引用本文： 徐小永, 姜維民, 于楠, 楊捷, 李春民, 周丁華. 胰腺癌循環腫瘤細胞檢測及臨床應用進展. 中國普外基礎與臨床雜志, 2015, 22(7): 889-892. doi: 10.7507/1007-9424.20150232 復制
胰腺癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，其發病率和死亡率近年來明顯上升，1年生存率<10%，5年生存率<5% [1-3]，是預后最差的惡性腫瘤之一。近年來，循環腫瘤細胞(circulating tumor cell，CTCs)在惡性腫瘤復發和轉移過程中的作用越來越得到重視。CTCs能定位于遠處器官并形成轉移灶。隨著細胞分離和鑒定技術的發展，外周血中CTCs的檢測成為可能，為胰腺癌的早期診斷、個體化治療方案的選擇及預后評估提供了一種新的方法。現就近年來胰腺癌CTCs的檢測及臨床應用進展進行綜述。
1 CTCs概述
1869年，Ashworth [4]在1例因癌癥死亡患者外周血中發現與原發腫瘤細胞相似的細胞，并首次提出CTCs的概念。CTCs是指自發或因診療操作由實體瘤或轉移灶釋放進入外周血循環的腫瘤細胞。進入循環的腫瘤細胞絕大多數在短期內死亡，而部分細胞則經上皮細胞向間充質細胞轉化（epithelial mesenchymal transition,EMT），EMT是一個復雜的分子生物學過程，在此過程中，上皮細胞逐漸失去分化能力，取而代之的是細胞運動能力、侵襲力和抵抗凋亡的能力[5]。近年來，隨著現代檢測技術的廣泛應用，CTCs在胰腺癌的基礎和臨床領域的研究取得一定的進展，成為評估腫瘤生物侵襲性及治療有效性的重要指標。
2 CTCs的富集
由于腫瘤患者外周血中CTCs數量稀少，大約每106個單核細胞中才有1個CTCs，為了提高CTCs檢測的敏感性，在檢測之前，CTCs富集是一個必不可少的步驟，細胞富集技術可分為非特異性和特異性兩種，前者根據CTCs物理化學屬性（密度、大小等），如密度梯度離心法（density gradient centrifugation）、濾過富集法（isolation by size of epithelial tumor cells） 等，后者則依據細胞表面抗原或特定標志物分離富集CTCs，如免疫磁珠分離法（immunomagnetic separation）。
2.1 密度梯度離心法
密度梯度離心法是一種傳統的細胞富集技術，是基于血液中各種細胞密度不同的特點富集腫瘤細胞的技術，該方法的優點是細胞分離效果較好，可以后續進行細胞病理學、免疫細胞化學、細胞涂片計數、RT-PCR等CTCs檢測；缺點是特異性較低，易導致缺乏相應密度的腫瘤細胞丟失。在此基礎上建立的OncoQuick分離法，能更好地富集腫瘤細胞，特異性更高，進一步提高了CTCs的檢出率[6-7]。
2.2 濾過富集法
Vona等[8]基于腫瘤細胞體積大于外周血細胞的原理建立的一種簡單、經濟的細胞分離方法，大多數研究報道濾過膜孔徑在8 μm大小時，濾過效果較好，但是由于并非所有腫瘤細胞直徑均大于8 μm，也并非所有外周血細胞直徑均小于8 μm，所以該法缺乏特異性，易導致腫瘤細胞丟失或假陽性的發生。濾過富集法的優點是不破壞細胞形態，保留細胞表面抗原及特定標志物，方便后續的細胞形態學觀察和分子生物學檢測[9]。
2.3 免疫磁珠分離法
免疫磁珠分離法的原理是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的單克隆抗體相結合，形成“抗原-抗體-磁珠”的免疫復合物，在外加磁場中，該復合物在磁力作用下產生定向位移，從而使目的細胞分離。上皮細胞黏附分子（EpCAM）作為上皮細胞來源腫瘤表面抗原得到了最為頻繁的使用[10]。納米磁珠不會破壞細胞的功能和活力，能大大提高樣本中細胞富集效率，Xu等[11]在肝細胞肝癌中利用特異性的去唾液酸糖蛋白受體作為細胞表面抗原進行免疫磁珠分選，使細胞平均回收率大于61%，敏感性和特異性均高于其他分離方法。
3 CTCs的檢測
常用的CTCs檢測技術主要有兩種方法：免疫細胞化學法（immunocytochemistry，ICC）和逆轉錄聚合酶鏈式反應（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）。隨著科學研究技術的發展，在此兩種方法的基礎上，進一步發展出許多靈敏度和特異性均有相對提高的技術，主要有：Cellsearch系統、纖維光學陣列掃描技術（fiber-optic array scanning technology，FAST）、微流體芯片技術（CTC-chip）等。
3.1 ICC
ICC基于腫瘤相關抗原或特異的標志物與單克隆抗體結合,通過顯色反應來判斷目的細胞，常用的腫瘤標志物分3類：①上皮細胞角蛋白（CK）；②上皮細胞膜特異性抗原；③腫瘤相關糖蛋白。該檢測方法簡便快捷，檢測試劑敏感性和特異性較高。但由于一些良性上皮增殖性疾病、手術、炎癥和組織創傷，造成一些上皮細胞進入外周血，這些細胞表面存在同樣的特異性抗原，易致假陽性的發生；同時，在上皮間質轉化過程中，一小部分CTCs表面特異性標志物減弱甚至丟失，導致假陰性的發生[12]。
3.2 Cellsearch系統
Cellsearch系統是一種半自動化的CTCs檢測系統，基于免疫磁珠富集法結合ICC檢測CTCs的技術。其基本流程為：固定上述免疫磁珠分離法富集的上皮細胞，使用CD45、CK8、CK18及CK19熒光抗體標記細胞，半自動四色熒光顯微鏡細胞監測分析儀進行分析，CK+/CD45-即為CTCs。目前Cellsearch系統已被美國FDA批準應用于轉移性乳腺癌、結直腸癌和前列腺癌的臨床檢測[13]，在評估患者的預后及治療方案的有效性方面已取得顯著成果。同樣，該系統在胰腺癌CTCs的檢測研究中也取得了一定的進展[14-18]。
3.3 微流體芯片技術
微流體芯片技術是一種基于微流體學和免疫學的CTCs檢測技術，2007年由Nagrath等[19]首先報道，該芯片表層上包被有EpCAM抗體，當外周血樣本（平均體積2.7 mL）流過芯片時，因抗原抗體反應，腫瘤細胞被芯片捕獲。該技術操作步驟簡單，樣本無需處理，具有較高的敏感性（可檢出108個血細胞中的1個靶細胞）和特異性，細胞回收率>65%。在此基礎上改進的V型芯片（herringbone-chip，HB-Chip）技術[20]，可以處理更大容量的血液樣本，進一步提高了腫瘤細胞的分離效率。
3.4 RT-PCR
RT-PCR是在PCR的基礎上擴增由腫瘤特異性mRNA序列逆轉錄的DNA片段，從而識別腫瘤細胞特異性的mRNA。該技術靈敏度高,可在107～108個外周血單核細胞中檢測出單個腫瘤細胞，但是由于核酸起源不明確（正常細胞表達靶基因、腫瘤細胞壞死或偽基因擴增等），RT-PCR檢測CTCs時，結果可能會出現假陽性，影響檢測的特異性。為了提高檢測的特異性和靈敏度，近幾年又開發出實時定量RT-PCR、熒光定量RT-PCR、巢氏RT-PCR等新方法，擴增效率高，特異性好，已被廣泛應用于實體腫瘤CTCs的檢測，如乳腺癌[21]、肝癌[22]、結直腸癌[23]、胰腺癌[24]等。
4 CTCs在胰腺癌中的應用
CTCs的檢測取樣方便，被譽為“實時液體活檢”，隨著時間的推移，重復檢測，可用來評估腫瘤的生物學功能和腫瘤細胞的傳播。同樣，在胰腺癌中，CTCs計數和分子特性的檢測有助于早期診斷、監測術后復發、評估化療效果及預后、選擇個體化的治療方案等。
4.1 CTCs與胰腺癌的診斷
CTCs在腫瘤形成的早期階段，就可以從原發灶脫落、經EMT轉化并進入外周血，鑒于此，很多學者認為CTCs可以提高腫瘤早期診斷效率，甚至在癌前病變期，預測腫瘤的發生：Hüsemann等[25]在乳腺癌早期小鼠模型和導管內原位癌患者的外周血中成功分離檢測到CTCs；Rhim等[26]在小鼠胰腺上皮內瘤變模型中也成功檢測出CTCs。在臨床上，CA19-9作為常用的胰腺癌腫瘤標志物，其特異性并不高，對胰腺囊性疾病、胰腺導管腺癌、胰腺神經內分泌瘤、胰腺上皮內瘤變等病變的鑒別困難，活檢組織病理學檢查作為診斷的金標準，由于其假陰性率高，常需反復多次穿刺，增加了額外的損傷和并發癥的發生，還可能造成腫瘤細胞的種植轉移，有時為了明確診斷，不得不開腹探查。劉艷輝等[27]采用免疫磁珠負性富集結合免疫熒光方法對69例胰腺癌患者進行CTCs檢測，CTCs的檢出率為88.41%，且CTCs的檢出情況和血清CA19-9升高水平具有密切相關性，認為CTCs是胰腺癌診斷的敏感指標，聯合CA19-9 與CTCs檢測可提高胰腺癌的診斷水平。Thege等[28]利用微流體技術平臺聯合使用EpCAM抗體及黏蛋白1 （MUC1）抗體檢測CTCs，能實現高效的捕獲，同時能提高早期胰腺癌的診斷效率。手術切除是早期胰腺癌的主要治療手段，復發和轉移是手術治療失敗的主要原因，也是影響患者生存期的重要因素，監測術后早期復發和轉移成為臨床上亟待解決的問題。研究[29-32]表明，CTCs的檢測有助于早期微轉移癌的診斷，尤其是對于那些腫瘤較小，在影像學上不能清晰顯示的微轉移瘤。
4.2 CTCs與胰腺癌化療
CTCs可以用來識別促進轉移和化學抗性的特定分子，從而有利于實施有針對性的干預新輔助和輔助治療，新輔助治療可以降低原發腫瘤分期，提高腫瘤的切除率；同時，能揭示腫瘤生物學的不同，以避免因為微轉移而導致胰十二指腸切除術后的死亡率。化療是胰腺癌除手術之外的主要治療手段之一，在化療前后CTCs檢測計數能夠有效地揭示腫瘤對化療藥物的抗性及預測化療效果。Torphy等[33]建立胰腺導管腺癌小鼠模型，隨機分為2組，分別使用BKM120和空白載體治療28 d，并于治療前后分別檢測CTCs，BKM120組CTCs計數治療后明顯減少（26.61個/250 μL比2.21個/250 μL，P=0.020 7），而空白載體組治療前后CTCs計數的差異無統計學意義（23.26個/250 μL比 11.89個/250 μL，P=0.808 1），該結果表明，CTCs計數分析是一種非侵入性的、可以預測和監測治療效果的有效方法。
4.3 CTCs與胰腺癌的預后
目前眾多研究表明，CTCs可以預測腫瘤的侵襲性，其存在提示預后較差：Sergeant等[34]對10例胰腺導管腺癌術后患者CTCs、血細胞、胰腺癌組織及正常胰腺組織進行基因組學分析，發現CTCs表達細胞活性基因信號P38 MAPK，且高表達者無進展生存期（P=0.041）和總生存期（P=0.047）相對較長，認為CTCs表達細胞活性基因信號可以評估胰腺癌術后生存期；de Albuquerque等[35]利用免疫磁珠富集法聯合RT-PCR（KRT19、MUC1、EPCAM、CEACAM5 及BIRC5）法檢測34例胰腺癌患者外周血CTCs，并分析CTCs與無進展生存期的相關性，結果顯示16例CTCs陽性患者的中位無進展生存期為66 d，CTCs陰性患者的中位無進展生存期為138 d，其差異有統計學意義（P=0.01）；Han等[36]檢索PUBMED、MEDLINE等多個數據庫共9個群組，對623例胰腺癌患者進行研究，其中268例CTCs陽性、355例CTCs陰性，CTCs陽性組有較短的無進展生存期（HR=1.89，95%CI=1.25～4.00，P<0.001），總生存期短（HR=1.23，95%CI=0.88～2.08，P<0.001），種族亞群分析同樣顯示在亞洲人和白種人中，CTCs陽性患者總生存期較短（P<0.05），結果表明CTCs陽性的胰腺癌患者無進展生存期和總生存期較陰性患者短，外周血CTCs的檢測可作為胰腺癌預后的標志。以上研究說明，CTCs在胰腺癌中是一個獨立的預后指標，外周血CTCs陽性的胰腺癌患者，無進展生存期及總生存期均較陰性患者短。
5 小結
CTCs的相關研究在腫瘤微轉移生物學方面有著重要意義,早期識別和控制轉移對胰腺癌的治療是至關重要的。CTCs的研究分析不僅可代表所有從原發胰腺腫瘤和轉移瘤脫落的腫瘤細胞,而且允許在臨床過程中多個時間點重復抽樣(動態抽樣)，從而能夠早期診斷腫瘤的復發和轉移；此外，胰腺CTCs能夠應用于癌細胞基因組,研究微小RNA和蛋白質表達,檢測耐藥克隆及以CTCs為目標的靶向治療。與乳腺癌、肺癌等其他惡性腫瘤不同,胰腺癌缺乏特異性的腫瘤標志物，目前尚沒有大規模、前瞻性的CTCs的研究能夠用來指導胰腺癌臨床治療。隨著現代生物學技術的發展，CTCs的研究將有利于深入了解胰腺癌播散、侵襲及轉移的確切分子機理，為胰腺癌個體化綜合治療以及新治療策略的探索提供更為有力的理論基礎。
胰腺癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，其發病率和死亡率近年來明顯上升，1年生存率<10%，5年生存率<5% [1-3]，是預后最差的惡性腫瘤之一。近年來，循環腫瘤細胞(circulating tumor cell，CTCs)在惡性腫瘤復發和轉移過程中的作用越來越得到重視。CTCs能定位于遠處器官并形成轉移灶。隨著細胞分離和鑒定技術的發展，外周血中CTCs的檢測成為可能，為胰腺癌的早期診斷、個體化治療方案的選擇及預后評估提供了一種新的方法。現就近年來胰腺癌CTCs的檢測及臨床應用進展進行綜述。
1 CTCs概述
1869年，Ashworth [4]在1例因癌癥死亡患者外周血中發現與原發腫瘤細胞相似的細胞，并首次提出CTCs的概念。CTCs是指自發或因診療操作由實體瘤或轉移灶釋放進入外周血循環的腫瘤細胞。進入循環的腫瘤細胞絕大多數在短期內死亡，而部分細胞則經上皮細胞向間充質細胞轉化（epithelial mesenchymal transition,EMT），EMT是一個復雜的分子生物學過程，在此過程中，上皮細胞逐漸失去分化能力，取而代之的是細胞運動能力、侵襲力和抵抗凋亡的能力[5]。近年來，隨著現代檢測技術的廣泛應用，CTCs在胰腺癌的基礎和臨床領域的研究取得一定的進展，成為評估腫瘤生物侵襲性及治療有效性的重要指標。
2 CTCs的富集
由于腫瘤患者外周血中CTCs數量稀少，大約每106個單核細胞中才有1個CTCs，為了提高CTCs檢測的敏感性，在檢測之前，CTCs富集是一個必不可少的步驟，細胞富集技術可分為非特異性和特異性兩種，前者根據CTCs物理化學屬性（密度、大小等），如密度梯度離心法（density gradient centrifugation）、濾過富集法（isolation by size of epithelial tumor cells） 等，后者則依據細胞表面抗原或特定標志物分離富集CTCs，如免疫磁珠分離法（immunomagnetic separation）。
2.1 密度梯度離心法
密度梯度離心法是一種傳統的細胞富集技術，是基于血液中各種細胞密度不同的特點富集腫瘤細胞的技術，該方法的優點是細胞分離效果較好，可以后續進行細胞病理學、免疫細胞化學、細胞涂片計數、RT-PCR等CTCs檢測；缺點是特異性較低，易導致缺乏相應密度的腫瘤細胞丟失。在此基礎上建立的OncoQuick分離法，能更好地富集腫瘤細胞，特異性更高，進一步提高了CTCs的檢出率[6-7]。
2.2 濾過富集法
Vona等[8]基于腫瘤細胞體積大于外周血細胞的原理建立的一種簡單、經濟的細胞分離方法，大多數研究報道濾過膜孔徑在8 μm大小時，濾過效果較好，但是由于并非所有腫瘤細胞直徑均大于8 μm，也并非所有外周血細胞直徑均小于8 μm，所以該法缺乏特異性，易導致腫瘤細胞丟失或假陽性的發生。濾過富集法的優點是不破壞細胞形態，保留細胞表面抗原及特定標志物，方便后續的細胞形態學觀察和分子生物學檢測[9]。
2.3 免疫磁珠分離法
免疫磁珠分離法的原理是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的單克隆抗體相結合，形成“抗原-抗體-磁珠”的免疫復合物，在外加磁場中，該復合物在磁力作用下產生定向位移，從而使目的細胞分離。上皮細胞黏附分子（EpCAM）作為上皮細胞來源腫瘤表面抗原得到了最為頻繁的使用[10]。納米磁珠不會破壞細胞的功能和活力，能大大提高樣本中細胞富集效率，Xu等[11]在肝細胞肝癌中利用特異性的去唾液酸糖蛋白受體作為細胞表面抗原進行免疫磁珠分選，使細胞平均回收率大于61%，敏感性和特異性均高于其他分離方法。
3 CTCs的檢測
常用的CTCs檢測技術主要有兩種方法：免疫細胞化學法（immunocytochemistry，ICC）和逆轉錄聚合酶鏈式反應（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）。隨著科學研究技術的發展，在此兩種方法的基礎上，進一步發展出許多靈敏度和特異性均有相對提高的技術，主要有：Cellsearch系統、纖維光學陣列掃描技術（fiber-optic array scanning technology，FAST）、微流體芯片技術（CTC-chip）等。
3.1 ICC
ICC基于腫瘤相關抗原或特異的標志物與單克隆抗體結合,通過顯色反應來判斷目的細胞，常用的腫瘤標志物分3類：①上皮細胞角蛋白（CK）；②上皮細胞膜特異性抗原；③腫瘤相關糖蛋白。該檢測方法簡便快捷，檢測試劑敏感性和特異性較高。但由于一些良性上皮增殖性疾病、手術、炎癥和組織創傷，造成一些上皮細胞進入外周血，這些細胞表面存在同樣的特異性抗原，易致假陽性的發生；同時，在上皮間質轉化過程中，一小部分CTCs表面特異性標志物減弱甚至丟失，導致假陰性的發生[12]。
3.2 Cellsearch系統
Cellsearch系統是一種半自動化的CTCs檢測系統，基于免疫磁珠富集法結合ICC檢測CTCs的技術。其基本流程為：固定上述免疫磁珠分離法富集的上皮細胞，使用CD45、CK8、CK18及CK19熒光抗體標記細胞，半自動四色熒光顯微鏡細胞監測分析儀進行分析，CK+/CD45-即為CTCs。目前Cellsearch系統已被美國FDA批準應用于轉移性乳腺癌、結直腸癌和前列腺癌的臨床檢測[13]，在評估患者的預后及治療方案的有效性方面已取得顯著成果。同樣，該系統在胰腺癌CTCs的檢測研究中也取得了一定的進展[14-18]。
3.3 微流體芯片技術
微流體芯片技術是一種基于微流體學和免疫學的CTCs檢測技術，2007年由Nagrath等[19]首先報道，該芯片表層上包被有EpCAM抗體，當外周血樣本（平均體積2.7 mL）流過芯片時，因抗原抗體反應，腫瘤細胞被芯片捕獲。該技術操作步驟簡單，樣本無需處理，具有較高的敏感性（可檢出108個血細胞中的1個靶細胞）和特異性，細胞回收率>65%。在此基礎上改進的V型芯片（herringbone-chip，HB-Chip）技術[20]，可以處理更大容量的血液樣本，進一步提高了腫瘤細胞的分離效率。
3.4 RT-PCR
RT-PCR是在PCR的基礎上擴增由腫瘤特異性mRNA序列逆轉錄的DNA片段，從而識別腫瘤細胞特異性的mRNA。該技術靈敏度高,可在107～108個外周血單核細胞中檢測出單個腫瘤細胞，但是由于核酸起源不明確（正常細胞表達靶基因、腫瘤細胞壞死或偽基因擴增等），RT-PCR檢測CTCs時，結果可能會出現假陽性，影響檢測的特異性。為了提高檢測的特異性和靈敏度，近幾年又開發出實時定量RT-PCR、熒光定量RT-PCR、巢氏RT-PCR等新方法，擴增效率高，特異性好，已被廣泛應用于實體腫瘤CTCs的檢測，如乳腺癌[21]、肝癌[22]、結直腸癌[23]、胰腺癌[24]等。
4 CTCs在胰腺癌中的應用
CTCs的檢測取樣方便，被譽為“實時液體活檢”，隨著時間的推移，重復檢測，可用來評估腫瘤的生物學功能和腫瘤細胞的傳播。同樣，在胰腺癌中，CTCs計數和分子特性的檢測有助于早期診斷、監測術后復發、評估化療效果及預后、選擇個體化的治療方案等。
4.1 CTCs與胰腺癌的診斷
CTCs在腫瘤形成的早期階段，就可以從原發灶脫落、經EMT轉化并進入外周血，鑒于此，很多學者認為CTCs可以提高腫瘤早期診斷效率，甚至在癌前病變期，預測腫瘤的發生：Hüsemann等[25]在乳腺癌早期小鼠模型和導管內原位癌患者的外周血中成功分離檢測到CTCs；Rhim等[26]在小鼠胰腺上皮內瘤變模型中也成功檢測出CTCs。在臨床上，CA19-9作為常用的胰腺癌腫瘤標志物，其特異性并不高，對胰腺囊性疾病、胰腺導管腺癌、胰腺神經內分泌瘤、胰腺上皮內瘤變等病變的鑒別困難，活檢組織病理學檢查作為診斷的金標準，由于其假陰性率高，常需反復多次穿刺，增加了額外的損傷和并發癥的發生，還可能造成腫瘤細胞的種植轉移，有時為了明確診斷，不得不開腹探查。劉艷輝等[27]采用免疫磁珠負性富集結合免疫熒光方法對69例胰腺癌患者進行CTCs檢測，CTCs的檢出率為88.41%，且CTCs的檢出情況和血清CA19-9升高水平具有密切相關性，認為CTCs是胰腺癌診斷的敏感指標，聯合CA19-9 與CTCs檢測可提高胰腺癌的診斷水平。Thege等[28]利用微流體技術平臺聯合使用EpCAM抗體及黏蛋白1 （MUC1）抗體檢測CTCs，能實現高效的捕獲，同時能提高早期胰腺癌的診斷效率。手術切除是早期胰腺癌的主要治療手段，復發和轉移是手術治療失敗的主要原因，也是影響患者生存期的重要因素，監測術后早期復發和轉移成為臨床上亟待解決的問題。研究[29-32]表明，CTCs的檢測有助于早期微轉移癌的診斷，尤其是對于那些腫瘤較小，在影像學上不能清晰顯示的微轉移瘤。
4.2 CTCs與胰腺癌化療
CTCs可以用來識別促進轉移和化學抗性的特定分子，從而有利于實施有針對性的干預新輔助和輔助治療，新輔助治療可以降低原發腫瘤分期，提高腫瘤的切除率；同時，能揭示腫瘤生物學的不同，以避免因為微轉移而導致胰十二指腸切除術后的死亡率。化療是胰腺癌除手術之外的主要治療手段之一，在化療前后CTCs檢測計數能夠有效地揭示腫瘤對化療藥物的抗性及預測化療效果。Torphy等[33]建立胰腺導管腺癌小鼠模型，隨機分為2組，分別使用BKM120和空白載體治療28 d，并于治療前后分別檢測CTCs，BKM120組CTCs計數治療后明顯減少（26.61個/250 μL比2.21個/250 μL，P=0.020 7），而空白載體組治療前后CTCs計數的差異無統計學意義（23.26個/250 μL比 11.89個/250 μL，P=0.808 1），該結果表明，CTCs計數分析是一種非侵入性的、可以預測和監測治療效果的有效方法。
4.3 CTCs與胰腺癌的預后
目前眾多研究表明，CTCs可以預測腫瘤的侵襲性，其存在提示預后較差：Sergeant等[34]對10例胰腺導管腺癌術后患者CTCs、血細胞、胰腺癌組織及正常胰腺組織進行基因組學分析，發現CTCs表達細胞活性基因信號P38 MAPK，且高表達者無進展生存期（P=0.041）和總生存期（P=0.047）相對較長，認為CTCs表達細胞活性基因信號可以評估胰腺癌術后生存期；de Albuquerque等[35]利用免疫磁珠富集法聯合RT-PCR（KRT19、MUC1、EPCAM、CEACAM5 及BIRC5）法檢測34例胰腺癌患者外周血CTCs，并分析CTCs與無進展生存期的相關性，結果顯示16例CTCs陽性患者的中位無進展生存期為66 d，CTCs陰性患者的中位無進展生存期為138 d，其差異有統計學意義（P=0.01）；Han等[36]檢索PUBMED、MEDLINE等多個數據庫共9個群組，對623例胰腺癌患者進行研究，其中268例CTCs陽性、355例CTCs陰性，CTCs陽性組有較短的無進展生存期（HR=1.89，95%CI=1.25～4.00，P<0.001），總生存期短（HR=1.23，95%CI=0.88～2.08，P<0.001），種族亞群分析同樣顯示在亞洲人和白種人中，CTCs陽性患者總生存期較短（P<0.05），結果表明CTCs陽性的胰腺癌患者無進展生存期和總生存期較陰性患者短，外周血CTCs的檢測可作為胰腺癌預后的標志。以上研究說明，CTCs在胰腺癌中是一個獨立的預后指標，外周血CTCs陽性的胰腺癌患者，無進展生存期及總生存期均較陰性患者短。
5 小結
CTCs的相關研究在腫瘤微轉移生物學方面有著重要意義,早期識別和控制轉移對胰腺癌的治療是至關重要的。CTCs的研究分析不僅可代表所有從原發胰腺腫瘤和轉移瘤脫落的腫瘤細胞,而且允許在臨床過程中多個時間點重復抽樣(動態抽樣)，從而能夠早期診斷腫瘤的復發和轉移；此外，胰腺CTCs能夠應用于癌細胞基因組,研究微小RNA和蛋白質表達,檢測耐藥克隆及以CTCs為目標的靶向治療。與乳腺癌、肺癌等其他惡性腫瘤不同,胰腺癌缺乏特異性的腫瘤標志物，目前尚沒有大規模、前瞻性的CTCs的研究能夠用來指導胰腺癌臨床治療。隨著現代生物學技術的發展，CTCs的研究將有利于深入了解胰腺癌播散、侵襲及轉移的確切分子機理，為胰腺癌個體化綜合治療以及新治療策略的探索提供更為有力的理論基礎。