引用本文： 陳敏, 張濤, 克力木. ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點多態性與膽囊結石的相關性研究. 中國普外基礎與臨床雜志, 2017, 24(2): 215-221. doi: 10.7507/1007-9424.201606032 復制
血漿載脂蛋白 B（apolipoprotein B，ApoB）幾乎是構成低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的唯一要素，同是也是乳糜微粒、脂蛋白 a、極低密度脂蛋白膽固醇（very low density lipoprotein cholesterol，VLDL-C）的成分，并且是乳糜微粒和 LDL-C 的代謝殘余[1]。ApoB 基因位于 2 號染色體的 p24-p23，前期的文獻報道多圍繞 ApoB 基因的 XbaⅠ[2]和 EcoRⅠ[3]單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）進行研究。ApoB 基因多態性可能與脂代謝紊亂相關[4]，進而在膽囊結石的發生、發展中起著重要的作用[5]。但由于 ApoB 基因多態性的位點很多，截至目前，關于 ApoB 基因 SNP 和膽囊結石患病風險之間的關系的研究較少，且尚未完全闡明。本研究通過 ApoB 基因在脂代謝紊亂人群中具有代表性的兩個標簽 SNP rs676210 和 rs2854725，進一步探討 ApoB 基因多態性與膽囊結石的關系。
1 對象與方法
1.1 納入和排除標準
膽囊結石患者的納入標準：年齡 18～70 歲的漢族及維吾爾族患者，居住在新疆地區的時間不少于 20 年，資料完整，確診為膽囊結石且在我院行膽囊切除術。膽囊結石患者的排除標準：年齡超出研究范圍，有膽囊急性感染的癥狀或臨床檢驗及影像指標，合并惡性腫瘤、長期接受降脂藥物者、孕婦、嚴重器官功能障礙者、甲乙丙型肝炎、獲得性免疫缺陷綜合征、梅毒患者。健康對照者的納入標準：年齡 18～70 歲，超聲提示膽囊形態大小正常，且未見結石；既往無膽囊結石及膽囊炎相關病史者。膽囊結石患者及健康對照者均同意參加研究并簽署書面知情同意書。
1.2 研究對象
根據納入和排除標準，共納入 2010～2014 年期間因患膽囊結石在我院接受膽囊切除術的住院患者 189 例，其中維吾爾族 99 例，年齡（51.55 ± 8.92）歲，男 53 例、女 46 例；漢族 90 例，年齡（52.14 ± 11.08）歲，男 46 例、女 44 例。納入同期在我院進行健康體檢者 190 例作為對照，其中維吾爾族 93 例，年齡（50.16 ± 9.32）歲，男 47 例、女 46 例；漢族 97 例，年齡（51.73 ± 8.55）歲，男 51 例、女 46 例。入選人群居住地均為新疆維吾爾自治區，且居住時間大于 20 年。健康對照者患者的臨床資料與膽囊結石患者基本相匹配（P＞0.05）。2 組患者的資料采集內容主要包括：性別、年齡、血液標本，并結合個人史、家族史、既往史、服藥史等。
1.3 研究方法
1.3.1 主要試劑及設備 試劑：瓊脂糖（上海生工，AB0013-250 g），50 × TAE（上海生工，SD8108）溴化乙錠（Sigma，E8751），Marker DL2000（Takara，3427A），6 × Loading buffer（Takara，9156），基因組提取試劑盒（天根，DP319-02）。儀器設備：凝膠成像系統（美國 Biorad GelDoc XR），水平電泳儀及電源（北京六一儀器廠 DYCP-31DN 及 DYY-6C 型），移液器（德國 Eppendorf），臺式高速冷凍離心機（上海力新公司，Neofuge 15R），核酸蛋白定量儀（K5500，北京凱奧）。
1.3.2 外周血液樣本采集 采樣前，2 組均空腹大于 12 h。采血量 5 mL。生化指標用 K3EDTA 抗凝真空管，分離血漿和血細胞。DNA 提取采用普通生化采血管，靜置 30 min 后，500 r/min（r=5 cm）離心 8 min，留取血清及血凝塊，–80 ℃ 保存。
1.3.3 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點多態性檢測 ① 基因組 DNA 提取：采用天根 DP319-02 試劑盒，操作按說明書進行。② rs676210 和 rs2854725 基因型分析：PCR 產物純化后用 ABI 公司的 SNaPshot Multiplex kit 進行延伸反應。延伸產物用蝦堿酶（SAP）純化后在 ABI3730xl 上樣。SNP 分型用 GeneMapper4.1（Applied Biosystems）來分析。③ PCR 引物見表 1。④ 多重 PCR 反應采用 Touch-down 的 PCR 反應程序如下：95 ℃ 2 min，94 ℃ 20 s，65 ℃ 40 s，每個循環下降 0.5 ℃，72 ℃ 1.5 min，11 個循環；94 ℃ 20 s，59 ℃ 30 s，72 ℃ 1.5 min，24 個循環；72 ℃ 2 min，4 ℃ 持續。在 15 μL PCR 產物中加入 5 U SAP和 2 U Exonuclease Ⅰ，37 ℃ 溫浴 1 h，然后 75 ℃ 滅活 15 min。
表1
ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的引物序列
1.4 統計學方法
采用 SPSS 17.0 統計軟件對數據進行分析。率的比較采用χ2檢驗，計量資料比較采用t 檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 膽囊結石患者和健康對照者間以及維吾爾族和漢族間 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因分布頻率比較
2.1.1 膽囊結石患者和健康對照者間比較 ① 維吾爾族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因的分布頻率在膽囊結石患者和健康對照者間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.229，P=0.633；rs2854725 位點：χ2=0.028，P=0.866），見表 2。② 在漢族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因的分布頻率在膽囊結石患者和健康對照者間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.608，P=0.435；rs2854725 位點：χ2=0.089，P=0.766）。見表 3。
表2
維吾爾族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因在膽囊結石患者和健康對照者間的分布頻率〔例（%）〕
表3
漢族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因在膽囊結石患者和健康對照者間的分布頻率〔例（%）〕
2.1.2 維吾爾族和漢族間比較 ① 在膽囊結石患者中，rs676210 和 rs2854725 位點等位基因的分布頻率在維吾爾族和漢族間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.103，P=0.748；rs2854725 位點：χ2=3.139，P=0.076），見表 4。② 在健康對照者中，rs676210 和 rs2854725 位點等位基因的分布頻率在維吾爾族和漢族間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.000，P=0.990；rs2854725 位點：χ2=2.673，P=0.102）。見表 5。
表4
膽囊結石患者的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因在維吾爾族和漢族間的分布頻率〔例（%）〕
表5
健康對照者的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因在維吾爾族和漢族間的分布頻率〔例（%）〕
2.2 膽囊結石患者和健康對照者間以及維吾爾族和漢族間 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型分布頻率比較
2.2.1 膽囊結石患者和健康對照者間的比較 ① 維吾爾族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因型分布頻率在膽囊結石患者和健康對照者間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=2.301，P=0.317；rs2854725 位點：χ2=3.040，P=0.219），見表 6。② 在漢族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因型分布頻率在膽囊結石患者和健康對照者間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=4.909，P=0.086；rs2854725 位點：χ2=0.107，P=0.744）。見表 7。
表6
維吾爾族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型在膽囊結石患者和健康對照者間的分布頻率〔例（%）〕
表7
漢族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型在膽囊結石患者和健康對照者間的分布頻率〔例（%）〕
2.2.2 維吾爾族和漢族間的比較 ① 在膽囊結石患者中，ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因型分布頻率在維吾爾族和漢族間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.235，P=0.899；rs2854725 位點：χ2=3.630，P=0.057），見表 8。② 在健康對照者中，ApoB 基因 rs676210 位點的基因型分布頻率在維吾爾族和漢族間比較差異無統計學意義（χ2=1.026，P=0.599）。ApoB 基因 rs2854725 位點基因型分布頻率在維吾爾族和漢族之間總體比較，差異具有統計學意義（χ2=9.153，P=0.010）；進一步做兩兩比較（卡方分割），α 水平為 0.05/3=0.016，得知在維吾爾族和漢族間，T/T 型與 G/T 型分布頻率比較差異有統計學意義（χ2=6.128，P=0.013），漢族人群（27.8%）的 G/T 型高于維吾爾族人群（12.9%），G/T 型與 G/G 型分布頻率比較差異無統計學意義（χ2=1.561，P=0.212）；T/T 型與 G/G 型分布頻率比較差異無統計學意義（χ2=0.372，P=0.542）。見表 9。
表8
膽囊結石患者的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型頻率在維吾爾族和漢族間的比較情況〔例（%）〕
表9
健康對照者的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型頻率在維吾爾族和漢族間的比較情況〔例（%）〕
3 討論
ApoB 作為極低密度脂蛋白和微粒體甘油三酯轉運蛋白的重要組成部分，在脂質代謝中發揮著重要的作用[6]。血漿 ApoB 水平可影響脂質代謝，進而與脂質代謝相關的疾病關系密切[7-8]。降低 ApoB 蛋白分泌可以導致乳糜微粒和極低密度脂蛋白的產量降低，進而導致脂肪和脂溶性維生素吸收不良。有研究[9]表明，人類的 50%～60% 的血漿 ApoB 的變化是由基因決定的。因而有研究者推測，ApoB 基因的突變可能會通過其蛋白表達水平的改變而導致相關疾病的發生及發展。
ApoB 基因，其染色體位點是 2p24.1[10]，其主要產生兩種蛋白，短的稱為載脂蛋白 B-48 和較長的稱為載脂蛋白 B-100，兩者都在血漿脂蛋白代謝中起著關鍵的作用。基因序列的改變、環境因素的影響等共同作用，促成了脂代謝相關疾病如膽囊結石的形成[11]。而 ApoB 基因缺陷，也可以導致脂質代謝紊亂，從而誘發其相關的心腦血管疾病[12]、膽囊結石等疾病的發生[13-14]。
關于 ApoB 基因多態性，目前研究較多的是 26 外顯子 XbaⅠ 的多態性（7673 C>T，Thr2488Thr）[15]。ApoB 基因 XbaⅠ 的多態性導致血漿膽固醇水平變化[16]，進而與膽囊結石的形成關系密切[17]。另一種 ApoB 基因的多態性是 EcoRⅠ（12669 G>A，Glu4154Lys），其突變等位基因的表達與 ApoB 水平的改變有關，并能降低膽囊結石形成的風險[18]。
有研究[19]表明，膽結石的形成可能是由基因決定的。由于 ApoB 基因與膽固醇的轉運和排泌量的控制有關，故而針對 ApoB 基因與膽囊結石的相關研究較多。一項對 ApoB rs693 進行的 meta 分析[20]結果顯示，ApoB rs693 CT + TT 型患膽囊結石的風險是 CC 型的 1.25 倍〔95%CI：（0.95，1.63）〕，ApoB rs693 CT + TT 型是膽囊結石的易患因素。但也有文獻認為 ApoB 的基因突變與血脂水平和膽囊結石不相關。一項對于絕經期前后婦女的研究[21]結果表明，ApoB 基因 77673 C> T 和 12669 G>A 多態性與絕經期前后婦女膽囊結石的發病及其結石成分均無關，進而推測，上述研究的兩個基因多態性并非高加索人群膽囊結石的預后因素，并指出環境因素的重要性。Srivastava 等[22]的研究結果也顯示，ApoB 基因 XbaⅠ 多態性與肥胖和血脂水平均無關。
近年來發現 ApoB 基因的某些突變與肥胖[23]、家族低 β 脂蛋白血癥[24-25]、冠心病、膽囊結石、膽囊癌[26]等疾病相關。幾種少見型的 ApoB 突變也被證實對血漿 ApoB、LDL-C 水平產生明顯的影響[27]，其中，ApoB rs676210 是一個涉及到 G 的替代導致亮氨酸轉化脯氨酸的錯義突變。針對 rs676210 和脂質代謝紊亂的風險研究相對比較少。在早期的研究中，rs676210 均與血漿 VLDL-C 相關組分密切相關，且與平均甘油三酯、LDL-C 的水平相關[28]。Teslovich 等[29]還發現，相對于 G 等位基因，rs676210 的 A 等位基因與甘油三酯、總膽固醇和 VLDL-C 水平降低和高密度脂蛋白膽固醇水平增高相關。最近，全基因組關聯研究[30]表明，rs676210 是調節氧化低密度脂蛋白的重要因素。那么，ApoB 基因多態性與脂代謝相關疾病的膽囊結石是否相關呢？因 ApoB 基因的多態性位點較多，無法逐一進行研究。本研究將標簽 SNP 結合文獻研究熱點，選取了兩個標簽并熱點 SNPs——rs676210 和 rs2854725 進行研究，結果發現，ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的等位基因頻率和基因型頻率在維吾爾族和漢族的囊結石患者和健康對照者間比較差異無統計學意義，結果提示，ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因多態性與膽囊結石無關。
還有研究[31]表明，血漿低 ApoB 和 LDL-C 濃度具有家族遺傳傾向。ApoB 基因突變與一些脂代謝相關的家族遺傳性疾病相關，且研究中將研究人群以民族劃分[32]。本研究中也按照民族分組進行分析，以進一步了解膽囊結石患者和健康對照者中 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因分布在維吾爾族和漢族間是否存在差異，結果發現，rs676210 位點的等位基因頻率和基因型頻率分布在膽囊結石患者和健康對照者的維吾爾族和漢族間比較差異均無統計學意義，而 rs2854725 位點的等位基因頻率在囊結石患者的維吾爾族和漢族間比較差異無統計學意義，但其基因型分布頻率在健康對照者的維吾爾族和漢族間比較差異有統計學意義，且 G/T 型的頻率在漢族中明顯高于維吾爾族。結果提示，ApoB 基因 rs2854725 位點的多態性可能在維吾爾族和漢族間存在一定的差異，但需要進一步增加樣本含量及多中心研究來進一步證實。
血漿載脂蛋白 B（apolipoprotein B，ApoB）幾乎是構成低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的唯一要素，同是也是乳糜微粒、脂蛋白 a、極低密度脂蛋白膽固醇（very low density lipoprotein cholesterol，VLDL-C）的成分，并且是乳糜微粒和 LDL-C 的代謝殘余[1]。ApoB 基因位于 2 號染色體的 p24-p23，前期的文獻報道多圍繞 ApoB 基因的 XbaⅠ[2]和 EcoRⅠ[3]單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）進行研究。ApoB 基因多態性可能與脂代謝紊亂相關[4]，進而在膽囊結石的發生、發展中起著重要的作用[5]。但由于 ApoB 基因多態性的位點很多，截至目前，關于 ApoB 基因 SNP 和膽囊結石患病風險之間的關系的研究較少，且尚未完全闡明。本研究通過 ApoB 基因在脂代謝紊亂人群中具有代表性的兩個標簽 SNP rs676210 和 rs2854725，進一步探討 ApoB 基因多態性與膽囊結石的關系。
1 對象與方法
1.1 納入和排除標準
膽囊結石患者的納入標準：年齡 18～70 歲的漢族及維吾爾族患者，居住在新疆地區的時間不少于 20 年，資料完整，確診為膽囊結石且在我院行膽囊切除術。膽囊結石患者的排除標準：年齡超出研究范圍，有膽囊急性感染的癥狀或臨床檢驗及影像指標，合并惡性腫瘤、長期接受降脂藥物者、孕婦、嚴重器官功能障礙者、甲乙丙型肝炎、獲得性免疫缺陷綜合征、梅毒患者。健康對照者的納入標準：年齡 18～70 歲，超聲提示膽囊形態大小正常，且未見結石；既往無膽囊結石及膽囊炎相關病史者。膽囊結石患者及健康對照者均同意參加研究并簽署書面知情同意書。
1.2 研究對象
根據納入和排除標準，共納入 2010～2014 年期間因患膽囊結石在我院接受膽囊切除術的住院患者 189 例，其中維吾爾族 99 例，年齡（51.55 ± 8.92）歲，男 53 例、女 46 例；漢族 90 例，年齡（52.14 ± 11.08）歲，男 46 例、女 44 例。納入同期在我院進行健康體檢者 190 例作為對照，其中維吾爾族 93 例，年齡（50.16 ± 9.32）歲，男 47 例、女 46 例；漢族 97 例，年齡（51.73 ± 8.55）歲，男 51 例、女 46 例。入選人群居住地均為新疆維吾爾自治區，且居住時間大于 20 年。健康對照者患者的臨床資料與膽囊結石患者基本相匹配（P＞0.05）。2 組患者的資料采集內容主要包括：性別、年齡、血液標本，并結合個人史、家族史、既往史、服藥史等。
1.3 研究方法
1.3.1 主要試劑及設備 試劑：瓊脂糖（上海生工，AB0013-250 g），50 × TAE（上海生工，SD8108）溴化乙錠（Sigma，E8751），Marker DL2000（Takara，3427A），6 × Loading buffer（Takara，9156），基因組提取試劑盒（天根，DP319-02）。儀器設備：凝膠成像系統（美國 Biorad GelDoc XR），水平電泳儀及電源（北京六一儀器廠 DYCP-31DN 及 DYY-6C 型），移液器（德國 Eppendorf），臺式高速冷凍離心機（上海力新公司，Neofuge 15R），核酸蛋白定量儀（K5500，北京凱奧）。
1.3.2 外周血液樣本采集 采樣前，2 組均空腹大于 12 h。采血量 5 mL。生化指標用 K3EDTA 抗凝真空管，分離血漿和血細胞。DNA 提取采用普通生化采血管，靜置 30 min 后，500 r/min（r=5 cm）離心 8 min，留取血清及血凝塊，–80 ℃ 保存。
1.3.3 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點多態性檢測 ① 基因組 DNA 提取：采用天根 DP319-02 試劑盒，操作按說明書進行。② rs676210 和 rs2854725 基因型分析：PCR 產物純化后用 ABI 公司的 SNaPshot Multiplex kit 進行延伸反應。延伸產物用蝦堿酶（SAP）純化后在 ABI3730xl 上樣。SNP 分型用 GeneMapper4.1（Applied Biosystems）來分析。③ PCR 引物見表 1。④ 多重 PCR 反應采用 Touch-down 的 PCR 反應程序如下：95 ℃ 2 min，94 ℃ 20 s，65 ℃ 40 s，每個循環下降 0.5 ℃，72 ℃ 1.5 min，11 個循環；94 ℃ 20 s，59 ℃ 30 s，72 ℃ 1.5 min，24 個循環；72 ℃ 2 min，4 ℃ 持續。在 15 μL PCR 產物中加入 5 U SAP和 2 U Exonuclease Ⅰ，37 ℃ 溫浴 1 h，然后 75 ℃ 滅活 15 min。
表1
ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的引物序列
1.4 統計學方法
采用 SPSS 17.0 統計軟件對數據進行分析。率的比較采用χ2檢驗，計量資料比較采用t 檢驗。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 膽囊結石患者和健康對照者間以及維吾爾族和漢族間 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因分布頻率比較
2.1.1 膽囊結石患者和健康對照者間比較 ① 維吾爾族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因的分布頻率在膽囊結石患者和健康對照者間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.229，P=0.633；rs2854725 位點：χ2=0.028，P=0.866），見表 2。② 在漢族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因的分布頻率在膽囊結石患者和健康對照者間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.608，P=0.435；rs2854725 位點：χ2=0.089，P=0.766）。見表 3。
表2
維吾爾族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因在膽囊結石患者和健康對照者間的分布頻率〔例（%）〕
表3
漢族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因在膽囊結石患者和健康對照者間的分布頻率〔例（%）〕
2.1.2 維吾爾族和漢族間比較 ① 在膽囊結石患者中，rs676210 和 rs2854725 位點等位基因的分布頻率在維吾爾族和漢族間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.103，P=0.748；rs2854725 位點：χ2=3.139，P=0.076），見表 4。② 在健康對照者中，rs676210 和 rs2854725 位點等位基因的分布頻率在維吾爾族和漢族間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.000，P=0.990；rs2854725 位點：χ2=2.673，P=0.102）。見表 5。
表4
膽囊結石患者的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因在維吾爾族和漢族間的分布頻率〔例（%）〕
表5
健康對照者的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點等位基因在維吾爾族和漢族間的分布頻率〔例（%）〕
2.2 膽囊結石患者和健康對照者間以及維吾爾族和漢族間 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型分布頻率比較
2.2.1 膽囊結石患者和健康對照者間的比較 ① 維吾爾族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因型分布頻率在膽囊結石患者和健康對照者間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=2.301，P=0.317；rs2854725 位點：χ2=3.040，P=0.219），見表 6。② 在漢族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因型分布頻率在膽囊結石患者和健康對照者間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=4.909，P=0.086；rs2854725 位點：χ2=0.107，P=0.744）。見表 7。
表6
維吾爾族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型在膽囊結石患者和健康對照者間的分布頻率〔例（%）〕
表7
漢族的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型在膽囊結石患者和健康對照者間的分布頻率〔例（%）〕
2.2.2 維吾爾族和漢族間的比較 ① 在膽囊結石患者中，ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因型分布頻率在維吾爾族和漢族間比較差異均無統計學意義（rs676210 位點：χ2=0.235，P=0.899；rs2854725 位點：χ2=3.630，P=0.057），見表 8。② 在健康對照者中，ApoB 基因 rs676210 位點的基因型分布頻率在維吾爾族和漢族間比較差異無統計學意義（χ2=1.026，P=0.599）。ApoB 基因 rs2854725 位點基因型分布頻率在維吾爾族和漢族之間總體比較，差異具有統計學意義（χ2=9.153，P=0.010）；進一步做兩兩比較（卡方分割），α 水平為 0.05/3=0.016，得知在維吾爾族和漢族間，T/T 型與 G/T 型分布頻率比較差異有統計學意義（χ2=6.128，P=0.013），漢族人群（27.8%）的 G/T 型高于維吾爾族人群（12.9%），G/T 型與 G/G 型分布頻率比較差異無統計學意義（χ2=1.561，P=0.212）；T/T 型與 G/G 型分布頻率比較差異無統計學意義（χ2=0.372，P=0.542）。見表 9。
表8
膽囊結石患者的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型頻率在維吾爾族和漢族間的比較情況〔例（%）〕
表9
健康對照者的 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點基因型頻率在維吾爾族和漢族間的比較情況〔例（%）〕
3 討論
ApoB 作為極低密度脂蛋白和微粒體甘油三酯轉運蛋白的重要組成部分，在脂質代謝中發揮著重要的作用[6]。血漿 ApoB 水平可影響脂質代謝，進而與脂質代謝相關的疾病關系密切[7-8]。降低 ApoB 蛋白分泌可以導致乳糜微粒和極低密度脂蛋白的產量降低，進而導致脂肪和脂溶性維生素吸收不良。有研究[9]表明，人類的 50%～60% 的血漿 ApoB 的變化是由基因決定的。因而有研究者推測，ApoB 基因的突變可能會通過其蛋白表達水平的改變而導致相關疾病的發生及發展。
ApoB 基因，其染色體位點是 2p24.1[10]，其主要產生兩種蛋白，短的稱為載脂蛋白 B-48 和較長的稱為載脂蛋白 B-100，兩者都在血漿脂蛋白代謝中起著關鍵的作用。基因序列的改變、環境因素的影響等共同作用，促成了脂代謝相關疾病如膽囊結石的形成[11]。而 ApoB 基因缺陷，也可以導致脂質代謝紊亂，從而誘發其相關的心腦血管疾病[12]、膽囊結石等疾病的發生[13-14]。
關于 ApoB 基因多態性，目前研究較多的是 26 外顯子 XbaⅠ 的多態性（7673 C>T，Thr2488Thr）[15]。ApoB 基因 XbaⅠ 的多態性導致血漿膽固醇水平變化[16]，進而與膽囊結石的形成關系密切[17]。另一種 ApoB 基因的多態性是 EcoRⅠ（12669 G>A，Glu4154Lys），其突變等位基因的表達與 ApoB 水平的改變有關，并能降低膽囊結石形成的風險[18]。
有研究[19]表明，膽結石的形成可能是由基因決定的。由于 ApoB 基因與膽固醇的轉運和排泌量的控制有關，故而針對 ApoB 基因與膽囊結石的相關研究較多。一項對 ApoB rs693 進行的 meta 分析[20]結果顯示，ApoB rs693 CT + TT 型患膽囊結石的風險是 CC 型的 1.25 倍〔95%CI：（0.95，1.63）〕，ApoB rs693 CT + TT 型是膽囊結石的易患因素。但也有文獻認為 ApoB 的基因突變與血脂水平和膽囊結石不相關。一項對于絕經期前后婦女的研究[21]結果表明，ApoB 基因 77673 C> T 和 12669 G>A 多態性與絕經期前后婦女膽囊結石的發病及其結石成分均無關，進而推測，上述研究的兩個基因多態性并非高加索人群膽囊結石的預后因素，并指出環境因素的重要性。Srivastava 等[22]的研究結果也顯示，ApoB 基因 XbaⅠ 多態性與肥胖和血脂水平均無關。
近年來發現 ApoB 基因的某些突變與肥胖[23]、家族低 β 脂蛋白血癥[24-25]、冠心病、膽囊結石、膽囊癌[26]等疾病相關。幾種少見型的 ApoB 突變也被證實對血漿 ApoB、LDL-C 水平產生明顯的影響[27]，其中，ApoB rs676210 是一個涉及到 G 的替代導致亮氨酸轉化脯氨酸的錯義突變。針對 rs676210 和脂質代謝紊亂的風險研究相對比較少。在早期的研究中，rs676210 均與血漿 VLDL-C 相關組分密切相關，且與平均甘油三酯、LDL-C 的水平相關[28]。Teslovich 等[29]還發現，相對于 G 等位基因，rs676210 的 A 等位基因與甘油三酯、總膽固醇和 VLDL-C 水平降低和高密度脂蛋白膽固醇水平增高相關。最近，全基因組關聯研究[30]表明，rs676210 是調節氧化低密度脂蛋白的重要因素。那么，ApoB 基因多態性與脂代謝相關疾病的膽囊結石是否相關呢？因 ApoB 基因的多態性位點較多，無法逐一進行研究。本研究將標簽 SNP 結合文獻研究熱點，選取了兩個標簽并熱點 SNPs——rs676210 和 rs2854725 進行研究，結果發現，ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的等位基因頻率和基因型頻率在維吾爾族和漢族的囊結石患者和健康對照者間比較差異無統計學意義，結果提示，ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因多態性與膽囊結石無關。
還有研究[31]表明，血漿低 ApoB 和 LDL-C 濃度具有家族遺傳傾向。ApoB 基因突變與一些脂代謝相關的家族遺傳性疾病相關，且研究中將研究人群以民族劃分[32]。本研究中也按照民族分組進行分析，以進一步了解膽囊結石患者和健康對照者中 ApoB 基因 rs676210 和 rs2854725 位點的基因分布在維吾爾族和漢族間是否存在差異，結果發現，rs676210 位點的等位基因頻率和基因型頻率分布在膽囊結石患者和健康對照者的維吾爾族和漢族間比較差異均無統計學意義，而 rs2854725 位點的等位基因頻率在囊結石患者的維吾爾族和漢族間比較差異無統計學意義，但其基因型分布頻率在健康對照者的維吾爾族和漢族間比較差異有統計學意義，且 G/T 型的頻率在漢族中明顯高于維吾爾族。結果提示，ApoB 基因 rs2854725 位點的多態性可能在維吾爾族和漢族間存在一定的差異，但需要進一步增加樣本含量及多中心研究來進一步證實。
