引用本文： 徐土炳, 李莉, 母漢正, 羅興迪, 帥領, 張玉君. 經門靜脈注射骨髓間充質干細胞對大鼠轉化生長因子-βR1、-βR2 的影響. 中國普外基礎與臨床雜志, 2017, 24(8): 953-957. doi: 10.7507/1007-9424.201612081 復制
急性肝功能衰竭是一種非常嚴重的肝類疾病，主要是指由病毒、乙醇、藥物、毒物等引起的肝細胞嚴重損害，進而導致乏力、深度黃疸、凝血功能障礙、肝性腦病、腹水等臨床綜合征的出現，其發病較急，若不能及時救治則會引起多器官功能衰竭而死亡[1-4]。急性肝功能衰竭的臨床癥狀較為復雜，死亡率也較高，治療難度相當大。原位肝移植雖然是目前最為有效的方式，但是其費用較為昂貴，供肝來源也困難，限制了其在臨床的廣泛使用[5-6]。隨著組織工程技術的不斷發展，骨髓間充質干細胞也開始應用于急性肝功能衰竭患者的治療中，且其重現性好、費用低、運作方便，治療效果較好，但其具體機制目前尚不完全清楚[7]。因此，本研究選取雄性 SD 大鼠制作急性肝功能衰竭模型后分別給予生理鹽水和骨髓間充質干細胞干預，然后觀察其對肝臟的組織形態、原位細胞凋亡情況及轉化生長因子-β 受體（TGF-βR）1 和 TGF-βR2 蛋白表達情況的影響，希望能為臨床提供一定的理論依據。
1 材料與方法
1.1 主要材料及實驗動物
1.1.1 主要材料和試劑 DMEM 低糖培養基，購自美國 Gibco 公司；四氯化碳，購自美國 Sigma 公司；TGF-βR1 和 TGF-βR2 一抗（兔抗），購自美國 Abcam 公司。
1.1.2 實驗動物及分組 清潔級雄性 SD 大鼠 60 只，體質量 200～240 g；另外抽取 6 只體質量 80～100 g 的 SD 大鼠用于骨髓間充質干細胞的獲取。大鼠均購至上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號：SCXH（滬）2008-0006，飼養于二級動物室，飼養環境為恒溫 24 ℃，濕度 55%～60%，分籠飼養。采用隨機數字表法將 60 只 SD 大鼠隨機分為正常對照組和急性肝功能衰竭模型組，急性肝功能衰竭模型組再根據干預方法不同分為急性肝功能衰竭組及骨髓間充質干細胞治療組。每組 20 只大鼠。
1.2 實驗方法
1.2.1 骨髓間充質干細胞的分離培養 將 6 只 SD 大鼠脫頸處死后取股骨和脛骨，切除兩端骨骺后顯露骨髓腔，以 DMEM 培養液沖洗骨髓腔，收集細胞懸液后以 8 000 r/min（r=3 cm）離心 10 min，用 DMEM 沖洗 2 次后重新懸浮于 DMEM 培養基中置于 37 ℃、5% CO2 條件下培養，每 48 h 換液 1 次。顯微鏡下觀察細胞生長情況，待細胞在瓶底匯合至 90% 左右時傾去培養液，收集細胞后進行傳代培養，取第 2 代細胞備用。
1.2.2 大鼠急性肝功能衰竭模型的制備 禁食 12 h后，腹腔注射四氯化碳蓖麻油溶液（體積比 1∶1），一次性注射，劑量為 4 mL/kg。正常對照組大鼠不做任何處理。
1.2.3 干預措施 造模后 24 h，骨髓間充質干細胞治療組大鼠經門靜脈緩慢注入 DAPI 標記的骨髓間充質干細胞懸液 1 mL；急性肝功能衰竭組注入等量的生理鹽水；而正常對照組不做任何處理。注意各組的保暖。
1.2.4 肝臟組織形態學觀察 處理后第 7 天時將各組大鼠采用 10% 水合氯醛（0.3 mL/100 g）進行麻醉，于右肝同一部位取少量肝臟組織（大小約為2.0 cm×2.0 cm×0.5 cm），10% 甲醛溶液固定 24 h 后作連續切片，常規石蠟包埋后蘇木精-伊紅（HE）染色封片，于光鏡下觀察各組肝臟組織形態。
1.2.5 檢測肝細胞凋亡情況 將各組肝臟組織石蠟切片放入干燥箱內烘烤 30 min，利用二甲苯進行脫蠟，梯度乙醇脫水和水化，采用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記（TUNEL）試劑盒，DAB 顯色，蘇木精復染，后二甲苯透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察原位細胞的凋亡情況。陰性對照僅加突光素標記的 dUTP 液，其他操作相同。結果判斷：原位凋亡的陽性細胞表現為細胞核染色成棕黃色顆粒，每張切片隨機選取選個 5 視野，每個視野計數 100 個肝細胞，計算凋亡細胞百分比的均數，即凋亡指數。
1.2.6 Western blot 法測定肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達情況 取各組大鼠肝臟組織約 100 mg，以 PBS 沖洗 2 次后加細胞裂解液，勻漿 3～5 min 后以 12 000 r/min（r=3 cm）離心 10 min，取上清液加入 BCA 試劑盒檢測蛋白濃度，隨后行 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，將凝膠取出后放入轉膜液中浸泡，以 100 mA 電流轉膜后將凝膠轉移至 PVDF 膜上。將 PVDF 膜封閉好后放入雜交袋內，加入一抗兔抗 TGF-βR1 和兔抗 TGF-βR2，振蕩過夜。以 TBS 洗膜 2 次再放入盛有堿性磷酸酶標記的二抗中孵育 1 h，放射顯影并測量條帶的灰度值，以 GAPDH 作為內參照，兩者灰度的比值即為其蛋白相對表達水平。
1.3 統計學方法
采用 SPSS 19.0 統計軟件對數據進行分析。計量資料采用均數±標準差（ ±s）表示，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用 LSD 檢驗；計數資料比較使用 χ2 檢驗或 Fisher 確切概率法。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 各組大鼠存活情況
急性肝功能衰竭組術后 1 周存活率明顯低于正常對照組（P<0.05），骨髓間充質干細胞治療組的術后 1 周存活率明顯高于急性肝功能衰竭組（P<0.05），與正常對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表 1。
表1
各組大鼠術后 1 周存活情況〔例（%） 〕
2.2 各組肝臟組織的病理學變化
急性肝功能衰竭組的肝細胞呈彌漫性壞死，肝索解離，小葉結構模糊不清，見大量橋接樣壞死，小葉內及匯管區有大量淋巴細胞浸潤，殘存肝細胞水腫變性；骨髓間充質干細胞治療組炎性細胞浸潤減少，肝小葉結構逐漸恢復，匯管區可見膽管增生，周圍可見正常肝細胞（圖 1）。
圖1
示骨髓間充質干細胞治療組和急性肝功能衰竭組肝組織病理形態學變化（HE ×400） a：急性肝功能衰竭組；b：骨髓間充質干細胞治療組
2.3 各組肝細胞凋亡指數比較
原位凋亡陽性細胞表現為細胞核染色呈棕黃色顆粒（圖 2）。急性肝功能衰竭組和骨髓間充質干細胞治療組肝細胞凋亡指數均明顯高于正常對照組（P<0.05），而骨髓間充質干細胞治療組的細胞凋亡指數較急性肝功能衰竭組明顯降低（P<0.05）。見表 2。
表2
各組肝細胞凋亡指數比較（%，
）
圖2
示 TUNEL 法檢測各組肝細胞的凋亡結果（DAB ×400） a：正常對照組；b：急性肝功能衰竭組；c：骨髓間充質干細胞治療組
2.4 各組肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達結果
Western blot 法測定各組肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達的定性結果見圖 3。急性肝功能衰竭組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量明顯高于正常對照組（P<0.05）；骨髓間充質干細胞治療組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量較急性肝功能衰竭組明顯降低（P<0.05），見表 3。
圖3
示各組肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達結果 1：急性肝功能衰竭組；2：骨髓間充質干細胞治療組；3：正常對照組
表3
各組肝組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達結果（
）
3 討論
肝功能衰竭是多因素引起的嚴重肝臟損害，導致其合成、解毒、排泄、生物轉化等功能發生嚴重障礙或失代償，出現以凝血功能障礙、黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現的一組臨床癥候群，其發病率和致死率均較高，嚴重影響患者生活質量[8-11]。
引起肝功能衰竭的主要病因是肝炎病毒藥物、肝毒性物質等。臨床上根據病理組織學特征和病情發展速度將肝功能衰竭分為急性肝功能衰竭、亞急性肝功能衰竭、慢加急性（亞急性）肝功能衰竭和慢性肝功能衰竭 4 種，其中急性肝功能衰竭起病急，發展快，患者多在發病 2 周內出現以 Ⅱ 度以上肝性腦病為特征的肝功能衰竭癥候群，死亡率高[12-15]。
目前針對急性肝功能衰竭的治療仍沒有統一有效的標準，一般采用原位肝移植進行治療，雖然能取得一定的效果，但其費用較為昂貴，供肝來源較少，且術后的排斥反應、繼發感染等也會影響患者的預后[16-18]。因此，探索新的、有效的、費用更低的治療技術對于改善急性肝功能衰竭患者的預后和提高患者生存率具有重要的意義。
隨著干細胞研究技術的不斷發展，干細胞移植也開始被應用于肝臟疾病的治療過程，其重現性較好，操作也較為簡便，費用也較低，治療效果較好，其中骨髓間充質干細胞是目前最為常用的種子細胞[19-20]。骨髓間充質干細胞是一種能自我更新并定向分化生成組織的多潛能干細胞，存在于骨髓基質內，可在一些生長因子的誘導下向成骨細胞系、成軟骨細胞系方向分化，進而分化成為成骨細胞、軟骨細胞、成肌細胞、神經元樣細胞等多種非造血組織來源的組織細胞[21-22]。骨髓間充質干細胞取材也較為方便，取材時對供體損傷較小，體外培養的活性也較好，在肝功能衰竭、肝纖維化、肝硬化等疾病的治療方面均具有良好的效果[23]。
本研究采用雄性 SD 大鼠制作急性肝功能衰竭模型，然后分別給予生理鹽水和骨髓間充質干細胞治療，并將治療后的肝組織形態、原位細胞凋亡情況與正常對照組進行了比較，結果表明，急性肝功能衰竭組術后 1 周存活率明顯低于正常對照組（P<0.05），而骨髓間充質干細胞治療組術后 1 周存活率明顯高于急性肝功能衰竭組（P<0.05），結果提示，骨髓間充質干細胞對急性肝功能衰竭有一定的治療效果，能明顯降低急性肝功能衰竭大鼠的死亡率；進一步觀察肝臟組織的形態學變化，急性肝功能衰竭組大鼠的肝細胞彌漫性壞死，肝索解離，小葉結構模糊不清，見大量橋接樣壞死，小葉內及匯管區有大量淋巴細胞浸潤，殘存肝細胞水腫變性；骨髓間充質干細胞治療組的炎性細胞浸潤減少，肝小葉結構逐漸恢復，匯管區可見膽管增生，周圍可見正常肝細胞，提示骨髓間充質干細胞能促進急性肝功能衰竭大鼠肝細胞的增殖，并能減輕肝組織炎癥，改善大鼠肝功能衰竭癥狀；同時發現，急性肝功能衰竭組肝細胞凋亡指數明顯高于正常對照組，而骨髓間充質干細胞治療組細胞凋亡指數較急性肝功能衰竭組明顯降低（P<0.05），提示骨髓間充質干細胞可抑制肝細胞的凋亡，從而減輕肝損傷，并促進肝損傷后組織的恢復。
TGF-β 是一組新近發現的調節細胞生長和分化的 TGF-β 超家族，其能使正常的成纖維細胞的表型發生轉化，促進細胞外基質的合成，抑制其降解，但其過表達往往會引起不可逆的組織纖維化，繼而參與急性肝功能衰竭的發生和發展過程[24-25]。TGF-β1 和 TGF-β2 是 TGF-β 的亞型，主要參與移植物組織結構重建和血管硬化過程，并能通過對血小板源性細胞因子和成纖維細胞生長因子的表達來調控促進細胞外基質的產生，最終導致間質纖維化[26-27]。在本研究中發現，急性肝功能衰竭組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量明顯高于正常對照組，而骨髓間充質干細胞治療組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量較急性肝功能衰竭組明顯降低，結果提示，TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白的表達與急性肝功能衰竭的發生和發展可能有一定的關系，而骨髓間充質干細胞能明顯降低 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達，這可能也是骨髓間充質干細胞能治療急性肝功能衰竭的機制之一。但本研究的樣本量較小，對于骨髓間充質干細胞治療急性肝功能衰竭的具體機制仍需做進一步的深入研究。
綜上所述，骨髓間充質干細胞在肝細胞損傷的恢復中能抑制肝細胞凋亡，而其機制可能與調節 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白的表達有關，但其具體調節通路需要進一步的研究。
急性肝功能衰竭是一種非常嚴重的肝類疾病，主要是指由病毒、乙醇、藥物、毒物等引起的肝細胞嚴重損害，進而導致乏力、深度黃疸、凝血功能障礙、肝性腦病、腹水等臨床綜合征的出現，其發病較急，若不能及時救治則會引起多器官功能衰竭而死亡[1-4]。急性肝功能衰竭的臨床癥狀較為復雜，死亡率也較高，治療難度相當大。原位肝移植雖然是目前最為有效的方式，但是其費用較為昂貴，供肝來源也困難，限制了其在臨床的廣泛使用[5-6]。隨著組織工程技術的不斷發展，骨髓間充質干細胞也開始應用于急性肝功能衰竭患者的治療中，且其重現性好、費用低、運作方便，治療效果較好，但其具體機制目前尚不完全清楚[7]。因此，本研究選取雄性 SD 大鼠制作急性肝功能衰竭模型后分別給予生理鹽水和骨髓間充質干細胞干預，然后觀察其對肝臟的組織形態、原位細胞凋亡情況及轉化生長因子-β 受體（TGF-βR）1 和 TGF-βR2 蛋白表達情況的影響，希望能為臨床提供一定的理論依據。
1 材料與方法
1.1 主要材料及實驗動物
1.1.1 主要材料和試劑 DMEM 低糖培養基，購自美國 Gibco 公司；四氯化碳，購自美國 Sigma 公司；TGF-βR1 和 TGF-βR2 一抗（兔抗），購自美國 Abcam 公司。
1.1.2 實驗動物及分組 清潔級雄性 SD 大鼠 60 只，體質量 200～240 g；另外抽取 6 只體質量 80～100 g 的 SD 大鼠用于骨髓間充質干細胞的獲取。大鼠均購至上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號：SCXH（滬）2008-0006，飼養于二級動物室，飼養環境為恒溫 24 ℃，濕度 55%～60%，分籠飼養。采用隨機數字表法將 60 只 SD 大鼠隨機分為正常對照組和急性肝功能衰竭模型組，急性肝功能衰竭模型組再根據干預方法不同分為急性肝功能衰竭組及骨髓間充質干細胞治療組。每組 20 只大鼠。
1.2 實驗方法
1.2.1 骨髓間充質干細胞的分離培養 將 6 只 SD 大鼠脫頸處死后取股骨和脛骨，切除兩端骨骺后顯露骨髓腔，以 DMEM 培養液沖洗骨髓腔，收集細胞懸液后以 8 000 r/min（r=3 cm）離心 10 min，用 DMEM 沖洗 2 次后重新懸浮于 DMEM 培養基中置于 37 ℃、5% CO2 條件下培養，每 48 h 換液 1 次。顯微鏡下觀察細胞生長情況，待細胞在瓶底匯合至 90% 左右時傾去培養液，收集細胞后進行傳代培養，取第 2 代細胞備用。
1.2.2 大鼠急性肝功能衰竭模型的制備 禁食 12 h后，腹腔注射四氯化碳蓖麻油溶液（體積比 1∶1），一次性注射，劑量為 4 mL/kg。正常對照組大鼠不做任何處理。
1.2.3 干預措施 造模后 24 h，骨髓間充質干細胞治療組大鼠經門靜脈緩慢注入 DAPI 標記的骨髓間充質干細胞懸液 1 mL；急性肝功能衰竭組注入等量的生理鹽水；而正常對照組不做任何處理。注意各組的保暖。
1.2.4 肝臟組織形態學觀察 處理后第 7 天時將各組大鼠采用 10% 水合氯醛（0.3 mL/100 g）進行麻醉，于右肝同一部位取少量肝臟組織（大小約為2.0 cm×2.0 cm×0.5 cm），10% 甲醛溶液固定 24 h 后作連續切片，常規石蠟包埋后蘇木精-伊紅（HE）染色封片，于光鏡下觀察各組肝臟組織形態。
1.2.5 檢測肝細胞凋亡情況 將各組肝臟組織石蠟切片放入干燥箱內烘烤 30 min，利用二甲苯進行脫蠟，梯度乙醇脫水和水化，采用脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記（TUNEL）試劑盒，DAB 顯色，蘇木精復染，后二甲苯透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察原位細胞的凋亡情況。陰性對照僅加突光素標記的 dUTP 液，其他操作相同。結果判斷：原位凋亡的陽性細胞表現為細胞核染色成棕黃色顆粒，每張切片隨機選取選個 5 視野，每個視野計數 100 個肝細胞，計算凋亡細胞百分比的均數，即凋亡指數。
1.2.6 Western blot 法測定肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達情況 取各組大鼠肝臟組織約 100 mg，以 PBS 沖洗 2 次后加細胞裂解液，勻漿 3～5 min 后以 12 000 r/min（r=3 cm）離心 10 min，取上清液加入 BCA 試劑盒檢測蛋白濃度，隨后行 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，將凝膠取出后放入轉膜液中浸泡，以 100 mA 電流轉膜后將凝膠轉移至 PVDF 膜上。將 PVDF 膜封閉好后放入雜交袋內，加入一抗兔抗 TGF-βR1 和兔抗 TGF-βR2，振蕩過夜。以 TBS 洗膜 2 次再放入盛有堿性磷酸酶標記的二抗中孵育 1 h，放射顯影并測量條帶的灰度值，以 GAPDH 作為內參照，兩者灰度的比值即為其蛋白相對表達水平。
1.3 統計學方法
采用 SPSS 19.0 統計軟件對數據進行分析。計量資料采用均數±標準差（ ±s）表示，組間比較采用方差分析，兩兩比較采用 LSD 檢驗；計數資料比較使用 χ2 檢驗或 Fisher 確切概率法。檢驗水準 α=0.05。
2 結果
2.1 各組大鼠存活情況
急性肝功能衰竭組術后 1 周存活率明顯低于正常對照組（P<0.05），骨髓間充質干細胞治療組的術后 1 周存活率明顯高于急性肝功能衰竭組（P<0.05），與正常對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。見表 1。
表1
各組大鼠術后 1 周存活情況〔例（%） 〕
2.2 各組肝臟組織的病理學變化
急性肝功能衰竭組的肝細胞呈彌漫性壞死，肝索解離，小葉結構模糊不清，見大量橋接樣壞死，小葉內及匯管區有大量淋巴細胞浸潤，殘存肝細胞水腫變性；骨髓間充質干細胞治療組炎性細胞浸潤減少，肝小葉結構逐漸恢復，匯管區可見膽管增生，周圍可見正常肝細胞（圖 1）。
圖1
示骨髓間充質干細胞治療組和急性肝功能衰竭組肝組織病理形態學變化（HE ×400） a：急性肝功能衰竭組；b：骨髓間充質干細胞治療組
2.3 各組肝細胞凋亡指數比較
原位凋亡陽性細胞表現為細胞核染色呈棕黃色顆粒（圖 2）。急性肝功能衰竭組和骨髓間充質干細胞治療組肝細胞凋亡指數均明顯高于正常對照組（P<0.05），而骨髓間充質干細胞治療組的細胞凋亡指數較急性肝功能衰竭組明顯降低（P<0.05）。見表 2。
表2
各組肝細胞凋亡指數比較（%，
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圖2
示 TUNEL 法檢測各組肝細胞的凋亡結果（DAB ×400） a：正常對照組；b：急性肝功能衰竭組；c：骨髓間充質干細胞治療組
2.4 各組肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達結果
Western blot 法測定各組肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達的定性結果見圖 3。急性肝功能衰竭組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量明顯高于正常對照組（P<0.05）；骨髓間充質干細胞治療組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量較急性肝功能衰竭組明顯降低（P<0.05），見表 3。
圖3
示各組肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達結果 1：急性肝功能衰竭組；2：骨髓間充質干細胞治療組；3：正常對照組
表3
各組肝組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達結果（
）
3 討論
肝功能衰竭是多因素引起的嚴重肝臟損害，導致其合成、解毒、排泄、生物轉化等功能發生嚴重障礙或失代償，出現以凝血功能障礙、黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現的一組臨床癥候群，其發病率和致死率均較高，嚴重影響患者生活質量[8-11]。
引起肝功能衰竭的主要病因是肝炎病毒藥物、肝毒性物質等。臨床上根據病理組織學特征和病情發展速度將肝功能衰竭分為急性肝功能衰竭、亞急性肝功能衰竭、慢加急性（亞急性）肝功能衰竭和慢性肝功能衰竭 4 種，其中急性肝功能衰竭起病急，發展快，患者多在發病 2 周內出現以 Ⅱ 度以上肝性腦病為特征的肝功能衰竭癥候群，死亡率高[12-15]。
目前針對急性肝功能衰竭的治療仍沒有統一有效的標準，一般采用原位肝移植進行治療，雖然能取得一定的效果，但其費用較為昂貴，供肝來源較少，且術后的排斥反應、繼發感染等也會影響患者的預后[16-18]。因此，探索新的、有效的、費用更低的治療技術對于改善急性肝功能衰竭患者的預后和提高患者生存率具有重要的意義。
隨著干細胞研究技術的不斷發展，干細胞移植也開始被應用于肝臟疾病的治療過程，其重現性較好，操作也較為簡便，費用也較低，治療效果較好，其中骨髓間充質干細胞是目前最為常用的種子細胞[19-20]。骨髓間充質干細胞是一種能自我更新并定向分化生成組織的多潛能干細胞，存在于骨髓基質內，可在一些生長因子的誘導下向成骨細胞系、成軟骨細胞系方向分化，進而分化成為成骨細胞、軟骨細胞、成肌細胞、神經元樣細胞等多種非造血組織來源的組織細胞[21-22]。骨髓間充質干細胞取材也較為方便，取材時對供體損傷較小，體外培養的活性也較好，在肝功能衰竭、肝纖維化、肝硬化等疾病的治療方面均具有良好的效果[23]。
本研究采用雄性 SD 大鼠制作急性肝功能衰竭模型，然后分別給予生理鹽水和骨髓間充質干細胞治療，并將治療后的肝組織形態、原位細胞凋亡情況與正常對照組進行了比較，結果表明，急性肝功能衰竭組術后 1 周存活率明顯低于正常對照組（P<0.05），而骨髓間充質干細胞治療組術后 1 周存活率明顯高于急性肝功能衰竭組（P<0.05），結果提示，骨髓間充質干細胞對急性肝功能衰竭有一定的治療效果，能明顯降低急性肝功能衰竭大鼠的死亡率；進一步觀察肝臟組織的形態學變化，急性肝功能衰竭組大鼠的肝細胞彌漫性壞死，肝索解離，小葉結構模糊不清，見大量橋接樣壞死，小葉內及匯管區有大量淋巴細胞浸潤，殘存肝細胞水腫變性；骨髓間充質干細胞治療組的炎性細胞浸潤減少，肝小葉結構逐漸恢復，匯管區可見膽管增生，周圍可見正常肝細胞，提示骨髓間充質干細胞能促進急性肝功能衰竭大鼠肝細胞的增殖，并能減輕肝組織炎癥，改善大鼠肝功能衰竭癥狀；同時發現，急性肝功能衰竭組肝細胞凋亡指數明顯高于正常對照組，而骨髓間充質干細胞治療組細胞凋亡指數較急性肝功能衰竭組明顯降低（P<0.05），提示骨髓間充質干細胞可抑制肝細胞的凋亡，從而減輕肝損傷，并促進肝損傷后組織的恢復。
TGF-β 是一組新近發現的調節細胞生長和分化的 TGF-β 超家族，其能使正常的成纖維細胞的表型發生轉化，促進細胞外基質的合成，抑制其降解，但其過表達往往會引起不可逆的組織纖維化，繼而參與急性肝功能衰竭的發生和發展過程[24-25]。TGF-β1 和 TGF-β2 是 TGF-β 的亞型，主要參與移植物組織結構重建和血管硬化過程，并能通過對血小板源性細胞因子和成纖維細胞生長因子的表達來調控促進細胞外基質的產生，最終導致間質纖維化[26-27]。在本研究中發現，急性肝功能衰竭組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量明顯高于正常對照組，而骨髓間充質干細胞治療組的肝臟組織中 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白相對表達量較急性肝功能衰竭組明顯降低，結果提示，TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白的表達與急性肝功能衰竭的發生和發展可能有一定的關系，而骨髓間充質干細胞能明顯降低 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白表達，這可能也是骨髓間充質干細胞能治療急性肝功能衰竭的機制之一。但本研究的樣本量較小，對于骨髓間充質干細胞治療急性肝功能衰竭的具體機制仍需做進一步的深入研究。
綜上所述，骨髓間充質干細胞在肝細胞損傷的恢復中能抑制肝細胞凋亡，而其機制可能與調節 TGF-βR1 和 TGF-βR2 蛋白的表達有關，但其具體調節通路需要進一步的研究。
