃癌組織中高表達，與胃癌的浸潤深度、TNM 分期和預后顯著相關，提示 POU6F2-AS2 可能參與了胃癌的發生及發展，并預示著胃癌的不良預后。雖然 POU6F2-AS2 在胃癌中的調控機制尚不明確且需要進一步探索其分子機制，但是還是有可能作為潛在的胃癌基因診斷和治療的重要靶點以及評估胃癌患者預后的生物標志物。
根據統計，2018 年全球有超過 1 000 000 例的新增胃癌患者和大約 783 000 例死于胃癌，胃癌的發病率在所有惡性腫瘤中位于第 5 位，死亡率位于第 3 位，嚴重影響著人類的健康[1]。而中國更是胃癌的高發國家，胃癌是中國人群因惡性腫瘤死亡的第二大病因[2]。由于大多數胃癌患者早期無癥狀[3]，初次診斷時即很多處于進展期，預后往往較差[4]，因此進一步探明胃癌發生、發展、侵襲及轉移的分子機制并尋找新的胃癌標志物對胃癌治療及提高患者生存率有著重大意義。長鏈非編碼 RNA（lncRNA）是一類長度超過 200 個核苷酸、缺乏開放閱讀框的 RNA，越來越多的研究[5-7]表明 lncRNA 在基因表達過程中起著關鍵調控作用。近年來研究[8-12]發現，許多異常表達的 lncRNA 參與到腫瘤發生及發展的各個階段，與腫瘤的增殖、凋亡、侵襲、轉移和不良的預后有著密切的關系。POU6F2-AS2 為基因 POU6F2 的自然反義轉錄本，是 lncRNA 的一種，其是否參與了腫瘤發生及發展過程，本研究對此在胃癌組織中的表達情況以及其與胃癌患者臨床病理特征的關系進行了探討。
1 資料與方法
1.1 病例資料
收集 2017 年 5 月至 2018 年 5 月期間川北醫學院附屬醫院普外科收治的 73 例行胃癌根治手術患者的胃癌組織及其配對的距離癌組織 5 cm 處的癌旁胃黏膜組織標本，術后均經病理檢查證實。73 例胃癌患者中男 62 例，女 11 例；發病年齡 41～78 歲，平均年齡 63 歲，中位年齡 63 歲；腫瘤直徑 1.1～15.0 cm，平均直徑 4.4 cm。TNM 分期根據美國癌癥聯合會（AJCC）2010 年第 7 版胃癌 TNM 分期標準[13-14]，Ⅰ期 7 例，Ⅱ期 19 例，Ⅲ期 43 例，Ⅳ期 4 例。采集標本前均經患者同意并簽署同意書。組織標本取得后立即浸入液氮中迅速降溫，隨后放置于–80 ℃ 冰箱內保存。該研究通過了川北醫學院附屬醫院倫理委員會的審批 ［2018ER（A）010］。
1.2 方法
1.2.1 主要試劑及儀器
RNA 提取試劑 Trizol 購自美國 Invitrogen 公司，cDNA 合成試劑盒購自美國 Promega 公司，實時熒光定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）試劑購自瑞士 Roche 公司。POU6F2-AS2 引物及內參 β-肌動蛋白（β-actin）引物均購自中國上海生工生物工程有限公司。β-actin 上游引物為5′-TCCCTGGAGAAGAGCTACGA-3′，下游引物為 5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′，擴增片段長度為 194 bp；POU6F2-AS2 上游引物為 5′-ACAGCAGTGCCAGAAGGAGT-3′，下游引物為 5′-TTTGCAGACCTGAGCTTGTG-3′，擴增片段長度為 122 bp。
1.2.2 總 RNA 的提取
從–80 ℃ 冰箱中取出組織，剪取 50 mg，用液氮研磨至粉末狀，收集到 1.5 mL 無酶的 EP 管中，加入 1 mL Trizol，靜置 5 min，其余步驟嚴格按說明書進行操作。
1.2.3 RNA 純度測定以及 cDNA 的合成
提取的 RNA 經紫外分光光度計檢測，吸光度（A）260/A280 在 1.9～2.1 視為提取的 RNA 的純度很高，經測定符合實驗要求。cDNA 合成體系：Ribonuclease Inhibitor 1 μL，5×Reaction Buffer 緩沖液 5 μL，dNTPs 1.25 μL，Reverse Transcriptase 1 μL，MgCl2 4 μL，Oligo(dT) 15 primer 1 μL，Random primer 1 μL，無核酸酶的雙蒸水至總體積 25 μL。其余步驟嚴格按照說明書進行操作。
1.2.4 qRT-PCR 法檢測 POU6F2-AS2 的表達水平
采用 20 μL 體系，其中 cDNA 1.5 μL，上游引物 0.4 μL，下游引物 0.4 μL，2×SYBR Green Master Mix 10 μL，無核酸酶的雙蒸水 7.7 μL。PCR 反應條件：95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，70 ℃ 30 s，擴增 45 個循環。以β-actin為內參照。目的基因 Ct 值用內參基因來進行統一標準化（ΔCt=Ct目的基因–Ct內參基因），結果采用 –ΔΔCt=–（ΔCt癌組織–ΔCt癌旁組織平均值）進行基因表達的相對定量分析[15]。將每一例胃癌患者癌組織中 POU6F2-AS2 表達水平與對應癌旁組織進行比較，并將胃癌組織及對應癌旁組織中 POU6F2-AS2 的表達水平通過 log102（ΔΔCt 癌旁組織–ΔΔCt 癌組織）進行轉換，其結果為：2–ΔΔCt癌組織–2–ΔΔCt癌旁組織>0為高表達，2–ΔΔCt癌組織–2–ΔΔCt癌旁組織<0為低表達。
1.3 POU6F2-AS2 表達水平與患者預后的相關性分析
由于本研究收集的 73 例胃癌患者中有 41 例患者隨訪時間不到 1 年，目前無法通過患者實際的生存情況作出科學的生存分析，因此本研究通過 Kaplan Meier Plotter（http://kmplot.com/）數據庫分析胃癌患者中 POU6F2-AS2 的表達水平與患者總體生存率的關系。
1.4 統計學方法
使用 SPSS 20.0 和 GraphPad Prism 7.0 對本研究中的數據進行分析。計量資料采用均數±標準差（±s）表示并采用 t 檢驗。POU6F2-AS2 表達水平與患者臨床病理特征之間的關系采用卡方檢驗或 Fisher 精確概率計算法（雙側）。采用 Kaplan-Meier 法繪制生存曲線并行 log-rank 檢驗。檢驗水準 α=0.050。
2 結果
2.1 POU6F2-AS2 在胃癌組織中的表達水平
結果見圖 1。胃癌組織中 POU6F2-AS2 相對表達水平明顯高于其對應的癌旁組織，差異有統計學意義（t=2.049，P<0.050），見圖 1a。將每例胃癌患者的胃癌組織中 POU6F2-AS2 的表達水平與其對應的癌旁組織進行比較，在 73 例胃癌組織中，有 43 例胃癌組織中 POU6F2-AS2 的相對表達水平高于其癌旁組織即高表達（43/73，58.9%），有 30 例胃癌組織中 POU6F2-AS2 的相對表達水平低于其癌旁組織即低表達（30/73，41.1%），見圖 1b。
圖1
示本組 73 例患者胃癌組織中 POU6F2-AS2 相對表達水平（a）和每例胃癌患者癌組織與其對應癌旁組織中 POU6F2-AS2 表達情況（b) 以及 Kaplan Meier Plotter 數據庫中胃癌患者癌組織中 POU6F2-AS2 相對表達水平與總體生存率的關系（c）
2.2 POU6F2-AS2 在胃癌組織中的表達與胃癌患者臨床病理特征的關系
POU6F2-AS2 表達高低與胃癌患者臨床病理特征的關系見表 1。從表 1 可見，POU6F2-AS2 高表達與腫瘤浸潤深度（P=0.022）和 TNM 分期（P=0.032）有關，而與胃癌患者的性別、年齡、是否吸煙、是否飲酒、腫瘤直徑、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移、脈管浸潤、神經浸潤、肝臟轉移、有無腹水及脂肪結節是否轉移均無關（P>0.050）。
表1
POU6F2-AS2 表達水平與胃癌患者臨床病理特征的關系
2.3 POU6F2-AS2 的表達與胃癌患者總體生存率的關系
通過 Kaplan Meier Plotter 數據庫數據分析 631 例胃癌患者（其中 POU6F2-AS2 低表達患者 283 例，POU6F2-AS2 高表達患者 348 例）POU6F2-AS2 表達水平與患者總體生存率的關系發現，POU6F2-AS2 高表達組相對于 POU6F2-AS2 低表達組預后更差，差異具有統計學意義（P=0.001），見圖 1c。
3 討論
胃癌嚴重影響著人類健康，雖然近幾年隨著新輔助化療、分子靶向藥物等治療方式的出現，在胃癌的治療方面取得了一定的突破，但胃癌患者的生存率依然很低。胃癌惡性程度高，進展迅速，且早期癥狀不明顯，因此，提高早期診斷率是改善胃癌預后的關鍵[3]。提高胃癌早期診斷率就意味著需要找到一種創傷性小且經濟的早期篩查方式。現階段，由于胃鏡是有創的檢查方式，患者不易接受，而 CT、MRI 等影像學方法由于價格較貴，都不適合作為胃癌的最佳早期篩查方式，所以探索胃癌特異性的腫瘤標志物，找到其最理想的早篩方式，依然是我們目前研究的熱點。
近年來，關于 lncRNA 的研究已經越來越多。lncRNA 可在表觀遺傳水平、轉錄水平和轉錄后水平對基因的表達進行調控，參與到腫瘤的發生、發展過程中[16-18]。大量的研究已經發現，異常表達的 lncRNA 與胃癌發生、發展有著密切聯系，其可能作為胃癌早期診斷和預后評估的生物標志物，如 Zeng 等[19]發現，胃癌中低表達的 lncRNA LINC00675與淋巴結轉移和 TNM 分期顯著相關，LINC00675 可以與波形蛋白相互作用，促進其磷酸化水平，從而發揮抑癌基因的作用，LINC00675 可以作為胃癌診斷和預后的新的腫瘤標志物；Yang 等[20]發現，lncRNA LINC01133 在胃癌組織和細胞中表達下調，低表達的 LINC01133 與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移和 TNM 分期顯著相關且預示著不良的預后，LINC01133 可以作為 ceRNA 吸附 miR-106a-3p 從而調控 APC 基因的表達和 Wnt/β-catenin 信號通路的變化，結果提示，LINC01133 可以作為潛在的提示胃癌不良預后的生物標志物；Zhang 等[21]發現 lncRNA UFC1 在胃癌中高表達，與腫瘤大小、淋巴結轉移和 TNM 分期明顯相關，可以作為胃癌診斷和預后的生物標志物，并為胃癌治療提供潛在的靶點；Zhao 等[22]發現，胃癌患者血漿中高表達的 HOTTIP 與胃癌浸潤深度和 TNM 分期顯著相關，其診斷的特異性和敏感性均高于 CEA 和 CA19-9，可以作為潛在的胃癌早期篩查的理想生物標志物。
POU6F2-AS2 是基因 POU6F2 的自然反義轉錄本，是 lncRNA 的一種，目前尚未發現其在胃癌中表達的相關研究文獻。但 Liu 等[23]研究發現，POU6F2-AS2 在食管癌中通過調控 DNA 的損傷修復來調節食管癌的發生及發展，結果提示，POU6F2-AS2 與腫瘤發生及發展有關。本研究結合本課題組之前做的 lncRNA 芯片發現，POU6F2-AS2 在胃癌組織中較其對應的癌旁組織中明顯增高[24-25]；同時我們再通過比較 73 例胃癌組織及配對的癌旁組織中 POU6F2-AS2 的表達發現，與配對的癌旁組織比較，胃癌組織中 POU6F2-AS2 呈明顯高表達；進一步分析 POU6F2-AS2 的表達與胃癌患者臨床病理特征之間的關系發現，POU6F2-AS2 的表達與患者性別、年齡、吸煙、飲酒、腫瘤直徑、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移、脈管浸潤、神經浸潤、肝臟轉移、腹水、脂肪結節轉移無明顯關系（P>0.050），但與浸潤深度和 TNM 分期有關（P<0.050）。該結果提示， POU6F2-AS2 可能參與了胃癌的發生及發展過程。由于目前 73 例胃癌患者的隨訪時間較短，無法做出科學的生存曲線，因此本研究通過對 Kaplan Meier Plotter 數據庫數據分析發現，POU6F2-AS2 高表達組胃癌患者的生存率與 POU6F2-AS2 低表達組相比更低，預后更差，該結果進一步提示 POU6F2-AS2 可能作為潛在的評估胃癌患者預后的生物標志物。
綜上，POU6F2-AS2 在胃癌組織中高表達，與胃癌的浸潤深度、TNM 分期和預后顯著相關，提示 POU6F2-AS2 可能參與了胃癌的發生及發展，并預示著胃癌的不良預后。雖然 POU6F2-AS2 在胃癌中的調控機制尚不明確且需要進一步探索其分子機制，但是還是有可能作為潛在的胃癌基因診斷和治療的重要靶點以及評估胃癌患者預后的生物標志物。
