引用本文： 謝富佳, 楊歡, 張文敬, 岳建云, 柴琛, 魯彥, 曹農. 膿毒癥大鼠血清肝腎功及心肌酶譜的變化及意義. 中國普外基礎與臨床雜志, 2016, 23(2): 229-230. doi: 10.7507/1007-9424.20160060 復制
膿毒癥主要是指機體遭受細菌、病毒等病原微生物入侵，從而誘發的全身性炎性反應綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），是外科大手術、嚴重創傷或燒傷等常見的并發癥[1]。嚴重膿毒癥極易誘導繼發多臟器功能損害，也是膿毒癥患者死亡的最終原因。本研究旨在觀察膿毒癥大鼠血清谷丙轉氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，Cr）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）隨時間的變化特點，希望為膿毒癥患者肝、腎、心損傷的治療提供病理生理學依據，現報道如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物及主要試劑和儀器
1.1.1 實驗動物及分組
清潔級成年雄性Spargue-Dawley大鼠36只，體質量250～300 g，購自甘肅省中醫學院實驗動物中心[動物許可證：SCXK （甘）2011-0001]。大鼠在實驗室室溫24～26 ℃環境中適應性飼養1周，采用隨機數字表法分為假手術組（n=9）和盲腸穿刺結扎（CLP）組（n=27），CLP組根據術后取材時間不同分為6、12和24 h 3個亞組（n=9）。
1.1.2 主要試劑和儀器
ALT、BUN、Cr、CK和LDH檢測試劑盒均購自寧波瑞源生物科技有限公司（批號：20140409）。7600-020型全自動生化分析儀購自日本HITACHI公司。KDC-1044低速離心機購自安徽中科中佳科學儀器有限公司。
1.2 方法
1.2.1 膿毒癥大鼠模型制備
大鼠實驗前12 h禁食，自由飲水。以CLP法制備膿毒癥模型。大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉，仰臥位固定，碘伏消毒腹部皮膚2遍，鋪無菌洞巾。沿下腹部腹正中線做一約1.5 cm長切口，尋找盲腸并游離腸系膜，4-0絲線在回盲瓣遠端結扎盲腸側壁（避免結扎回腸及盲腸系膜血管），16號針頭貫穿盲腸2次，兩個部位相距約1 cm，輕輕擠壓盲腸至少量糞渣溢出。然后將盲腸放回腹腔，逐層縫合腹壁切口[2-3]。假手術組開腹后僅翻動盲腸。術后于腹部皮下注射無菌生理鹽水（30 mL/kg）以補充術中體液丟失。術后保持室溫在25 ℃，給予大鼠飼料和飲水。于CLP術后6、12及24 h取標本進行實驗。
1.2.2 標本處理
假手術組及CLP組大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉，頸動脈置管采血。血液室溫自然凝固2 h，3 000 r/min （r=30 cm）離心15 min，分離血清，-20 ℃保存備用。
1.2.3 內源性ALT、BUN、Cr、CK和LDH的測定
采用連續監測法測定血清中ALT，脲酶-谷氨酸脫氫酶法測定BUN，肌氨酸氧化酶法測定Cr，N-乙酰半胱氨酸法測定CK，乳酸→丙酮酸法測定LDH。所有的操作均由操作熟練的專門技術人員嚴格按照操作規程進行。
1.3 統計學方法
所有數據采用SPSS 17.0軟件做統計學處理，結果用均數±標準差（
2 結果
CLP術后不同時間，大鼠肝腎功及心肌酶譜變化結果見表 1。與假手術組比較，大鼠血清ALT、BUN、Cr、CK及LDH水平變化均隨時間延長逐漸升高，12 h時均達到最高水平，24 h時均開始下降，但仍高于假手術組（P<0.05）。
表1
CLP術后不同時相大鼠肝腎功及心肌酶譜變化結果（3 討論
膿毒癥按疾病嚴重程度可分為膿毒癥、嚴重膿毒癥及膿毒性休克。嚴重膿毒癥極易誘導繼發多臟器功能損害，也是膿毒癥患者死亡的最終原因。因此，對于膿毒癥的患者，我們須密切監測各器官功能狀態。
ALT體現了肝細胞損害和壞死情況，其增高幅度與肝功能損害程度密切相關，是衡量肝功能的一項重要指標[4]。血清ALT存在于肝細胞的線粒體中，膿毒癥時，內毒素致肝細胞線粒體超微結構損傷并出現功能障礙，肝細胞受損凋亡，致ALT顯著升高[5]。BUN和Cr是反映腎功能的經典指標，反映腎實質的受損程度。嚴重膿毒癥時，機體血壓降低，腎動脈灌注不足，加之炎性介質的作用，極易造成急性腎臟衰竭[6]。CK和LDH是診斷心肌梗死的常用指標，其上升幅度與梗死面積成正比[7]。嚴重膿毒癥時，毒素作用可致肌纖維的膜通透性異常或肌纖維損傷，大量CK釋放入血，CK顯著升高[8]。本研究結果表明，CLP大鼠血清中ALT、BUN、Cr、CK和LDH水平隨時間延長逐漸升高，且波動趨勢基本相同，12 h達到最高水平，24 h較12 h下降，提示CLP術后大鼠肝、心、腎功能逐漸受損，12 h功能障礙最明顯，12 h之后器官可能已發生不可逆病變。
綜上所述，CLP大鼠體內ALT、BUN、Cr、CK和LDH水平隨時間依賴性改變可反映膿毒癥的病理生理進展和嚴重程度，對膿毒癥病情的判斷及預后具有一定現實意義。
膿毒癥主要是指機體遭受細菌、病毒等病原微生物入侵，從而誘發的全身性炎性反應綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），是外科大手術、嚴重創傷或燒傷等常見的并發癥[1]。嚴重膿毒癥極易誘導繼發多臟器功能損害，也是膿毒癥患者死亡的最終原因。本研究旨在觀察膿毒癥大鼠血清谷丙轉氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，Cr）、肌酸激酶（creatine kinase，CK）和乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）隨時間的變化特點，希望為膿毒癥患者肝、腎、心損傷的治療提供病理生理學依據，現報道如下。
1 材料與方法
1.1 實驗動物及主要試劑和儀器
1.1.1 實驗動物及分組
清潔級成年雄性Spargue-Dawley大鼠36只，體質量250～300 g，購自甘肅省中醫學院實驗動物中心[動物許可證：SCXK （甘）2011-0001]。大鼠在實驗室室溫24～26 ℃環境中適應性飼養1周，采用隨機數字表法分為假手術組（n=9）和盲腸穿刺結扎（CLP）組（n=27），CLP組根據術后取材時間不同分為6、12和24 h 3個亞組（n=9）。
1.1.2 主要試劑和儀器
ALT、BUN、Cr、CK和LDH檢測試劑盒均購自寧波瑞源生物科技有限公司（批號：20140409）。7600-020型全自動生化分析儀購自日本HITACHI公司。KDC-1044低速離心機購自安徽中科中佳科學儀器有限公司。
1.2 方法
1.2.1 膿毒癥大鼠模型制備
大鼠實驗前12 h禁食，自由飲水。以CLP法制備膿毒癥模型。大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉，仰臥位固定，碘伏消毒腹部皮膚2遍，鋪無菌洞巾。沿下腹部腹正中線做一約1.5 cm長切口，尋找盲腸并游離腸系膜，4-0絲線在回盲瓣遠端結扎盲腸側壁（避免結扎回腸及盲腸系膜血管），16號針頭貫穿盲腸2次，兩個部位相距約1 cm，輕輕擠壓盲腸至少量糞渣溢出。然后將盲腸放回腹腔，逐層縫合腹壁切口[2-3]。假手術組開腹后僅翻動盲腸。術后于腹部皮下注射無菌生理鹽水（30 mL/kg）以補充術中體液丟失。術后保持室溫在25 ℃，給予大鼠飼料和飲水。于CLP術后6、12及24 h取標本進行實驗。
1.2.2 標本處理
假手術組及CLP組大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉，頸動脈置管采血。血液室溫自然凝固2 h，3 000 r/min （r=30 cm）離心15 min，分離血清，-20 ℃保存備用。
1.2.3 內源性ALT、BUN、Cr、CK和LDH的測定
采用連續監測法測定血清中ALT，脲酶-谷氨酸脫氫酶法測定BUN，肌氨酸氧化酶法測定Cr，N-乙酰半胱氨酸法測定CK，乳酸→丙酮酸法測定LDH。所有的操作均由操作熟練的專門技術人員嚴格按照操作規程進行。
1.3 統計學方法
所有數據采用SPSS 17.0軟件做統計學處理，結果用均數±標準差（
2 結果
CLP術后不同時間，大鼠肝腎功及心肌酶譜變化結果見表 1。與假手術組比較，大鼠血清ALT、BUN、Cr、CK及LDH水平變化均隨時間延長逐漸升高，12 h時均達到最高水平，24 h時均開始下降，但仍高于假手術組（P<0.05）。
表1
CLP術后不同時相大鼠肝腎功及心肌酶譜變化結果（3 討論
膿毒癥按疾病嚴重程度可分為膿毒癥、嚴重膿毒癥及膿毒性休克。嚴重膿毒癥極易誘導繼發多臟器功能損害，也是膿毒癥患者死亡的最終原因。因此，對于膿毒癥的患者，我們須密切監測各器官功能狀態。
ALT體現了肝細胞損害和壞死情況，其增高幅度與肝功能損害程度密切相關，是衡量肝功能的一項重要指標[4]。血清ALT存在于肝細胞的線粒體中，膿毒癥時，內毒素致肝細胞線粒體超微結構損傷并出現功能障礙，肝細胞受損凋亡，致ALT顯著升高[5]。BUN和Cr是反映腎功能的經典指標，反映腎實質的受損程度。嚴重膿毒癥時，機體血壓降低，腎動脈灌注不足，加之炎性介質的作用，極易造成急性腎臟衰竭[6]。CK和LDH是診斷心肌梗死的常用指標，其上升幅度與梗死面積成正比[7]。嚴重膿毒癥時，毒素作用可致肌纖維的膜通透性異常或肌纖維損傷，大量CK釋放入血，CK顯著升高[8]。本研究結果表明，CLP大鼠血清中ALT、BUN、Cr、CK和LDH水平隨時間延長逐漸升高，且波動趨勢基本相同，12 h達到最高水平，24 h較12 h下降，提示CLP術后大鼠肝、心、腎功能逐漸受損，12 h功能障礙最明顯，12 h之后器官可能已發生不可逆病變。
綜上所述，CLP大鼠體內ALT、BUN、Cr、CK和LDH水平隨時間依賴性改變可反映膿毒癥的病理生理進展和嚴重程度，對膿毒癥病情的判斷及預后具有一定現實意義。
