引用本文： 劉志春, 趙亮. PTEN和Ki-67在甲狀腺癌組織中的表達及其臨床意義. 中國普外基礎與臨床雜志, 2016, 23(11): 1348-1352. doi: 10.7507/1007-9424.20160345 復制
近年來，甲狀腺癌的發病率有逐年上升的趨勢，特別近30年以來，我國沿海地區甲狀腺癌的發病率明顯上升[1]。甲狀腺癌的發生、發展是一個涉及多基因、多途徑及多步驟的復雜過程。惡性腫瘤的生長取決于腫瘤細胞增殖與細胞凋亡的比例，而原癌基因和抑癌基因在后者發揮了重要的作用。PTEN基因定位于染色體10q23.3，其編碼的腫瘤抑制因子，能夠阻止腫瘤細胞的生長和分化，并調控細胞分裂周期[2]。Ki-67抗原能夠反映細胞增殖的活性，目前Ki-67指數已廣泛應用于臨床，是最好的細胞增殖標志物之一，主要表達于M期。Ki-67指數與腫瘤的生長、轉移及預后密切相關，在靜止細胞（G0期和G1早期）不表達，Ki-67表達的高低反映細胞增殖分裂的速度。目前甲狀腺癌中PTEN和Ki-67基因的相關研究較少。本研究分別通過免疫組織化學方法和RT-PCR法檢測PTEN、Ki-67蛋白及mRNA在甲狀腺癌及其相應癌旁組織中的表達，并探討其蛋白表達與原發性甲狀腺癌患者一般情況及臨床病理參數的關系，為甲狀腺癌基因治療尋找新靶點。
1 資料與方法
1.1 標本來源
收集甘肅省天水市第一人民醫院2012年9月至2015年3月期間手術切除后經病理證實為原發性甲狀腺癌的石蠟包埋癌組織標本40例，其中乳頭狀癌24例，濾泡狀癌8例，髓樣癌5例，未分化癌3例；男11例，女29例；年齡22～80歲，平均48.25歲。同時取其距離癌組織1 cm處的甲狀腺癌旁組織40例作為對照。以上標本均經10%中性甲醛固定后石蠟包埋。另選取14例經術中冰凍切片病理證實為甲狀腺癌且術后經病理也證實為原發性甲狀腺癌的離體組織標本，其中乳頭狀癌11例，濾泡狀癌2例，髓樣癌1例；同時取其相應距離癌組織1 cm處甲狀腺癌旁組織作為對照，取材后20 min內迅速保存在液氮中，隨后放置于-70 ℃冰箱。所有病例術前均未行放、化療或免疫治療。所有石蠟標本均經重新HE染色進行確診、分類，并對甲狀腺癌標本再次進行組織學分級、臨床分期及淋巴結轉移情況的確定并做表格統計。
1.2 主要試劑
一抗兔抗人PTEN抗體和一抗兔抗人Ki-67抗體均購于北京鼎國生物技術有限公司；SP免疫組織化學試劑盒和DAB顯色試劑盒均購于北京博奧森生物技術有限公司；Trizol總RNA抽提試劑購自美國Invitrogen公司；RNA逆轉錄試劑盒購自日本Takara公司。
1.3 用免疫組織化學SP法檢測PTEN和Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織及其相應癌旁組織中的表達
1.3.1 SP方法
操作步驟嚴格按照說明書進行。主要步驟為：烤片后常規二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，消除內源性過氧化物酶的干擾，抗原修復，羊血清試劑封閉，每例標本取3張切片分別滴加1滴PTEN （用PBS稀釋比例為1 : 200）和Ki-67（用PBS稀釋比例為1 : 200）一抗，4 ℃冰箱保存過夜。取出過夜的切片，用PBS沖洗，每張切片滴加1滴生物素標記二抗孵育后用PBS沖洗，每張切片滴加1滴辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，用PBS沖洗后DAB顯色液顯色，顯微鏡下監測顯色過程，切片中發現棕黃色顯色，用自來水沖洗，終止反應；顯色后的切片在蘇木精溶液中復染，鹽酸乙醇分化返藍、脫水，應用中性樹膠封片，在顯微鏡下觀察并判斷結果。
1.3.2 染色結果判定[3 ]
采用雙盲法，由兩位高年資的病理學專家分別進行鑒定。① PTEN主要在細胞漿中表達，陰性為完全無著色，陽性為胞漿內出現棕黃色顆粒顯色。② Ki-67主要表達在癌細胞的細胞核及細胞漿，以細胞核和（或）細胞漿出現棕黃色顆粒顯色為Ki-67蛋白陽性表達，陰性為未見染色顆粒。
1.4 用RT-PCR方法檢測PTEN mRNA和Ki-67 mRNA在甲狀腺癌組織及其相應癌旁組織中的表達
用Trizol法提取RNA，逆轉錄合成cDNA，逆轉錄好的cDNA模版于-20 ℃冰箱保存。隨后對PCR后的樣品進行凝膠電泳，電泳完畢后小心取出凝膠，用紫外凝膠成像分析儀照相，用Quantity One 軟件進行灰度分析。
1.5 統計學方法
采用SPSS 13.0統計軟件對數據進行分析。計數資料采用四格表資料的χ2檢驗或Fisher精確檢驗，計量資料采用t檢驗。PTEN與Ki-67相關性分析采用Spearman等級相關分析法。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 PTEN和Ki-67蛋白在甲狀腺組織中的表達結果
免疫組織化學方法檢測PTEN和 Ki-67蛋白在甲狀腺癌及其相應的癌旁組織中的表達結果見圖 1、2，PTEN蛋白主要在細胞漿中呈棕黃色顆粒陽性表達，Ki-67蛋白主要在癌細胞的細胞核及細胞漿中呈棕黃色顆粒陽性表達。PTEN蛋白在甲狀腺癌組織中的表達陽性率明顯低于其在相應的甲狀腺癌旁組織中的表達陽性率（P=0.025），而Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的表達陽性率明顯高于其在相應的甲狀腺癌旁組織中的表達陽性率（P=0.007），見表 1。
表1
PTEN和 Ki-67蛋白在甲狀腺癌及其相應的癌旁組織中的表達 〔例（%）〕
圖1
PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的陽性表達（SP ×200）。1A：PTEN蛋白；1B：Ki-67蛋白 ? ?2.2 PTEN mRNA和Ki-67 mRNA在甲狀腺癌組織中及其相應癌旁組織的表達結果
RT-PCR法檢測PTEN mRNA和Ki-67 mRNA在甲狀腺癌及其相應的癌旁組織中表達的定性結果見圖 3。PTEN mRNA表達相對灰度值在14例甲狀腺癌組織中明顯低于其在相應的癌旁組織中的表達（0.225 7±0.036 3比0.503 6±0.037 5，t=-19.905，P＜0.05）。Ki-67 mRNA表達相對灰度值在14例甲狀腺癌組織中明顯高于其在相應的甲狀腺癌旁組織中的表達（1.212 1±0.042 1比0.293 6±0.027 4，t=68.469，P＜0.05）。
圖3
RT-PCR法檢測PTEN mRNA和Ki-67 mRNA在甲狀腺癌組織及其相應癌旁組織中的定性表達結果。3A：PTEN mRNA；3B：Ki-67 mRNA。M：Marker；泳道1、3、5、7、9、11、13為甲狀腺癌組織；泳道2、4、6、8、10、12、14為甲狀腺癌旁組織
2.3 PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與甲狀腺癌患者臨床病理特征的關系
PTEN蛋白和Ki-67蛋白表達均與甲狀腺癌的組織學分級、病理類型、腫瘤分期及有無區域淋巴結轉移有關（P＜0.05），即PTEN在甲狀腺癌組織中的蛋白表達陽性率隨著組織學分級和腫瘤分期的增高而降低（P＜0.05），在有區域淋巴結轉移者中明顯低于無轉移者（P＜0.05），在乳頭狀癌和濾泡癌中的表達明顯高于其在髓樣癌和未分化癌中的表達（P＜0.05）；Ki-67在甲狀腺癌組織中的蛋白表達隨著組織學分級和腫瘤分期的增高而增加（P＜0.05），在有區域淋巴結轉移者中明顯高于無區域淋巴結轉移者（P＜0.05）。而PTEN蛋白和Ki-67蛋白表達與甲狀腺癌患者的性別、年齡及腫瘤包膜完整與否無關（P＞0.05）。見表 2。
表2
PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與甲狀腺癌患者的臨床病理參數的關系
2.4 PTEN蛋白表達和Ki-67蛋白表達在甲狀腺癌組織和甲狀腺癌旁組織中的相關性分析結果
在甲狀腺癌組織中PTEN蛋白表達與Ki-67蛋白表達呈明顯負相關（rs =-0.605，P=0.000），而在甲狀腺癌旁組織中PTEN蛋白表達與Ki-67蛋白表達無相關性（rs =-0.021，P=0.899），見表 3、4。
表3
甲狀腺癌組織中PTEN蛋白與Ki-67蛋白表達的相關性分析結果（例）
表4
甲狀腺癌旁組織中PTEN蛋白與Ki-67蛋白表達的相關性分析結果（例）
3 討論
近年來，全球大部分國家的甲狀腺癌發病率在快速上升，我國也是如此。統計資料[4]顯示，目前甲狀腺癌的發病率是30年前的2～3倍。甲狀腺癌的發生、發展是一個涉及多基因、多途徑及多步驟的復雜過程。惡性腫瘤的生長取決于腫瘤細胞增殖與凋亡的比例，而原癌基因和抑癌基因在后者發揮了重要的作用，抑癌基因的失活所導致的細胞失控增殖在腫瘤的發生、發展和轉歸上起著關鍵作用[5]。
PTEN抑癌基因（也稱MMAC1或TEP1） 自1997年被首次克隆定位后即成為研究熱點，其已在多種腫瘤中包括胃癌、卵巢癌、子宮內膜癌、乳腺癌、肺癌等進行了研究[6-10]，結果顯示，PTEN在調節腫瘤細胞的生長、分化、凋亡、浸潤、轉移、腫瘤血管生成等各方面均具有重要作用。
本研究首先采用免疫組織化學方法檢測PTEN蛋白在甲狀腺癌及其相應癌旁組織的表達情況，結果顯示，PTEN蛋白在甲狀腺癌組織中表達減弱或缺失，其在甲狀腺癌組織中的表達陽性率明顯低于其在相應癌旁組織中的表達（P＜0.05）；我們還采用RT-PCR法檢測了PTEN mRNA在甲狀腺癌及其相應癌旁組織的表達情況，結果也顯示，PTEN mRNA在甲狀腺癌中的表達明顯低于其在相應癌旁組織中的表達（P＜0.05）。從蛋白層面和基因層面的檢測結果相吻合，結果提示，PTEN表達減弱或缺失可能與甲狀腺癌的發生和發展有關。為了進一步了解PTEN在哪些類型甲狀腺患者的腫瘤標本中低表達，我們分析了其蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與其臨床病理特征的關系，結果發現，隨著組織學分級升高，PTEN蛋白表達隨之減少；與甲狀腺癌的病理類型密切相關，在乳頭狀癌中陽性率最高，濾泡癌次之，在髓樣癌和未分化癌中未見表達；隨著臨床分期越晚，PTEN蛋白表達就越低；在有淋巴結轉移的甲狀腺癌組織中PTEN蛋白表達陽性率明顯低于其在無淋巴結轉移甲狀腺癌組織中的表達陽性率，可能與PTEN參與調節細胞的黏附和遷移，從而負調節腫瘤細胞的遷移和浸潤有關。此外，PTEN蛋白表達與甲狀腺癌的不同性別、不同年齡及包膜是否完整無關。由此可見，組織分級越高、臨床分期越晚、惡性程度越高的甲狀腺癌，其PTEN蛋白表達更低。由此推測，在甲狀腺癌的發病中該基因的缺失表達可能是一個晚期事件。
Ki-67是一個反映細胞增殖活性的核標志物，存在于細胞周期的G1后期、S、G2和M期，其檢測結果優于增殖細胞核抗原[11]。本研究首先采用免疫組織化學方法檢測Ki-67蛋白在甲狀腺癌及其相應癌旁組織的表達情況，結果顯示，Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的表達陽性率明顯高于其在相應癌旁組織中的表達陽性率（P＜0.05）；我們還采用RT-PCR法檢測了Ki-67 mRNA在甲狀腺癌及其相應癌旁組織的表達情況，結果顯示，Ki-67 mRNA在甲狀腺癌中的表達明顯高于其在相應癌旁組織中的表達（P＜0.05）。
從蛋白層面和基因層面的檢測結果相吻合，結果提示，在甲狀腺癌中，細胞增殖水平提高。為了進一步了解Ki-67蛋白在哪些類型甲狀腺患者的腫瘤標本中高表達，我們分析了其蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與其臨床病理特征的關系，結果發現，隨著組織學分級升高，Ki-67蛋白表達隨之增高；與甲狀腺癌的病理類型密切相關，在未分化癌中陽性率最高，乳頭狀癌中次之，濾泡癌中未見表達；隨著臨床分期越晚，Ki-67蛋白表達就越高；在有淋巴結轉移的甲狀腺癌組織中Ki-67蛋白表達陽性率明顯高于其在無淋巴結轉移甲狀腺癌組織中的表達陽性率。Ki-67蛋白表達與甲狀腺癌的不同性別、不同年齡及包膜是否完整無關。Ki-67可以反映細胞的增殖情況，結果提示，甲狀腺細胞的增殖狀態與甲狀腺癌的發生和發展有密切關系。Ki-67陽性率越高，甲狀腺癌的組織分級越高、臨床分期越晚、惡性程度越高，提示Ki-67表達陽性率可能作為判斷甲狀腺癌生物學行為的指標之一，與腫瘤的分化程度、浸潤轉移以及預后密切相關，可能作為腫瘤的診斷和預后中的一種重要標志物。
本研究還發現，甲狀腺癌中PTEN與Ki-67蛋白表達呈明顯負相關（rs =-0.605，P=0.000），這可能是PTEN缺失導致甲狀腺癌細胞偏離了正常的生長軌道，使腫瘤細胞表現出增殖活性增強，促進了Ki-67表達的增加[12-13]。推測PTEN表達下降后，其抑癌機制的喪失促進細胞進入分裂周期，從而增強腫瘤細胞的增殖活性，Ki-67的表達相應明顯增加。
總之，腫瘤是與基因表達異常緊密相關的疾病，腫瘤的發生、發展與諸多基因的表達異常有關，其中包括原癌基因的異常激活、抑癌基因的失活或轉錄失調、DNA修復基因以及凋亡調節基因的異常表達[14-15]。細胞凋亡異常在很多惡性腫瘤如淋巴瘤、乳腺癌、肝癌、肺癌、卵巢癌等的發病中起著重要作用[3-4, 16]。PTEN和Ki-67在甲狀腺癌不同分化程度、局部浸潤、淋巴結和遠處轉移方面存在差異，若兩者聯合檢測，能比較準確地反映甲狀腺癌的生物學特性，可以為判斷細胞的增殖活性提供依據，有助于指導臨床治療和預后的判斷。
近年來，甲狀腺癌的發病率有逐年上升的趨勢，特別近30年以來，我國沿海地區甲狀腺癌的發病率明顯上升[1]。甲狀腺癌的發生、發展是一個涉及多基因、多途徑及多步驟的復雜過程。惡性腫瘤的生長取決于腫瘤細胞增殖與細胞凋亡的比例，而原癌基因和抑癌基因在后者發揮了重要的作用。PTEN基因定位于染色體10q23.3，其編碼的腫瘤抑制因子，能夠阻止腫瘤細胞的生長和分化，并調控細胞分裂周期[2]。Ki-67抗原能夠反映細胞增殖的活性，目前Ki-67指數已廣泛應用于臨床，是最好的細胞增殖標志物之一，主要表達于M期。Ki-67指數與腫瘤的生長、轉移及預后密切相關，在靜止細胞（G0期和G1早期）不表達，Ki-67表達的高低反映細胞增殖分裂的速度。目前甲狀腺癌中PTEN和Ki-67基因的相關研究較少。本研究分別通過免疫組織化學方法和RT-PCR法檢測PTEN、Ki-67蛋白及mRNA在甲狀腺癌及其相應癌旁組織中的表達，并探討其蛋白表達與原發性甲狀腺癌患者一般情況及臨床病理參數的關系，為甲狀腺癌基因治療尋找新靶點。
1 資料與方法
1.1 標本來源
收集甘肅省天水市第一人民醫院2012年9月至2015年3月期間手術切除后經病理證實為原發性甲狀腺癌的石蠟包埋癌組織標本40例，其中乳頭狀癌24例，濾泡狀癌8例，髓樣癌5例，未分化癌3例；男11例，女29例；年齡22～80歲，平均48.25歲。同時取其距離癌組織1 cm處的甲狀腺癌旁組織40例作為對照。以上標本均經10%中性甲醛固定后石蠟包埋。另選取14例經術中冰凍切片病理證實為甲狀腺癌且術后經病理也證實為原發性甲狀腺癌的離體組織標本，其中乳頭狀癌11例，濾泡狀癌2例，髓樣癌1例；同時取其相應距離癌組織1 cm處甲狀腺癌旁組織作為對照，取材后20 min內迅速保存在液氮中，隨后放置于-70 ℃冰箱。所有病例術前均未行放、化療或免疫治療。所有石蠟標本均經重新HE染色進行確診、分類，并對甲狀腺癌標本再次進行組織學分級、臨床分期及淋巴結轉移情況的確定并做表格統計。
1.2 主要試劑
一抗兔抗人PTEN抗體和一抗兔抗人Ki-67抗體均購于北京鼎國生物技術有限公司；SP免疫組織化學試劑盒和DAB顯色試劑盒均購于北京博奧森生物技術有限公司；Trizol總RNA抽提試劑購自美國Invitrogen公司；RNA逆轉錄試劑盒購自日本Takara公司。
1.3 用免疫組織化學SP法檢測PTEN和Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織及其相應癌旁組織中的表達
1.3.1 SP方法
操作步驟嚴格按照說明書進行。主要步驟為：烤片后常規二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，消除內源性過氧化物酶的干擾，抗原修復，羊血清試劑封閉，每例標本取3張切片分別滴加1滴PTEN （用PBS稀釋比例為1 : 200）和Ki-67（用PBS稀釋比例為1 : 200）一抗，4 ℃冰箱保存過夜。取出過夜的切片，用PBS沖洗，每張切片滴加1滴生物素標記二抗孵育后用PBS沖洗，每張切片滴加1滴辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，用PBS沖洗后DAB顯色液顯色，顯微鏡下監測顯色過程，切片中發現棕黃色顯色，用自來水沖洗，終止反應；顯色后的切片在蘇木精溶液中復染，鹽酸乙醇分化返藍、脫水，應用中性樹膠封片，在顯微鏡下觀察并判斷結果。
1.3.2 染色結果判定[3 ]
采用雙盲法，由兩位高年資的病理學專家分別進行鑒定。① PTEN主要在細胞漿中表達，陰性為完全無著色，陽性為胞漿內出現棕黃色顆粒顯色。② Ki-67主要表達在癌細胞的細胞核及細胞漿，以細胞核和（或）細胞漿出現棕黃色顆粒顯色為Ki-67蛋白陽性表達，陰性為未見染色顆粒。
1.4 用RT-PCR方法檢測PTEN mRNA和Ki-67 mRNA在甲狀腺癌組織及其相應癌旁組織中的表達
用Trizol法提取RNA，逆轉錄合成cDNA，逆轉錄好的cDNA模版于-20 ℃冰箱保存。隨后對PCR后的樣品進行凝膠電泳，電泳完畢后小心取出凝膠，用紫外凝膠成像分析儀照相，用Quantity One 軟件進行灰度分析。
1.5 統計學方法
采用SPSS 13.0統計軟件對數據進行分析。計數資料采用四格表資料的χ2檢驗或Fisher精確檢驗，計量資料采用t檢驗。PTEN與Ki-67相關性分析采用Spearman等級相關分析法。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 PTEN和Ki-67蛋白在甲狀腺組織中的表達結果
免疫組織化學方法檢測PTEN和 Ki-67蛋白在甲狀腺癌及其相應的癌旁組織中的表達結果見圖 1、2，PTEN蛋白主要在細胞漿中呈棕黃色顆粒陽性表達，Ki-67蛋白主要在癌細胞的細胞核及細胞漿中呈棕黃色顆粒陽性表達。PTEN蛋白在甲狀腺癌組織中的表達陽性率明顯低于其在相應的甲狀腺癌旁組織中的表達陽性率（P=0.025），而Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的表達陽性率明顯高于其在相應的甲狀腺癌旁組織中的表達陽性率（P=0.007），見表 1。
表1
PTEN和 Ki-67蛋白在甲狀腺癌及其相應的癌旁組織中的表達 〔例（%）〕
圖1
PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的陽性表達（SP ×200）。1A：PTEN蛋白；1B：Ki-67蛋白 ? ?2.2 PTEN mRNA和Ki-67 mRNA在甲狀腺癌組織中及其相應癌旁組織的表達結果
RT-PCR法檢測PTEN mRNA和Ki-67 mRNA在甲狀腺癌及其相應的癌旁組織中表達的定性結果見圖 3。PTEN mRNA表達相對灰度值在14例甲狀腺癌組織中明顯低于其在相應的癌旁組織中的表達（0.225 7±0.036 3比0.503 6±0.037 5，t=-19.905，P＜0.05）。Ki-67 mRNA表達相對灰度值在14例甲狀腺癌組織中明顯高于其在相應的甲狀腺癌旁組織中的表達（1.212 1±0.042 1比0.293 6±0.027 4，t=68.469，P＜0.05）。
圖3
RT-PCR法檢測PTEN mRNA和Ki-67 mRNA在甲狀腺癌組織及其相應癌旁組織中的定性表達結果。3A：PTEN mRNA；3B：Ki-67 mRNA。M：Marker；泳道1、3、5、7、9、11、13為甲狀腺癌組織；泳道2、4、6、8、10、12、14為甲狀腺癌旁組織
2.3 PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與甲狀腺癌患者臨床病理特征的關系
PTEN蛋白和Ki-67蛋白表達均與甲狀腺癌的組織學分級、病理類型、腫瘤分期及有無區域淋巴結轉移有關（P＜0.05），即PTEN在甲狀腺癌組織中的蛋白表達陽性率隨著組織學分級和腫瘤分期的增高而降低（P＜0.05），在有區域淋巴結轉移者中明顯低于無轉移者（P＜0.05），在乳頭狀癌和濾泡癌中的表達明顯高于其在髓樣癌和未分化癌中的表達（P＜0.05）；Ki-67在甲狀腺癌組織中的蛋白表達隨著組織學分級和腫瘤分期的增高而增加（P＜0.05），在有區域淋巴結轉移者中明顯高于無區域淋巴結轉移者（P＜0.05）。而PTEN蛋白和Ki-67蛋白表達與甲狀腺癌患者的性別、年齡及腫瘤包膜完整與否無關（P＞0.05）。見表 2。
表2
PTEN蛋白和Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與甲狀腺癌患者的臨床病理參數的關系
2.4 PTEN蛋白表達和Ki-67蛋白表達在甲狀腺癌組織和甲狀腺癌旁組織中的相關性分析結果
在甲狀腺癌組織中PTEN蛋白表達與Ki-67蛋白表達呈明顯負相關（rs =-0.605，P=0.000），而在甲狀腺癌旁組織中PTEN蛋白表達與Ki-67蛋白表達無相關性（rs =-0.021，P=0.899），見表 3、4。
表3
甲狀腺癌組織中PTEN蛋白與Ki-67蛋白表達的相關性分析結果（例）
表4
甲狀腺癌旁組織中PTEN蛋白與Ki-67蛋白表達的相關性分析結果（例）
3 討論
近年來，全球大部分國家的甲狀腺癌發病率在快速上升，我國也是如此。統計資料[4]顯示，目前甲狀腺癌的發病率是30年前的2～3倍。甲狀腺癌的發生、發展是一個涉及多基因、多途徑及多步驟的復雜過程。惡性腫瘤的生長取決于腫瘤細胞增殖與凋亡的比例，而原癌基因和抑癌基因在后者發揮了重要的作用，抑癌基因的失活所導致的細胞失控增殖在腫瘤的發生、發展和轉歸上起著關鍵作用[5]。
PTEN抑癌基因（也稱MMAC1或TEP1） 自1997年被首次克隆定位后即成為研究熱點，其已在多種腫瘤中包括胃癌、卵巢癌、子宮內膜癌、乳腺癌、肺癌等進行了研究[6-10]，結果顯示，PTEN在調節腫瘤細胞的生長、分化、凋亡、浸潤、轉移、腫瘤血管生成等各方面均具有重要作用。
本研究首先采用免疫組織化學方法檢測PTEN蛋白在甲狀腺癌及其相應癌旁組織的表達情況，結果顯示，PTEN蛋白在甲狀腺癌組織中表達減弱或缺失，其在甲狀腺癌組織中的表達陽性率明顯低于其在相應癌旁組織中的表達（P＜0.05）；我們還采用RT-PCR法檢測了PTEN mRNA在甲狀腺癌及其相應癌旁組織的表達情況，結果也顯示，PTEN mRNA在甲狀腺癌中的表達明顯低于其在相應癌旁組織中的表達（P＜0.05）。從蛋白層面和基因層面的檢測結果相吻合，結果提示，PTEN表達減弱或缺失可能與甲狀腺癌的發生和發展有關。為了進一步了解PTEN在哪些類型甲狀腺患者的腫瘤標本中低表達，我們分析了其蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與其臨床病理特征的關系，結果發現，隨著組織學分級升高，PTEN蛋白表達隨之減少；與甲狀腺癌的病理類型密切相關，在乳頭狀癌中陽性率最高，濾泡癌次之，在髓樣癌和未分化癌中未見表達；隨著臨床分期越晚，PTEN蛋白表達就越低；在有淋巴結轉移的甲狀腺癌組織中PTEN蛋白表達陽性率明顯低于其在無淋巴結轉移甲狀腺癌組織中的表達陽性率，可能與PTEN參與調節細胞的黏附和遷移，從而負調節腫瘤細胞的遷移和浸潤有關。此外，PTEN蛋白表達與甲狀腺癌的不同性別、不同年齡及包膜是否完整無關。由此可見，組織分級越高、臨床分期越晚、惡性程度越高的甲狀腺癌，其PTEN蛋白表達更低。由此推測，在甲狀腺癌的發病中該基因的缺失表達可能是一個晚期事件。
Ki-67是一個反映細胞增殖活性的核標志物，存在于細胞周期的G1后期、S、G2和M期，其檢測結果優于增殖細胞核抗原[11]。本研究首先采用免疫組織化學方法檢測Ki-67蛋白在甲狀腺癌及其相應癌旁組織的表達情況，結果顯示，Ki-67蛋白在甲狀腺癌組織中的表達陽性率明顯高于其在相應癌旁組織中的表達陽性率（P＜0.05）；我們還采用RT-PCR法檢測了Ki-67 mRNA在甲狀腺癌及其相應癌旁組織的表達情況，結果顯示，Ki-67 mRNA在甲狀腺癌中的表達明顯高于其在相應癌旁組織中的表達（P＜0.05）。
從蛋白層面和基因層面的檢測結果相吻合，結果提示，在甲狀腺癌中，細胞增殖水平提高。為了進一步了解Ki-67蛋白在哪些類型甲狀腺患者的腫瘤標本中高表達，我們分析了其蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與其臨床病理特征的關系，結果發現，隨著組織學分級升高，Ki-67蛋白表達隨之增高；與甲狀腺癌的病理類型密切相關，在未分化癌中陽性率最高，乳頭狀癌中次之，濾泡癌中未見表達；隨著臨床分期越晚，Ki-67蛋白表達就越高；在有淋巴結轉移的甲狀腺癌組織中Ki-67蛋白表達陽性率明顯高于其在無淋巴結轉移甲狀腺癌組織中的表達陽性率。Ki-67蛋白表達與甲狀腺癌的不同性別、不同年齡及包膜是否完整無關。Ki-67可以反映細胞的增殖情況，結果提示，甲狀腺細胞的增殖狀態與甲狀腺癌的發生和發展有密切關系。Ki-67陽性率越高，甲狀腺癌的組織分級越高、臨床分期越晚、惡性程度越高，提示Ki-67表達陽性率可能作為判斷甲狀腺癌生物學行為的指標之一，與腫瘤的分化程度、浸潤轉移以及預后密切相關，可能作為腫瘤的診斷和預后中的一種重要標志物。
本研究還發現，甲狀腺癌中PTEN與Ki-67蛋白表達呈明顯負相關（rs =-0.605，P=0.000），這可能是PTEN缺失導致甲狀腺癌細胞偏離了正常的生長軌道，使腫瘤細胞表現出增殖活性增強，促進了Ki-67表達的增加[12-13]。推測PTEN表達下降后，其抑癌機制的喪失促進細胞進入分裂周期，從而增強腫瘤細胞的增殖活性，Ki-67的表達相應明顯增加。
總之，腫瘤是與基因表達異常緊密相關的疾病，腫瘤的發生、發展與諸多基因的表達異常有關，其中包括原癌基因的異常激活、抑癌基因的失活或轉錄失調、DNA修復基因以及凋亡調節基因的異常表達[14-15]。細胞凋亡異常在很多惡性腫瘤如淋巴瘤、乳腺癌、肝癌、肺癌、卵巢癌等的發病中起著重要作用[3-4, 16]。PTEN和Ki-67在甲狀腺癌不同分化程度、局部浸潤、淋巴結和遠處轉移方面存在差異，若兩者聯合檢測，能比較準確地反映甲狀腺癌的生物學特性，可以為判斷細胞的增殖活性提供依據，有助于指導臨床治療和預后的判斷。
