引用本文： 陽丹才讓, 邵軍, 張洋, 任利, 候立朝, 王海久, 周瀛, 王虎, 樊海寧. IL-17及IL-27在泡型肝包蟲病患者肝組織中的表達. 中國普外基礎與臨床雜志, 2016, 23(8): 944-947. doi: 10.7507/1007-9424.20160247 復制
泡型肝包蟲病是由多房棘球蚴感染所引起的特殊類型的肝臟寄生蟲疾病，約占人體包蟲病總數的1.40%～1.76% [1]。泡型肝包蟲病呈浸潤性生長，酷似惡性腫瘤，故有“寄生蟲性肝癌”和“蟲癌”之稱[2]。盡管關于泡型肝包蟲病進展的分子機制仍不明確，但有大量基礎研究[3-7]結果提示炎癥與免疫相關因子參與其進展。因此，本研究以白細胞介素（IL）-17與IL-27為切入點，探討泡型肝包蟲病患者術后病灶邊緣帶肝組織中及病灶帶正常肝組織中IL-17及IL-27的表達。
1 資料與方法
1.1 納入和排除標準
納入標準：①術前結合臨床、影像學及術后病理診斷為肝泡球蚴病；②初次接受半肝切除術；③術前未發現遠處臟器轉移；④未合并囊性肝包蟲病；⑤既往無急、慢性肝炎等肝功能受損史。
排除標準：①合并原發性肝癌、肝血管瘤等其他肝臟占位性疾病者；②既往有自身免疫性疾病及風濕性疾病者；③術前發現有遠處臟器轉移者；④有嚴重肝功能障礙甚至肝功能衰竭且術前無法糾正而不能耐受手術者；⑤有感染性疾病，如肺部及呼吸道感染、高熱等；⑥既往或目前患有病毒性肝炎等肝臟疾病者；⑦排除全肝占位性疾病、嚴重肝硬化等無法進行手術切除者。
1.2 臨床資料
根據納入和排除標準，選擇了青海大學附屬醫院肝膽胰外科肝泡球蚴病手術患者20例，其中男8例，女12例；年齡15～55歲，平均35歲。每例患者留取邊緣帶組織及病灶旁正常肝組織，邊緣帶組織為離病灶邊緣0.5 cm，病灶旁正常肝組織為距離病灶邊緣5 cm處。搜集相應的手術病理標本保存于-80 ℃超低溫冰箱冷藏。
1.3 免疫組織化學方法及結果判定方法
1.3.1 方法
將收集的泡型肝包蟲病患者的邊緣帶組織及其病灶旁正常肝組織用石蠟包埋，并制作成3 μm厚切片，采用免疫組織化學SP法進行染色，IL-17抗體與IL-27抗體（邁新生物公司，羊抗鼠/兔，KIT-0305）在光學顯微鏡（motic, DMB5-2231P1型）下觀察IL-17及IL-27的表達情況。
1.3.2 鏡檢及結果判定
將染色后的切片于高倍鏡下行組織形態學檢查，病理結果由兩位病理醫師采用盲法獨立檢測，在高倍鏡（×400）下讀片。每張切片隨機觀察10個視野（不足10個視野的按實際觀察到的視野計數），根據陽染細胞所占百分比及細胞染色強度綜合判定，陽性染色細胞百分比 < 10%為0分，10%～40%為1分，41%～70%為2分，≥70%為3分；染色不著色或著色不明顯為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。最終評分以兩評分相加，≤2分記為陰性， > 2分記為陽性。
1.4 統計學方法
采用SPSS 17.0統計學分析軟件對數據進行分析。陽性率的比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。
2 結果
IL-17和IL-27在泡型肝包蟲病的邊緣帶及病灶旁正常肝組織的蛋白表達結果見圖 1。IL-17蛋白表達陽性率在邊緣帶肝組織中明顯高于病灶旁正常肝組織，差異有統計學意義〔80.0%（16/20）比10.0%（2/20），χ2=12.36，P < 0.01〕；IL-27蛋白表達陽性率在邊緣帶肝組織中明顯高于病灶旁正常肝組織，差異有統計學意義〔85.0%（17/20）比20.0%（4/20），χ2=12.36，P < 0.01〕。
圖1
免疫組織化學方法檢測IL-17和IL-27蛋白在泡型肝包蟲病的邊緣帶肝組織及病灶旁正常肝組織中的表達結果（SP??×400）。1A：IL-17在邊緣帶肝組織中的表達；1B：IL-17在病灶旁正常肝組織中的表達；1C：IL-27在邊緣帶肝組織中的表達；1D：IL-27在病灶旁正常肝組織中的表達
3 討論
泡型肝包蟲病是一種致死性人畜共患寄生蟲病，主要流行于廣大畜牧區[8-11]，發病率近年來呈上升趨勢，是亟待解決的健康難題。泡型肝包蟲病主要通過機械性壓迫、毒性反應、對肝臟的侵蝕等造成損傷，患者早期無特殊癥狀，出現癥狀時已屬晚期，病灶多侵犯鄰近組織器官和（或）發生遠處轉移，從而失去了最佳手術時機，藥物和手術的治療效果均欠佳，10年病死率高達95%，給治療帶來了相當大的困難。因此，探索參與泡型肝包蟲病進展的分子進而尋找潛在分子治療靶點是目前研究的熱點話題。
隨著越來越多的與泡球蚴相關的細胞因子相繼被發現，Th17細胞在自身免疫性疾病、腫瘤的發生及炎癥性疾病中的作用得到越來越多學者的證實及廣泛關注。IL-17作為Th17細胞分泌的細胞因子之一自然引起了眾多學者濃厚的研究興趣。目前研究較多的為骨橋蛋白[12-13]、IL-6、IL-10、干擾素-γ及腫瘤壞死因子-α，發現這些細胞因子可能與泡型肝包蟲病的侵襲、轉移或包蟲所致肝損害有一定關系[14]。IL-17是一種促炎癥細胞因子，是溝通固有免疫與適應免疫功能的橋梁。IL-17主要通過激活ERK、JNK、P38等信號通路，從而發揮其生物學功能[15-16]。IL-17在類風濕性關節炎[17]、炎癥性腸病[18]、哮喘[19]、肝硬化[20]等疾病中發揮重要作用，而IL-17在惡性腫瘤的發生、發展中的作用可能是雙向作用[21]。施沛青等[22]認為，IL-17在腫瘤的發生中既有發揮促進腫瘤生長的作用，又有間接起到抗腫瘤的作用。
近年來，IL-27在多種疾病中的作用已得到許多學者的認同及證實。IL-27在不同細胞激活不同的Jak/START通路，產生不同的生物學效應[23]。郭月英等[24]認為，在自身免疫性疾病中，IL-27具有免疫促進及免疫抑制的雙重作用；在感染性疾病中，IL-27具有促炎和抗炎雙重作用；此外，IL-27在抗腫瘤免疫中也起到重要作用[25]。
Rigano等[26]曾報道，Th1型免疫應答有利于宿主清除包蟲，而Th2型模式有利于蟲體寄生且與易感性有關。Th1/Th2免疫應答平衡在棘球蚴導致免疫逃避過程中起很重要的作用[27]。馬爾旦·馬合木等[28]應用實時熒光定量PCR技術檢測發現IL-17 mRNA在泡型肝包蟲病患者的肝臟病灶組織中表達明顯升高，可能與棘球蚴感染過程中所致免疫損傷和炎性肉芽腫形成有關。有文獻[29]報道，炎性反應早期，IL-27具有誘導Th1促炎性反應作用，可以促進T細胞、NK細胞、肥大細胞和單核細胞活化增生產生炎性細胞因子，促進炎性反應。同時在一些感染發展過程中IL-27能限制慢性炎性反應造成的病理損害。在本研究中，泡型肝包蟲病的邊緣帶肝組織中IL-17及IL-27蛋白表達陽性率較病灶旁正常肝組織均明顯升高，差異有統計學意義（P < 0.01）。結果提示，IL-17及IL-27蛋白在邊緣帶肝組織的高表達可能在泡型肝包蟲病的進展中扮演重要角色。
綜上所述，IL-17生物學作用廣泛，參與多種疾病的發生、發展且在腫瘤的發生中具有雙重作用，而IL-27同樣在多種疾病中發揮著促炎和抗炎雙重作用。由此我們可以看出，IL-17與IL-27有著類似的免疫學作用。在本研究中我們發現，IL-17及IL-27在泡球蚴感染患者邊緣帶肝組織中高表達，這種高表達可能參與泡型肝包蟲病的進展并發揮相應免疫學作用。由于本研究樣本量相對較少，標本采集及制備過程可能存在差異。因此，對于IL-17及IL-27的在泡型肝包蟲病中表達的相應免疫學作用仍需在進一步研究中得到完善。
泡型肝包蟲病是由多房棘球蚴感染所引起的特殊類型的肝臟寄生蟲疾病，約占人體包蟲病總數的1.40%～1.76% [1]。泡型肝包蟲病呈浸潤性生長，酷似惡性腫瘤，故有“寄生蟲性肝癌”和“蟲癌”之稱[2]。盡管關于泡型肝包蟲病進展的分子機制仍不明確，但有大量基礎研究[3-7]結果提示炎癥與免疫相關因子參與其進展。因此，本研究以白細胞介素（IL）-17與IL-27為切入點，探討泡型肝包蟲病患者術后病灶邊緣帶肝組織中及病灶帶正常肝組織中IL-17及IL-27的表達。
1 資料與方法
1.1 納入和排除標準
納入標準：①術前結合臨床、影像學及術后病理診斷為肝泡球蚴病；②初次接受半肝切除術；③術前未發現遠處臟器轉移；④未合并囊性肝包蟲病；⑤既往無急、慢性肝炎等肝功能受損史。
排除標準：①合并原發性肝癌、肝血管瘤等其他肝臟占位性疾病者；②既往有自身免疫性疾病及風濕性疾病者；③術前發現有遠處臟器轉移者；④有嚴重肝功能障礙甚至肝功能衰竭且術前無法糾正而不能耐受手術者；⑤有感染性疾病，如肺部及呼吸道感染、高熱等；⑥既往或目前患有病毒性肝炎等肝臟疾病者；⑦排除全肝占位性疾病、嚴重肝硬化等無法進行手術切除者。
1.2 臨床資料
根據納入和排除標準，選擇了青海大學附屬醫院肝膽胰外科肝泡球蚴病手術患者20例，其中男8例，女12例；年齡15～55歲，平均35歲。每例患者留取邊緣帶組織及病灶旁正常肝組織，邊緣帶組織為離病灶邊緣0.5 cm，病灶旁正常肝組織為距離病灶邊緣5 cm處。搜集相應的手術病理標本保存于-80 ℃超低溫冰箱冷藏。
1.3 免疫組織化學方法及結果判定方法
1.3.1 方法
將收集的泡型肝包蟲病患者的邊緣帶組織及其病灶旁正常肝組織用石蠟包埋，并制作成3 μm厚切片，采用免疫組織化學SP法進行染色，IL-17抗體與IL-27抗體（邁新生物公司，羊抗鼠/兔，KIT-0305）在光學顯微鏡（motic, DMB5-2231P1型）下觀察IL-17及IL-27的表達情況。
1.3.2 鏡檢及結果判定
將染色后的切片于高倍鏡下行組織形態學檢查，病理結果由兩位病理醫師采用盲法獨立檢測，在高倍鏡（×400）下讀片。每張切片隨機觀察10個視野（不足10個視野的按實際觀察到的視野計數），根據陽染細胞所占百分比及細胞染色強度綜合判定，陽性染色細胞百分比 < 10%為0分，10%～40%為1分，41%～70%為2分，≥70%為3分；染色不著色或著色不明顯為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。最終評分以兩評分相加，≤2分記為陰性， > 2分記為陽性。
1.4 統計學方法
采用SPSS 17.0統計學分析軟件對數據進行分析。陽性率的比較采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。
2 結果
IL-17和IL-27在泡型肝包蟲病的邊緣帶及病灶旁正常肝組織的蛋白表達結果見圖 1。IL-17蛋白表達陽性率在邊緣帶肝組織中明顯高于病灶旁正常肝組織，差異有統計學意義〔80.0%（16/20）比10.0%（2/20），χ2=12.36，P < 0.01〕；IL-27蛋白表達陽性率在邊緣帶肝組織中明顯高于病灶旁正常肝組織，差異有統計學意義〔85.0%（17/20）比20.0%（4/20），χ2=12.36，P < 0.01〕。
圖1
免疫組織化學方法檢測IL-17和IL-27蛋白在泡型肝包蟲病的邊緣帶肝組織及病灶旁正常肝組織中的表達結果（SP??×400）。1A：IL-17在邊緣帶肝組織中的表達；1B：IL-17在病灶旁正常肝組織中的表達；1C：IL-27在邊緣帶肝組織中的表達；1D：IL-27在病灶旁正常肝組織中的表達
3 討論
泡型肝包蟲病是一種致死性人畜共患寄生蟲病，主要流行于廣大畜牧區[8-11]，發病率近年來呈上升趨勢，是亟待解決的健康難題。泡型肝包蟲病主要通過機械性壓迫、毒性反應、對肝臟的侵蝕等造成損傷，患者早期無特殊癥狀，出現癥狀時已屬晚期，病灶多侵犯鄰近組織器官和（或）發生遠處轉移，從而失去了最佳手術時機，藥物和手術的治療效果均欠佳，10年病死率高達95%，給治療帶來了相當大的困難。因此，探索參與泡型肝包蟲病進展的分子進而尋找潛在分子治療靶點是目前研究的熱點話題。
隨著越來越多的與泡球蚴相關的細胞因子相繼被發現，Th17細胞在自身免疫性疾病、腫瘤的發生及炎癥性疾病中的作用得到越來越多學者的證實及廣泛關注。IL-17作為Th17細胞分泌的細胞因子之一自然引起了眾多學者濃厚的研究興趣。目前研究較多的為骨橋蛋白[12-13]、IL-6、IL-10、干擾素-γ及腫瘤壞死因子-α，發現這些細胞因子可能與泡型肝包蟲病的侵襲、轉移或包蟲所致肝損害有一定關系[14]。IL-17是一種促炎癥細胞因子，是溝通固有免疫與適應免疫功能的橋梁。IL-17主要通過激活ERK、JNK、P38等信號通路，從而發揮其生物學功能[15-16]。IL-17在類風濕性關節炎[17]、炎癥性腸病[18]、哮喘[19]、肝硬化[20]等疾病中發揮重要作用，而IL-17在惡性腫瘤的發生、發展中的作用可能是雙向作用[21]。施沛青等[22]認為，IL-17在腫瘤的發生中既有發揮促進腫瘤生長的作用，又有間接起到抗腫瘤的作用。
近年來，IL-27在多種疾病中的作用已得到許多學者的認同及證實。IL-27在不同細胞激活不同的Jak/START通路，產生不同的生物學效應[23]。郭月英等[24]認為，在自身免疫性疾病中，IL-27具有免疫促進及免疫抑制的雙重作用；在感染性疾病中，IL-27具有促炎和抗炎雙重作用；此外，IL-27在抗腫瘤免疫中也起到重要作用[25]。
Rigano等[26]曾報道，Th1型免疫應答有利于宿主清除包蟲，而Th2型模式有利于蟲體寄生且與易感性有關。Th1/Th2免疫應答平衡在棘球蚴導致免疫逃避過程中起很重要的作用[27]。馬爾旦·馬合木等[28]應用實時熒光定量PCR技術檢測發現IL-17 mRNA在泡型肝包蟲病患者的肝臟病灶組織中表達明顯升高，可能與棘球蚴感染過程中所致免疫損傷和炎性肉芽腫形成有關。有文獻[29]報道，炎性反應早期，IL-27具有誘導Th1促炎性反應作用，可以促進T細胞、NK細胞、肥大細胞和單核細胞活化增生產生炎性細胞因子，促進炎性反應。同時在一些感染發展過程中IL-27能限制慢性炎性反應造成的病理損害。在本研究中，泡型肝包蟲病的邊緣帶肝組織中IL-17及IL-27蛋白表達陽性率較病灶旁正常肝組織均明顯升高，差異有統計學意義（P < 0.01）。結果提示，IL-17及IL-27蛋白在邊緣帶肝組織的高表達可能在泡型肝包蟲病的進展中扮演重要角色。
綜上所述，IL-17生物學作用廣泛，參與多種疾病的發生、發展且在腫瘤的發生中具有雙重作用，而IL-27同樣在多種疾病中發揮著促炎和抗炎雙重作用。由此我們可以看出，IL-17與IL-27有著類似的免疫學作用。在本研究中我們發現，IL-17及IL-27在泡球蚴感染患者邊緣帶肝組織中高表達，這種高表達可能參與泡型肝包蟲病的進展并發揮相應免疫學作用。由于本研究樣本量相對較少，標本采集及制備過程可能存在差異。因此，對于IL-17及IL-27的在泡型肝包蟲病中表達的相應免疫學作用仍需在進一步研究中得到完善。
