引用本文： 梁月琴, 尹文潔, 錢文, 王海栗, 馬馳, 杜鴻昱. 槐耳顆粒聯合全身化療對晚期乳腺癌患者免疫功能及預后的影響. 中國普外基礎與臨床雜志, 2015, 22(12): 1482-1486. doi: 10.7507/1007-9424.20150386 復制
晚期乳腺癌因其發展迅速、治療極其困難，且預后不良，已成為乳腺癌研究領域的一個難題[1]。傳統的治療方法多以化療為主，但是化療藥物在殺傷癌細胞的同時也破壞了患者的免疫系統，使其難以達到預期的效果。近年有研究[2]發現，槐耳顆粒能誘導機體產生多種細胞因子，提高機體免疫力，從而發揮其抗腫瘤作用。Sun等[3]研究發現，槐耳顆粒可抑制肺癌細胞A549由S期進入G2/M期，誘發肺癌細胞凋亡，而且無化療的毒副作用。本研究旨在探討槐耳顆粒聯合化療抗晚期乳腺癌的作用，并觀察其對患者免疫功能的影響。
1 資料與方法
1.1 病例納入和排除標準及分組
收集我院2006年3月至2009年3月期間收治的晚期乳腺癌患者98例，所有病例均行手術或空芯針活檢證實，所有乳腺癌病例均伴有一個以上遠處器官或鎖骨上淋巴結轉移，TNM分期均為Ⅳ期。所有病例按照均衡隨機設計的方法隨機分為研究組和對照組。所有病例均經過了倫理委員會嚴格的審核批準，并且均征求患者的知情同意并簽字。
1.2 臨床資料
對照組50例，年齡35～69歲，平均51.2歲。研究組48例，年齡33～68歲，平均49.6歲。所有患者經檢查排除免疫性疾病，均無心臟、肝、腎及骨髓造血功能的嚴重損害。2組患者年齡、病理類型、腫瘤轉移及HER-2狀態方面以及化療方案和人數、內分泌治療方案及人數比較差異均無統計學意義（P > 0.05），具有可比性，見表 1。
表1
2組晚期乳腺癌患者的一般情況比較（例）
1.3 治療方法
所有患者按照病情需要接受相應的輔助化療、內分泌治療等。輔助化療方案以蒽環類和多西他賽類為主，包括多西他賽+多柔比星+環磷酰胺（TAC）方案、多西他賽+多柔比星（TA）方案、紫杉醇+吉西他濱（GT）方案、表柔比星+環磷酰胺（EC）方案等[4]。由于所有晚期乳腺癌病例病情均進展至終末期，已失去手術治療的機會，故均未行放療或手術等局部治療措施。
對照組按傳統方法給予全身化療，研究組在此基礎上給予槐耳顆粒治療。槐耳顆粒于化療開始第1 d口服，20 g/次，3次/d，連續應用6個月。槐耳顆粒購于江蘇啟東蓋天力制藥有限公司。本項目實施期間均不使用免疫調節劑。
1.4 T淋巴細胞免疫功能及IL-2水平檢測
所有病例均于全身化療前1 d采集外周血標本檢測T淋巴細胞亞群及IL-2水平，于研究方案實施6個月時分別檢測對照組和研究組患者外周血T淋巴細胞亞群及IL-2水平。T淋巴細胞亞群檢測應用美國BD公司流式細胞儀分析。IL-2水平的檢測采用雙抗體夾心ELISA法，試劑購于上海生物工程技術有限公司。本研究實施中，患者因死亡或其他原因退出研究項目則不計算在入組病例范圍之內。
1.5 化療并發癥、3年死亡率和中位生存期分析
①觀察2組惡心、嘔吐、腹瀉、便秘、骨髓抑制、肝功能損害、頭皮毛發脫落等并發癥發生情況。②3年死亡率。由于晚期乳腺癌預后極差，患者一般多在3年內死亡，故本研究選擇3年作為研究時限，分析患者的死亡率。死亡率：隨訪3年，以死亡患者的例數占患者總數的百分比表示。③中位生存期。隨訪5年，以全部患者的生存期表示[5]。
1.6 統計學方法
采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行分析，計量資料以均數±標準差（
2 結果
2.1 槐耳顆粒聯合化療對晚期乳腺癌患者T淋巴細胞亞群和IL-2水平的影響
全身化療前1 d，研究組與對照組CD4+、CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+、IL-2水平比較差異均無統計學意義（P > 0.05）。槐耳顆粒聯合化療實施6個月時，研究組CD4+、CD4+/CD8+ T淋巴細胞較對照組明顯升高（P < 0.05），而CD8+ T淋巴細胞比例明顯降低（P < 0.05）。槐耳顆粒聯合化療實施6個月時研究組IL-2水平也明顯高于對照組（P < 0.05），見表 2。
表2
2組晚期乳腺癌患者T淋巴細胞亞群和IL-2水平的變化（2.2 槐耳顆粒聯合化療對晚期乳腺癌患者化療并發癥的影響
對照組和研究組晚期乳腺癌患者均接受化療，化療期間未發生患者死亡的情況。對照組50例患者中發生化療并發癥43例，并發癥發生率為86.0%，其中胃腸道反應20例，骨髓功能抑制9例，脫發7例，肝功能損害4例，其他3例；研究組48例患者發生化療并發癥28例，并發癥發生率為58.3%，其中胃腸道反應12例，骨髓功能抑制6例，脫發5例，肝功能損害3例，其他2例。2組并發癥發生率比較差異有統計學意義（χ2=8.65，P < 0.01）。
2.3 槐耳顆粒聯合化療對晚期乳腺癌患者3年死亡率及中位生存期的影響
對照組50例患者，觀察3年內死亡41例，其中35例死于腫瘤轉移引起多器官功能衰竭，1例死于癌栓堵塞呼吸道引起的急性呼吸功能衰竭，5例死于其他與原發腫瘤無關的疾病，死亡率為82.0%；研究組48例，觀察3年內死亡30例，其中20例死于腫瘤轉移引起多器官功能衰竭，10例死于其他與原發腫瘤無關的疾病，死亡率為62.5%。2組死亡率比較差異有統計學意義（χ2=3.25，P < 0.05）。2組患者分別觀察5年，在6個月內均未發生患者死亡情況，全部患者均在5年內死亡。對照組中位生存期為24.5個月，研究組中位生存期為33.5個月，2組間比較差異有統計學意義（t=6.87，P < 0.01）。
3 討論
所有的乳腺癌都存在復發、轉移的風險，而且腫瘤一旦發生轉移，則治療效果非常不理想，患者常在短時間內死亡。有研究[6]發現，晚期乳腺癌患者若發生遠處轉移，約50%患者在1年內死亡。晚期乳腺癌患者一般免疫功能非常低下，尤其是化療后免疫功能更差，從而進一步增加全身感染和腫瘤細胞擴散的機會[7-9]。
槐耳顆粒是一種新型真菌類抗腫瘤新藥，其主要成分為多糖蛋白。基礎研究[10]證實，槐耳顆粒可以抑制血管內皮細胞增殖、遷移的能力，誘導腫瘤細胞凋亡，并可促進巨噬細胞的吞噬功能。近年研究[11]發現，槐耳顆粒亦可刺激T、B淋巴細胞增殖，增強自然殺傷（NK）細胞活性，提高機體的細胞免疫功能和體液免疫功能。作為抗腫瘤的中藥，槐耳顆粒已被大量應用于肝癌、肺癌的輔助治療。基于此，本研究以槐耳顆粒聯合全身化療治療晚期乳腺癌，以期改善患者的免疫功能，并延長患者的生存時間。
T淋巴細胞亞群在晚期乳腺癌患者的抗腫瘤免疫中發揮重要作用[12-13]。CD4+輔助性T淋巴細胞活化后可釋放γ-干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子，這些細胞因子在調節細胞毒性T淋巴細胞、NK細胞、樹突狀細胞抗腫瘤中發揮無可替代的作用，并可誘導腫瘤細胞凋亡，間接殺傷腫瘤細胞[14-15]。T淋巴細胞是機體抗腫瘤的關鍵因子，而惡性腫瘤患者體內T淋巴細胞功能往往處于低下狀態[16]。有研究[17]顯示，槐耳顆粒不僅具有抗腫瘤作用，還具有良好的免疫增強作用。Wang等[18]研究表明，槐耳顆粒可改善晚期乳腺癌患者的生活質量，對于乳腺癌的化療也具有一定的增效作用。本研究中，槐耳顆粒聯合化療組CD4+ T淋巴細胞、CD4+/CD8+ T淋巴細胞明顯高于單純化療組，CD8+ T淋巴細胞明顯低于單純化療組，表明槐耳顆粒可以改善晚期乳腺癌患者的細胞免疫功能，這對激活晚期乳腺癌患者自身的抗腫瘤免疫是極其重要的。
IL-2是機體免疫網路中最重要的調節細胞因子，已被證實具有抗腫瘤作用[19]。另外，IL-2分泌的增加可刺激T淋巴細胞的增殖，提高機體細胞免疫功能[20]。本研究中，槐耳顆粒聯合化療組IL-2水平明顯高于單純化療組，這與CD4+ T淋巴細胞的變化趨勢是一致的，IL-2水平高表達直接刺激T淋巴細胞的增殖和分泌，從而間接有利于患者的預后改善。這一研究結果與目前國內外文獻報道的基本是一致的。該研究亦可作為中醫藥抗腫瘤應用的研究突破點，有利于中醫藥臨床應用的推廣。
晚期乳腺癌患者全身情況較差，化療藥物不僅殺傷惡性腫瘤細胞，同時對正常的細胞也會被殺傷，尤其對于增殖比較活躍的細胞損傷更大。乳腺癌化療并發癥涉及各個系統，常見可累及胃腸道、血液系統、肝臟、免疫系統、頭發等，并導致乏力、惡心、嘔吐、腹瀉、骨髓抑制、肝功能損害等副反應，嚴重者甚至可以導致水電解質紊亂、骨髓造血功能衰竭等[21-22]，若不積極處理，可能會引起患者死亡。有研究[23]發現，槐耳顆粒聯合化療可以改善晚期乳腺癌、胃腸道癌等患者的臨床癥狀，提高患者的生活質量，尤其對于化療引起的肝功能和造血系統的損害具有一定的保護作用。本研究結果表明，研究組患者惡心嘔吐、骨髓功能抑制、肝功能損害等化療并發癥明顯低于對照組，說明槐耳顆粒對化療過程中的器官功能保護具有積極的作用。本研究進一步說明，應用槐耳顆粒聯合化療對減輕化療副損害是可行的，從而具有一定的臨床應用價值。
死亡率是反映惡性腫瘤危害性的重要指標，中位生存期是反映晚期乳腺癌治療效果的最直接的臨床依據。近10年來，乳腺癌發病在世界范圍內呈不斷升高趨勢，亦是女性惡性腫瘤最常見的死亡原因[24]。晚期乳腺癌最常見的轉移部位依次為骨、肺、肝，大部分患者在3年內死亡。Chen等[25]研究發現，晚期乳腺癌3年內死亡率為85.6%，中位生存期為22個月。本研究中，槐耳顆粒聯合化療組死亡率明顯低于單純化療組，說明槐耳顆粒聯合化療對降低患者死亡率、改善患者預后具有積極的作用。相對于單純化療及其他支持治療，聯用槐耳顆粒具有明顯的臨床優勢。本研究結果顯示，槐耳顆粒聯用化療組患者中位生存期明顯高于單純化療組，說明聯用槐耳顆粒較單純化療能顯著延長患者的生存時間，這同時說明槐耳顆粒對抑制乳腺癌的進展具有一定的作用。單純化療組中位生存期短可能與惡性腫瘤的進展和患者免疫力的損傷都有一定的關系，而槐耳顆粒聯合化療組中位生存期明顯延長可能與槐耳顆粒提高患者的免疫力，從而抑制癌細胞的擴散有關。當然，我們統計的數據比較有限，將來大樣本的研究可能會獲得更加科學的研究成果。
總之，對于晚期乳腺癌患者，槐耳顆粒聯合全身化療可以顯著提高患者自身免疫功能，并改善晚期乳腺癌患者的預后。槐耳顆粒應用于臨床治療晚期乳腺癌，為中醫藥在抗腫瘤領域的應用提供了有益的探索，為抗癌理論的創新開辟新的思路。至于槐耳顆粒聯合全身化療抑制晚期乳腺癌進展的具體機制，以及槐耳顆粒與化療藥物之間的相互協同作用尚有待于進一步更深入的探討。
晚期乳腺癌因其發展迅速、治療極其困難，且預后不良，已成為乳腺癌研究領域的一個難題[1]。傳統的治療方法多以化療為主，但是化療藥物在殺傷癌細胞的同時也破壞了患者的免疫系統，使其難以達到預期的效果。近年有研究[2]發現，槐耳顆粒能誘導機體產生多種細胞因子，提高機體免疫力，從而發揮其抗腫瘤作用。Sun等[3]研究發現，槐耳顆粒可抑制肺癌細胞A549由S期進入G2/M期，誘發肺癌細胞凋亡，而且無化療的毒副作用。本研究旨在探討槐耳顆粒聯合化療抗晚期乳腺癌的作用，并觀察其對患者免疫功能的影響。
1 資料與方法
1.1 病例納入和排除標準及分組
收集我院2006年3月至2009年3月期間收治的晚期乳腺癌患者98例，所有病例均行手術或空芯針活檢證實，所有乳腺癌病例均伴有一個以上遠處器官或鎖骨上淋巴結轉移，TNM分期均為Ⅳ期。所有病例按照均衡隨機設計的方法隨機分為研究組和對照組。所有病例均經過了倫理委員會嚴格的審核批準，并且均征求患者的知情同意并簽字。
1.2 臨床資料
對照組50例，年齡35～69歲，平均51.2歲。研究組48例，年齡33～68歲，平均49.6歲。所有患者經檢查排除免疫性疾病，均無心臟、肝、腎及骨髓造血功能的嚴重損害。2組患者年齡、病理類型、腫瘤轉移及HER-2狀態方面以及化療方案和人數、內分泌治療方案及人數比較差異均無統計學意義（P > 0.05），具有可比性，見表 1。
表1
2組晚期乳腺癌患者的一般情況比較（例）
1.3 治療方法
所有患者按照病情需要接受相應的輔助化療、內分泌治療等。輔助化療方案以蒽環類和多西他賽類為主，包括多西他賽+多柔比星+環磷酰胺（TAC）方案、多西他賽+多柔比星（TA）方案、紫杉醇+吉西他濱（GT）方案、表柔比星+環磷酰胺（EC）方案等[4]。由于所有晚期乳腺癌病例病情均進展至終末期，已失去手術治療的機會，故均未行放療或手術等局部治療措施。
對照組按傳統方法給予全身化療，研究組在此基礎上給予槐耳顆粒治療。槐耳顆粒于化療開始第1 d口服，20 g/次，3次/d，連續應用6個月。槐耳顆粒購于江蘇啟東蓋天力制藥有限公司。本項目實施期間均不使用免疫調節劑。
1.4 T淋巴細胞免疫功能及IL-2水平檢測
所有病例均于全身化療前1 d采集外周血標本檢測T淋巴細胞亞群及IL-2水平，于研究方案實施6個月時分別檢測對照組和研究組患者外周血T淋巴細胞亞群及IL-2水平。T淋巴細胞亞群檢測應用美國BD公司流式細胞儀分析。IL-2水平的檢測采用雙抗體夾心ELISA法，試劑購于上海生物工程技術有限公司。本研究實施中，患者因死亡或其他原因退出研究項目則不計算在入組病例范圍之內。
1.5 化療并發癥、3年死亡率和中位生存期分析
①觀察2組惡心、嘔吐、腹瀉、便秘、骨髓抑制、肝功能損害、頭皮毛發脫落等并發癥發生情況。②3年死亡率。由于晚期乳腺癌預后極差，患者一般多在3年內死亡，故本研究選擇3年作為研究時限，分析患者的死亡率。死亡率：隨訪3年，以死亡患者的例數占患者總數的百分比表示。③中位生存期。隨訪5年，以全部患者的生存期表示[5]。
1.6 統計學方法
采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行分析，計量資料以均數±標準差（
2 結果
2.1 槐耳顆粒聯合化療對晚期乳腺癌患者T淋巴細胞亞群和IL-2水平的影響
全身化療前1 d，研究組與對照組CD4+、CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+、IL-2水平比較差異均無統計學意義（P > 0.05）。槐耳顆粒聯合化療實施6個月時，研究組CD4+、CD4+/CD8+ T淋巴細胞較對照組明顯升高（P < 0.05），而CD8+ T淋巴細胞比例明顯降低（P < 0.05）。槐耳顆粒聯合化療實施6個月時研究組IL-2水平也明顯高于對照組（P < 0.05），見表 2。
表2
2組晚期乳腺癌患者T淋巴細胞亞群和IL-2水平的變化（2.2 槐耳顆粒聯合化療對晚期乳腺癌患者化療并發癥的影響
對照組和研究組晚期乳腺癌患者均接受化療，化療期間未發生患者死亡的情況。對照組50例患者中發生化療并發癥43例，并發癥發生率為86.0%，其中胃腸道反應20例，骨髓功能抑制9例，脫發7例，肝功能損害4例，其他3例；研究組48例患者發生化療并發癥28例，并發癥發生率為58.3%，其中胃腸道反應12例，骨髓功能抑制6例，脫發5例，肝功能損害3例，其他2例。2組并發癥發生率比較差異有統計學意義（χ2=8.65，P < 0.01）。
2.3 槐耳顆粒聯合化療對晚期乳腺癌患者3年死亡率及中位生存期的影響
對照組50例患者，觀察3年內死亡41例，其中35例死于腫瘤轉移引起多器官功能衰竭，1例死于癌栓堵塞呼吸道引起的急性呼吸功能衰竭，5例死于其他與原發腫瘤無關的疾病，死亡率為82.0%；研究組48例，觀察3年內死亡30例，其中20例死于腫瘤轉移引起多器官功能衰竭，10例死于其他與原發腫瘤無關的疾病，死亡率為62.5%。2組死亡率比較差異有統計學意義（χ2=3.25，P < 0.05）。2組患者分別觀察5年，在6個月內均未發生患者死亡情況，全部患者均在5年內死亡。對照組中位生存期為24.5個月，研究組中位生存期為33.5個月，2組間比較差異有統計學意義（t=6.87，P < 0.01）。
3 討論
所有的乳腺癌都存在復發、轉移的風險，而且腫瘤一旦發生轉移，則治療效果非常不理想，患者常在短時間內死亡。有研究[6]發現，晚期乳腺癌患者若發生遠處轉移，約50%患者在1年內死亡。晚期乳腺癌患者一般免疫功能非常低下，尤其是化療后免疫功能更差，從而進一步增加全身感染和腫瘤細胞擴散的機會[7-9]。
槐耳顆粒是一種新型真菌類抗腫瘤新藥，其主要成分為多糖蛋白。基礎研究[10]證實，槐耳顆粒可以抑制血管內皮細胞增殖、遷移的能力，誘導腫瘤細胞凋亡，并可促進巨噬細胞的吞噬功能。近年研究[11]發現，槐耳顆粒亦可刺激T、B淋巴細胞增殖，增強自然殺傷（NK）細胞活性，提高機體的細胞免疫功能和體液免疫功能。作為抗腫瘤的中藥，槐耳顆粒已被大量應用于肝癌、肺癌的輔助治療。基于此，本研究以槐耳顆粒聯合全身化療治療晚期乳腺癌，以期改善患者的免疫功能，并延長患者的生存時間。
T淋巴細胞亞群在晚期乳腺癌患者的抗腫瘤免疫中發揮重要作用[12-13]。CD4+輔助性T淋巴細胞活化后可釋放γ-干擾素、腫瘤壞死因子等細胞因子，這些細胞因子在調節細胞毒性T淋巴細胞、NK細胞、樹突狀細胞抗腫瘤中發揮無可替代的作用，并可誘導腫瘤細胞凋亡，間接殺傷腫瘤細胞[14-15]。T淋巴細胞是機體抗腫瘤的關鍵因子，而惡性腫瘤患者體內T淋巴細胞功能往往處于低下狀態[16]。有研究[17]顯示，槐耳顆粒不僅具有抗腫瘤作用，還具有良好的免疫增強作用。Wang等[18]研究表明，槐耳顆粒可改善晚期乳腺癌患者的生活質量，對于乳腺癌的化療也具有一定的增效作用。本研究中，槐耳顆粒聯合化療組CD4+ T淋巴細胞、CD4+/CD8+ T淋巴細胞明顯高于單純化療組，CD8+ T淋巴細胞明顯低于單純化療組，表明槐耳顆粒可以改善晚期乳腺癌患者的細胞免疫功能，這對激活晚期乳腺癌患者自身的抗腫瘤免疫是極其重要的。
IL-2是機體免疫網路中最重要的調節細胞因子，已被證實具有抗腫瘤作用[19]。另外，IL-2分泌的增加可刺激T淋巴細胞的增殖，提高機體細胞免疫功能[20]。本研究中，槐耳顆粒聯合化療組IL-2水平明顯高于單純化療組，這與CD4+ T淋巴細胞的變化趨勢是一致的，IL-2水平高表達直接刺激T淋巴細胞的增殖和分泌，從而間接有利于患者的預后改善。這一研究結果與目前國內外文獻報道的基本是一致的。該研究亦可作為中醫藥抗腫瘤應用的研究突破點，有利于中醫藥臨床應用的推廣。
晚期乳腺癌患者全身情況較差，化療藥物不僅殺傷惡性腫瘤細胞，同時對正常的細胞也會被殺傷，尤其對于增殖比較活躍的細胞損傷更大。乳腺癌化療并發癥涉及各個系統，常見可累及胃腸道、血液系統、肝臟、免疫系統、頭發等，并導致乏力、惡心、嘔吐、腹瀉、骨髓抑制、肝功能損害等副反應，嚴重者甚至可以導致水電解質紊亂、骨髓造血功能衰竭等[21-22]，若不積極處理，可能會引起患者死亡。有研究[23]發現，槐耳顆粒聯合化療可以改善晚期乳腺癌、胃腸道癌等患者的臨床癥狀，提高患者的生活質量，尤其對于化療引起的肝功能和造血系統的損害具有一定的保護作用。本研究結果表明，研究組患者惡心嘔吐、骨髓功能抑制、肝功能損害等化療并發癥明顯低于對照組，說明槐耳顆粒對化療過程中的器官功能保護具有積極的作用。本研究進一步說明，應用槐耳顆粒聯合化療對減輕化療副損害是可行的，從而具有一定的臨床應用價值。
死亡率是反映惡性腫瘤危害性的重要指標，中位生存期是反映晚期乳腺癌治療效果的最直接的臨床依據。近10年來，乳腺癌發病在世界范圍內呈不斷升高趨勢，亦是女性惡性腫瘤最常見的死亡原因[24]。晚期乳腺癌最常見的轉移部位依次為骨、肺、肝，大部分患者在3年內死亡。Chen等[25]研究發現，晚期乳腺癌3年內死亡率為85.6%，中位生存期為22個月。本研究中，槐耳顆粒聯合化療組死亡率明顯低于單純化療組，說明槐耳顆粒聯合化療對降低患者死亡率、改善患者預后具有積極的作用。相對于單純化療及其他支持治療，聯用槐耳顆粒具有明顯的臨床優勢。本研究結果顯示，槐耳顆粒聯用化療組患者中位生存期明顯高于單純化療組，說明聯用槐耳顆粒較單純化療能顯著延長患者的生存時間，這同時說明槐耳顆粒對抑制乳腺癌的進展具有一定的作用。單純化療組中位生存期短可能與惡性腫瘤的進展和患者免疫力的損傷都有一定的關系，而槐耳顆粒聯合化療組中位生存期明顯延長可能與槐耳顆粒提高患者的免疫力，從而抑制癌細胞的擴散有關。當然，我們統計的數據比較有限，將來大樣本的研究可能會獲得更加科學的研究成果。
總之，對于晚期乳腺癌患者，槐耳顆粒聯合全身化療可以顯著提高患者自身免疫功能，并改善晚期乳腺癌患者的預后。槐耳顆粒應用于臨床治療晚期乳腺癌，為中醫藥在抗腫瘤領域的應用提供了有益的探索，為抗癌理論的創新開辟新的思路。至于槐耳顆粒聯合全身化療抑制晚期乳腺癌進展的具體機制，以及槐耳顆粒與化療藥物之間的相互協同作用尚有待于進一步更深入的探討。
