引用本文： Nodjimadji Tamlengar Martial, 洪育蒲, 趙亮, 項明偉, 李滿, 陳辰, 王衛星. 栗精胺對重癥急性胰腺炎大鼠腎臟損傷保護作用的研究. 中國普外基礎與臨床雜志, 2017, 24(10): 1200-1205. doi: 10.7507/1007-9424.201703079 復制
重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是臨床上的一種常見的危急重癥，易并發多種胰外臟器損傷。其中急性腎損傷的發病率高達 50%[1]。栗精胺（castanospermine，CS）是一種從豆科植物中提取的生物堿，在器官移植[2]、腦脊髓炎[3]、關節炎[4]、病毒感染[5]等疾病中起到免疫調節及抗炎的作用。目前關于 CS 在 SAP 腎損傷中保護作用的研究極少，故本實驗擬通過建立 SAP 大鼠模型，初步探討 CS 對 SAP 大鼠腎損傷的保護作用及其可能機制。
1 材料與方法
1.1 實驗動物、主要試劑及設備
SPF 級成年雄性 SD 大鼠 24 只，體質量 200～220 g，鼠齡 6～7 周，由湖北省疾病預防控制中心提供，適應性喂養 2～3 d。根據隨機數字表法將實驗大鼠隨機分為假手術組（SO 組）、SAP 組及 CS 干預組（CS 組），每組 8 只。主要試劑包括：牛磺膽酸鈉與 CS 購自美國 Sigma 公司，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）抗體、細胞間黏附分子-1（ICAM-1）抗體與含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）抗體購自美國 Abcam 公司，核因子-κB（NF-κB）抗體購自美國 CST 公司。免疫組織化學 EliVisionTM Super 檢測試劑盒購自福建邁新生物技術開發有限公司。主要設備包括：ADVIA 2400 全自動多功能生化分析儀（西門子公司）和 BX63 光學顯微鏡（奧林巴斯公司）。
1.2 方法
1.2.1 動物模型制備 大鼠術前 12 h 禁食，自由飲水，稱體質量。給予異氟烷氣體麻醉后消毒鋪巾，沿腹正中線切口開腹（切口長 1.5～2.0 cm），尋找十二指腸，暴露胰膽管，經十二指腸大乳頭開口處胰膽管逆行注射 5% 牛磺膽酸鈉生理鹽水溶液（1 mL/kg），以微型無損傷血管夾夾閉胰膽管兩端 5 min 后見胰腺出現水腫、出血，表明模型制備成功。逐層關腹，消毒。SO 組大鼠開腹后僅翻動十二指腸及胰腺后關腹。CS 組在 SAP 建模成功后立即經腹腔注射 CS 生理鹽水溶液（200 mg/kg）。
1.2.2 標本采集 建模后 12 h 再次用異氟烷麻醉大鼠，開腹后經下腔靜脈采血 3 mL，4 ℃ 下離心 10 min（3 000 r/min，r=10 cm），分離血清，分裝后 –20 ℃ 保存備用。取大鼠胰頭及左腎部分組織，經 4% 多聚甲醛固定，常規石蠟包埋。
1.3 檢測指標及方法
1.3.1 大鼠胰腺及腎臟組織的病理學檢查 石蠟切片脫蠟后，行蘇木精-伊紅（HE）染色，在光鏡下觀察大鼠胰腺及腎臟組織的病理學改變。
1.3.2 大鼠血清學指標檢測 應用全自動多功能生化分析儀檢測大鼠血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平，以及淀粉酶（AMY）的活性。
1.3.3 大鼠腎臟組織中 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達檢測 參照參考文獻[6]的方法，選取 3 組大鼠腎臟組織切片，脫蠟后梯度水化，行高溫抗原修復，再滅活內源性過氧化氫酶，給予一抗二抗孵育后行 DAB 顯色，詳細操作均按試劑盒說明書進行。以 PBS 溶液替代一抗作為陰性對照，未設陽性對照。在光學顯微鏡的高倍視野下觀察 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達，以細胞質或細胞核有棕黃色顆粒定義為陽性表達。采用 Image-Pro Plus 6.0 專業圖像分析軟件進行積分光密度值（integrated optical density，IOD）測量，進行半定量分析。
1.4 統計學方法
采用 SPSS 22.0 統計軟件進行分析。計量資料以均數±標準差（
±s）表示，3 組間均數比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用 Tukey’s HSD 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
SAP 組和 CS 組大鼠均建模成功，建模后 12 h 未見大鼠死亡，SO 組也未見大鼠死亡。
2.1 3 組大鼠胰腺和腎臟組織的病理學檢查結果
SO 組大鼠的胰腺和腎臟組織在光鏡下形態正常，組織結構清晰。SAP 組大鼠的胰腺小葉結構被破壞，出現大面積凝固樣壞死、炎性細胞浸潤等改變；SAP 組大鼠的腎臟組織可見淤血及炎性細胞浸潤，腎小管結構模糊，刷狀緣脫落，管腔內可見脫落的上皮細胞及碎片，甚至出現大量管型。CS 組大鼠的胰腺及腎臟組織的各種結構損傷程度較 SAP 組大鼠明顯減輕。詳見圖 1 和圖 2。
圖1
示 3 組大鼠胰腺組織的病理學改變（HE ×200） a：SO 組；b：SAP 組；c：CS 組
圖2
示 3 組大鼠腎臟組織的病理學改變（HE ×200） a：SO 組；b：SAP 組；c：CS 組
2.2 3 組大鼠的血清 Cr 水平、BUN 水平及 AMY 活性比較
與 SO 組比較，SAP 組大鼠的血清 Cr 水平、BUN 水平及 AMY 活性均較高（P<0.05）；CS 組大鼠的 AMY 活性較高（P<0.05），但血清 Cr 水平和 BUN 水平與 SO 組比較差異均無統計學意義（P>0.05）。與 SAP 組比較，CS 組大鼠的血清 Cr 水平、BUN 水平及 AMY 活性均較低（P<0.05）。詳見圖 3。
圖3
示 3 組大鼠的血清 Cr 水平（3a）、BUN 水平（3b）及 AMY 活性（3c）檢測結果
2.3 3 組大鼠腎臟組織中 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達比較
2.3.1 NF-κB 蛋白 NF-κB 蛋白的陽性表達為細胞核呈棕黃色染色。SO 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的表達微弱；SAP 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白呈強陽性表達；CS 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的表達較 SAP 組明顯下調，與 SO 組比較無明顯差異。與 SO 組比較，SAP 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的 IOD 值較高（P<0.05），但 CS 組與 SO 組比較差異無統計學意義（P>0.05）；與 SAP 組比較，CS 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的 IOD 值較低（P<0.05）。詳見圖 4。
圖4
示 3 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的表達 a、b 及 c：SO 組（a）、SAP 組（b）及 CS 組（c）大鼠腎臟組織的免疫組織化學染色結果（二步法 ×200）；d：半定量結果
2.3.2 TNF-α 蛋白 TNF-α 蛋白的陽性表達為細胞質被染成棕黃色。SO 組大鼠的細胞質中 TNF-α 蛋白有少許表達；SAP 組大鼠其 TNF-α 蛋白廣泛表達于細胞質；CS 組大鼠的細胞質中可見少量的 TNF-α 蛋白表達，較 SAP 組明顯下調，但仍強于 SO 組。與 SO 組比較，SAP 組和 CS 組大鼠腎臟組織中 TNF-α 蛋白的 IOD 值較高（P<0.05）；與 SAP 組比較，CS 組大鼠腎臟組織中 TNF-α 蛋白的 IOD 值較低（P<0.05）。詳見圖 5。
圖5
示 3 組大鼠腎臟組織中 TNF-α 蛋白的表達 a、b 及 c：SO 組（a）、SAP 組（b）及 CS 組（c）大鼠腎臟組織的免疫組織化學染色結果（二步法 ×200）；d：半定量結果
2.3.3 ICAM-1 蛋白 ICAM-1 蛋白在腎臟組織中的陽性表達為細胞膜被染成棕黃色。SO 組大鼠的細胞膜上 ICAM-1 蛋白的表達極微弱；SAP 組大鼠的細胞膜上 ICAM-1 蛋白呈強陽性表達；CS 組大鼠的細胞膜上 ICAM-1 蛋白表達較 SAP 組明顯下調，與 SO 組比較無明顯差異。與 SO 組比較，SAP 組大鼠腎臟組織中 ICAM-1 蛋白的 IOD 值較高（P<0.05），但 CS 組和 SO 組比較差異無統計學意義（P>0.05）；與 SAP 組比較，CS 組大鼠腎臟組織中 ICAM-1 蛋白的 IOD 值較低（P<0.05）。詳見圖 6。
圖6
示 3 組大鼠腎臟組織中 ICAM-1 蛋白的表達 a、b 及 c：SO 組（a）、SAP 組（b）及 CS 組（c）大鼠腎臟組織的免疫組織化學染色結果（二步法 ×200）；d：半定量結果
2.3.4 Caspase-3 蛋白 Caspase-3 蛋白在腎臟組織中的陽性表達為細胞質或細胞核被染成棕黃色。SO 組大鼠的細胞質及細胞核內有少許 Caspase-3 蛋白表達；SAP 組大鼠的細胞質及細胞核內 Caspase-3 蛋白廣泛表達；CS 組大鼠的細胞質及細胞核內可見少量 Caspase-3 蛋白表達，較 SAP 組明顯下調，與 SO 組比較無明顯差異。與 SO 組比較，SAP 組大鼠腎臟組織中 Caspase-3 蛋白的 IOD 值較高（P<0.05），但 CS 組和 SO 組比較差異無統計學意義（P<0.05）；與 SAP 組比較，CS 組大鼠腎臟組織中 Caspase-3 蛋白的 IOD 值較低（P<0.05）。詳見圖 7。
圖7
示 3 組大鼠腎臟組織中 Caspase-3 蛋白的表達 a、b 及 c：SO組（a）、SAP組（b）及CS組（c）大鼠腎臟組織的免疫組織化學染色結果（二步法 ×200）；d：半定量結果
3 討論
腎臟是 SAP 時常見的受損器官之一，其急性損傷發生率僅次于肺臟，繼發急性腎衰竭是 SAP 的主要死亡原因之一[7-9]。近年研究表明，CS 具有抑制炎癥反應[10]、調節免疫[11]、抗病毒[12]等作用，具有廣泛的臨床應用前景。為進一步探討 CS 保護 SAP 相關急性腎損傷的機理，本實驗采用 5% 牛磺膽酸鈉逆行胰膽管注射的方法建立 SAP 大鼠模型，建模成功后經腹腔注射 CS，在建模后 12 h 取材檢測大鼠腎臟組織中 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達。實驗結果表明，SAP 組大鼠的胰腺及腎臟出現了明顯的病理損傷，且血清 AMY 活性、Cr 水平及 BUN 水平均較 SO 組升高，與筆者團隊[13-15]的前期研究結果一致，提示 SAP 組大鼠建模成功，SAP 大鼠的腎臟存在功能和結構上的損傷。而 CS 處理后 SAP 大鼠的血清 Cr 及 BUN 水平均降低，胰腺及腎臟的病理損傷得到改善，提示 CS 對 SAP 大鼠胰腺及腎臟損傷均具有保護作用。
TNF-α 在 SAP 發病過程中發揮著促炎和促凋亡作用[16-17]。TNF-α 不僅可以直接作用于腎小管，導致腎小管上皮細胞死亡，還能募集炎性細胞及促進炎性介質釋放[18-19]。ICAM-1 是一種細胞間黏附分子，主要介導多形核粒細胞與血管內皮細胞間的黏附，參與炎性細胞的遷移和浸潤，從而促進 SAP 炎癥反應進展，造成胰外臟器組織損傷[20-21]。NF-κB 是一種具有多向性調節作用的核轉錄因子，在炎性刺激等多種因素下被激活，并在轉錄水平上調節 TNF-α、ICAM-1 等多種細胞趨化因子及黏附分子的表達，從而參與 SAP 腎損傷過程[14, 22-23]。這些炎性介質的表達上調又可以促進 NF-κB 的核轉位與活化，形成一個正反饋的惡性循環過程，從而放大了 SAP 的炎癥效應[24]，進而加重腎損傷，惡化 SAP 病情，影響患者的預后。Caspase-3 蛋白是 Caspase 級聯反應中下游的關鍵效應蛋白酶，在細胞凋亡過程中發揮著重要作用[25-26]。本實驗結果表明，CS 組大鼠腎臟組織中 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達均較 SAP 組下調，表明 CS 可以抑制 NF-κB 的活化，下調下游炎性介質 TNF-α 和黏附分子 ICAM-1 的表達，減少腎臟細胞的凋亡，從而減輕 SAP 大鼠的急性腎損傷。這可能為 CS 用于治療 SAP 合并急性腎損傷提供了理論基礎及實驗依據。
重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）是臨床上的一種常見的危急重癥，易并發多種胰外臟器損傷。其中急性腎損傷的發病率高達 50%[1]。栗精胺（castanospermine，CS）是一種從豆科植物中提取的生物堿，在器官移植[2]、腦脊髓炎[3]、關節炎[4]、病毒感染[5]等疾病中起到免疫調節及抗炎的作用。目前關于 CS 在 SAP 腎損傷中保護作用的研究極少，故本實驗擬通過建立 SAP 大鼠模型，初步探討 CS 對 SAP 大鼠腎損傷的保護作用及其可能機制。
1 材料與方法
1.1 實驗動物、主要試劑及設備
SPF 級成年雄性 SD 大鼠 24 只，體質量 200～220 g，鼠齡 6～7 周，由湖北省疾病預防控制中心提供，適應性喂養 2～3 d。根據隨機數字表法將實驗大鼠隨機分為假手術組（SO 組）、SAP 組及 CS 干預組（CS 組），每組 8 只。主要試劑包括：牛磺膽酸鈉與 CS 購自美國 Sigma 公司，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）抗體、細胞間黏附分子-1（ICAM-1）抗體與含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）抗體購自美國 Abcam 公司，核因子-κB（NF-κB）抗體購自美國 CST 公司。免疫組織化學 EliVisionTM Super 檢測試劑盒購自福建邁新生物技術開發有限公司。主要設備包括：ADVIA 2400 全自動多功能生化分析儀（西門子公司）和 BX63 光學顯微鏡（奧林巴斯公司）。
1.2 方法
1.2.1 動物模型制備 大鼠術前 12 h 禁食，自由飲水，稱體質量。給予異氟烷氣體麻醉后消毒鋪巾，沿腹正中線切口開腹（切口長 1.5～2.0 cm），尋找十二指腸，暴露胰膽管，經十二指腸大乳頭開口處胰膽管逆行注射 5% 牛磺膽酸鈉生理鹽水溶液（1 mL/kg），以微型無損傷血管夾夾閉胰膽管兩端 5 min 后見胰腺出現水腫、出血，表明模型制備成功。逐層關腹，消毒。SO 組大鼠開腹后僅翻動十二指腸及胰腺后關腹。CS 組在 SAP 建模成功后立即經腹腔注射 CS 生理鹽水溶液（200 mg/kg）。
1.2.2 標本采集 建模后 12 h 再次用異氟烷麻醉大鼠，開腹后經下腔靜脈采血 3 mL，4 ℃ 下離心 10 min（3 000 r/min，r=10 cm），分離血清，分裝后 –20 ℃ 保存備用。取大鼠胰頭及左腎部分組織，經 4% 多聚甲醛固定，常規石蠟包埋。
1.3 檢測指標及方法
1.3.1 大鼠胰腺及腎臟組織的病理學檢查 石蠟切片脫蠟后，行蘇木精-伊紅（HE）染色，在光鏡下觀察大鼠胰腺及腎臟組織的病理學改變。
1.3.2 大鼠血清學指標檢測 應用全自動多功能生化分析儀檢測大鼠血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平，以及淀粉酶（AMY）的活性。
1.3.3 大鼠腎臟組織中 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達檢測 參照參考文獻[6]的方法，選取 3 組大鼠腎臟組織切片，脫蠟后梯度水化，行高溫抗原修復，再滅活內源性過氧化氫酶，給予一抗二抗孵育后行 DAB 顯色，詳細操作均按試劑盒說明書進行。以 PBS 溶液替代一抗作為陰性對照，未設陽性對照。在光學顯微鏡的高倍視野下觀察 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達，以細胞質或細胞核有棕黃色顆粒定義為陽性表達。采用 Image-Pro Plus 6.0 專業圖像分析軟件進行積分光密度值（integrated optical density，IOD）測量，進行半定量分析。
1.4 統計學方法
采用 SPSS 22.0 統計軟件進行分析。計量資料以均數±標準差（
±s）表示，3 組間均數比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用 Tukey’s HSD 檢驗。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
SAP 組和 CS 組大鼠均建模成功，建模后 12 h 未見大鼠死亡，SO 組也未見大鼠死亡。
2.1 3 組大鼠胰腺和腎臟組織的病理學檢查結果
SO 組大鼠的胰腺和腎臟組織在光鏡下形態正常，組織結構清晰。SAP 組大鼠的胰腺小葉結構被破壞，出現大面積凝固樣壞死、炎性細胞浸潤等改變；SAP 組大鼠的腎臟組織可見淤血及炎性細胞浸潤，腎小管結構模糊，刷狀緣脫落，管腔內可見脫落的上皮細胞及碎片，甚至出現大量管型。CS 組大鼠的胰腺及腎臟組織的各種結構損傷程度較 SAP 組大鼠明顯減輕。詳見圖 1 和圖 2。
圖1
示 3 組大鼠胰腺組織的病理學改變（HE ×200） a：SO 組；b：SAP 組；c：CS 組
圖2
示 3 組大鼠腎臟組織的病理學改變（HE ×200） a：SO 組；b：SAP 組；c：CS 組
2.2 3 組大鼠的血清 Cr 水平、BUN 水平及 AMY 活性比較
與 SO 組比較，SAP 組大鼠的血清 Cr 水平、BUN 水平及 AMY 活性均較高（P<0.05）；CS 組大鼠的 AMY 活性較高（P<0.05），但血清 Cr 水平和 BUN 水平與 SO 組比較差異均無統計學意義（P>0.05）。與 SAP 組比較，CS 組大鼠的血清 Cr 水平、BUN 水平及 AMY 活性均較低（P<0.05）。詳見圖 3。
圖3
示 3 組大鼠的血清 Cr 水平（3a）、BUN 水平（3b）及 AMY 活性（3c）檢測結果
2.3 3 組大鼠腎臟組織中 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達比較
2.3.1 NF-κB 蛋白 NF-κB 蛋白的陽性表達為細胞核呈棕黃色染色。SO 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的表達微弱；SAP 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白呈強陽性表達；CS 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的表達較 SAP 組明顯下調，與 SO 組比較無明顯差異。與 SO 組比較，SAP 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的 IOD 值較高（P<0.05），但 CS 組與 SO 組比較差異無統計學意義（P>0.05）；與 SAP 組比較，CS 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的 IOD 值較低（P<0.05）。詳見圖 4。
圖4
示 3 組大鼠腎臟組織中 NF-κB 蛋白的表達 a、b 及 c：SO 組（a）、SAP 組（b）及 CS 組（c）大鼠腎臟組織的免疫組織化學染色結果（二步法 ×200）；d：半定量結果
2.3.2 TNF-α 蛋白 TNF-α 蛋白的陽性表達為細胞質被染成棕黃色。SO 組大鼠的細胞質中 TNF-α 蛋白有少許表達；SAP 組大鼠其 TNF-α 蛋白廣泛表達于細胞質；CS 組大鼠的細胞質中可見少量的 TNF-α 蛋白表達，較 SAP 組明顯下調，但仍強于 SO 組。與 SO 組比較，SAP 組和 CS 組大鼠腎臟組織中 TNF-α 蛋白的 IOD 值較高（P<0.05）；與 SAP 組比較，CS 組大鼠腎臟組織中 TNF-α 蛋白的 IOD 值較低（P<0.05）。詳見圖 5。
圖5
示 3 組大鼠腎臟組織中 TNF-α 蛋白的表達 a、b 及 c：SO 組（a）、SAP 組（b）及 CS 組（c）大鼠腎臟組織的免疫組織化學染色結果（二步法 ×200）；d：半定量結果
2.3.3 ICAM-1 蛋白 ICAM-1 蛋白在腎臟組織中的陽性表達為細胞膜被染成棕黃色。SO 組大鼠的細胞膜上 ICAM-1 蛋白的表達極微弱；SAP 組大鼠的細胞膜上 ICAM-1 蛋白呈強陽性表達；CS 組大鼠的細胞膜上 ICAM-1 蛋白表達較 SAP 組明顯下調，與 SO 組比較無明顯差異。與 SO 組比較，SAP 組大鼠腎臟組織中 ICAM-1 蛋白的 IOD 值較高（P<0.05），但 CS 組和 SO 組比較差異無統計學意義（P>0.05）；與 SAP 組比較，CS 組大鼠腎臟組織中 ICAM-1 蛋白的 IOD 值較低（P<0.05）。詳見圖 6。
圖6
示 3 組大鼠腎臟組織中 ICAM-1 蛋白的表達 a、b 及 c：SO 組（a）、SAP 組（b）及 CS 組（c）大鼠腎臟組織的免疫組織化學染色結果（二步法 ×200）；d：半定量結果
2.3.4 Caspase-3 蛋白 Caspase-3 蛋白在腎臟組織中的陽性表達為細胞質或細胞核被染成棕黃色。SO 組大鼠的細胞質及細胞核內有少許 Caspase-3 蛋白表達；SAP 組大鼠的細胞質及細胞核內 Caspase-3 蛋白廣泛表達；CS 組大鼠的細胞質及細胞核內可見少量 Caspase-3 蛋白表達，較 SAP 組明顯下調，與 SO 組比較無明顯差異。與 SO 組比較，SAP 組大鼠腎臟組織中 Caspase-3 蛋白的 IOD 值較高（P<0.05），但 CS 組和 SO 組比較差異無統計學意義（P<0.05）；與 SAP 組比較，CS 組大鼠腎臟組織中 Caspase-3 蛋白的 IOD 值較低（P<0.05）。詳見圖 7。
圖7
示 3 組大鼠腎臟組織中 Caspase-3 蛋白的表達 a、b 及 c：SO組（a）、SAP組（b）及CS組（c）大鼠腎臟組織的免疫組織化學染色結果（二步法 ×200）；d：半定量結果
3 討論
腎臟是 SAP 時常見的受損器官之一，其急性損傷發生率僅次于肺臟，繼發急性腎衰竭是 SAP 的主要死亡原因之一[7-9]。近年研究表明，CS 具有抑制炎癥反應[10]、調節免疫[11]、抗病毒[12]等作用，具有廣泛的臨床應用前景。為進一步探討 CS 保護 SAP 相關急性腎損傷的機理，本實驗采用 5% 牛磺膽酸鈉逆行胰膽管注射的方法建立 SAP 大鼠模型，建模成功后經腹腔注射 CS，在建模后 12 h 取材檢測大鼠腎臟組織中 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達。實驗結果表明，SAP 組大鼠的胰腺及腎臟出現了明顯的病理損傷，且血清 AMY 活性、Cr 水平及 BUN 水平均較 SO 組升高，與筆者團隊[13-15]的前期研究結果一致，提示 SAP 組大鼠建模成功，SAP 大鼠的腎臟存在功能和結構上的損傷。而 CS 處理后 SAP 大鼠的血清 Cr 及 BUN 水平均降低，胰腺及腎臟的病理損傷得到改善，提示 CS 對 SAP 大鼠胰腺及腎臟損傷均具有保護作用。
TNF-α 在 SAP 發病過程中發揮著促炎和促凋亡作用[16-17]。TNF-α 不僅可以直接作用于腎小管，導致腎小管上皮細胞死亡，還能募集炎性細胞及促進炎性介質釋放[18-19]。ICAM-1 是一種細胞間黏附分子，主要介導多形核粒細胞與血管內皮細胞間的黏附，參與炎性細胞的遷移和浸潤，從而促進 SAP 炎癥反應進展，造成胰外臟器組織損傷[20-21]。NF-κB 是一種具有多向性調節作用的核轉錄因子，在炎性刺激等多種因素下被激活，并在轉錄水平上調節 TNF-α、ICAM-1 等多種細胞趨化因子及黏附分子的表達，從而參與 SAP 腎損傷過程[14, 22-23]。這些炎性介質的表達上調又可以促進 NF-κB 的核轉位與活化，形成一個正反饋的惡性循環過程，從而放大了 SAP 的炎癥效應[24]，進而加重腎損傷，惡化 SAP 病情，影響患者的預后。Caspase-3 蛋白是 Caspase 級聯反應中下游的關鍵效應蛋白酶，在細胞凋亡過程中發揮著重要作用[25-26]。本實驗結果表明，CS 組大鼠腎臟組織中 NF-κB、TNF-α、ICAM-1 及 Caspase-3 蛋白的表達均較 SAP 組下調，表明 CS 可以抑制 NF-κB 的活化，下調下游炎性介質 TNF-α 和黏附分子 ICAM-1 的表達，減少腎臟細胞的凋亡，從而減輕 SAP 大鼠的急性腎損傷。這可能為 CS 用于治療 SAP 合并急性腎損傷提供了理論基礎及實驗依據。
