引用本文： 錢金鋒, 楊其昌, 謝慧君, 劉宏斌, 張曉娟, 朱燕. 乳腺浸潤性導管癌中上皮間質轉化相關蛋白表達與臨床病理特征和預后的關系. 中國普外基礎與臨床雜志, 2015, 22(5): 591-596. doi: 10.7507/1007-9424.20150155 復制
乳腺癌已成為全世界范圍內威脅女性健康的主要殺手。據相關數據[1]顯示，我國女性每年新發乳腺癌達16.9萬，是女性第2位最常見惡性腫瘤，我國每年女性乳腺癌死亡約4.5萬，是女性第6位最常見的惡性腫瘤死亡原因。研究乳腺癌轉移的分子機制，從微觀的角度尋找可以判斷乳腺癌轉移潛力及影響轉移的相關因子，對提高乳腺癌的診治水平具有十分重要的意義。上皮間質轉化（epithelial mesenchymal transition，EMT）是指上皮細胞通過特定的程序轉化為具有間質細胞表型的生物學過程，是一個復雜的過程，首先上皮細胞的極性和細胞間的連接消失，緊接著出現間質細胞的特性，如間質細胞表型的表達、細胞的播散特性和能動性獲得增加，細胞向間質表型轉化[2]。EMT最早被發育生物學家發現，用來形容胚胎發育過程中，某些特定部位的上皮細胞所發生的形態學改變[3]。目前，其具體機制還不十分明確，可能與鈣連接素、生長因子、轉錄因子及微環境有關[4]。EMT在乳腺癌進展中的重要作用日益受到關注，發現與EMT相關的多條信號轉導通路和多種相關蛋白與乳腺癌相關，并在EMT過程中發揮重要的作用。本研究采用免疫組織化學方法檢測EMT相關蛋白的表達，探討其表達與乳腺浸潤性導管癌患者臨床病理特征及預后的關系。
1 資料與方法
1.1 研究對象
選取南通市瑞慈醫院病理科2002年11月至2010年8月期間的118例乳腺浸潤性導管癌患者的手術切除標本，術前均未接受放療或化療，患者均為女性，平均年齡51歲（32～84歲）。同時選取30例相應癌旁正常乳腺組織作對照。手術切除標本均經10%甲醛固定，常規石蠟包埋切片。
1.2 免疫組織化學染色方法檢測EMT相關蛋白Vimentin、E-cadherin和MMP2的蛋白表達
1.2.1 免疫組織化學染色方法
本研究所用的免疫組織化學試劑Vimentin、E-cadherin和MMP2均購置于北京中杉金橋生物技術有限公司。采用EliVisionTM plus免疫組織化學染色法[5]操作：①切片脫蠟水化，制成4μm厚連續切片；②抗原熱修復處理，入Citrate檸檬酸抗原修復液（0.01 mol/L，pH 6.0），微波高火煮沸10 min；③室溫自然冷卻，入內源性過氧化酶阻斷劑10 min；④經磷酸鹽緩沖液（0.1 mol/L，pH7.4）沖洗3次，每次2 min，加入單抗Vimentin、E-cadherin和MMP2，37℃恒溫箱孵育30 min；⑤磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次2 min，加二氨基聯苯胺四鹽酸（DAB）顯色；⑥蒸餾水沖洗后，蘇木精復染，磷酸鹽緩沖液代替單抗作陰性對照，以試劑盒提供的已知陽性切片作為陽性對照。
1.2.2 免疫組織化學染色結果判斷標準
Vimentin [6]陽性細胞著色定位于癌細胞質，腫瘤細胞無著色記為陰性（-），≤50%的腫瘤細胞胞質著色記為陽性（+），> 50%的腫瘤細胞胞質著色記為陽性（++）。E-cadherin [7]在正常的乳腺組織中表達于細胞膜，在腫瘤細胞中E-cadherin表達下降或消失，在腫瘤細胞胞膜無著色記為陰性（-），≤50%的腫瘤細胞胞膜著色記為陽性（+），> 50%的腫瘤細胞胞膜著色記為陽性（++）。MMP2陽性細胞著色定位于癌細胞胞質，腫瘤細胞無著色記為陰性（-），≤50%的腫瘤細胞胞質著色記為陽性（+），> 50%的腫瘤細胞胞質著色記為陽性（++）。
1.3 統計學方法
運用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計數資料采用雙側卡方檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析。對有隨訪結果的病例進行單因素分析用log-rank檢驗并做出Kaplan-Meier生存曲線。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 EMT相關蛋白的表達情況
EMT相關蛋白Vimentin、E-cadherin、MMP2在乳腺浸潤性導管癌組織中的免疫組織化學染色結果見圖 1～3。118例乳腺浸潤性導管癌中Vimentin的表達陽性率明顯高于癌旁正常乳腺組織（50.8%比10.0%，P < 0.05），E-cadherin的表達陽性率明顯低于癌旁正常乳腺組織（56.8%比93.3%，P < 0.05），MMP2的表達陽性率明顯高于癌旁正常乳腺組織（63.6%比6.7%，P < 0.05），見表 1。
圖1
Vimentin在乳腺浸潤性導管癌中不同程度的表達（Elivison??×200）。1A：Vimentin（-）；1B：Vimentin（+）；1C：Vimentin（++）??圖 2??E-cadherin在乳腺浸潤性導管癌中不同程度的表達（Elivison??×200）。2A：E-cadherin（-）；2B：E-cadherin（+）；2C：E-cadherin（++）??圖 3??MMP2在乳腺浸潤性導管癌中不同程度的表達（Elivison??×200）。3A：MMP2（-）；3B：MMP2（+）；3C：MMP2（++）
表1
EMT相關蛋白Vimentin、E-cadherin、MMP2在乳腺浸潤性導管癌組織和癌旁正常組織中的表達情況（例）
2.2 EMT相關蛋白的表達與乳腺浸潤性導管癌患者臨床病理因素的關系
2.2.1 Vimentin蛋白
Vimentin蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達與患者的淋巴結轉移及TNM分期呈正相關（分別rs=0.346，P < 0.05；rs=0.231，P < 0.05），與患者的年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學分級無關（P > 0.05）。見表 2。
表2
乳腺浸潤性導管癌組織中EMT相關蛋白的表達與患者臨床病理特征的關系（例）
2.2.2 E-cadherin蛋白
E-cadherin蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達與患者的腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級和TNM分期呈負相關（分別rs=-0.444，P < 0.05；rs=-0.493，P < 0.05；rs=-0.323，P < 0.05；rs=-0.474，P < 0.05），而與與患者的年齡、腫瘤部位無關（P > 0.05）。見表 2。
2.2.3 MMP2蛋白
MMP2蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達與腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級和TNM分期呈正相關（分別rs=0.361，P < 0.05；rs=0.434，P < 0.05；rs=0.396，P < 0.05；rs=0.376，P < 0.05），而與與患者的年齡、腫瘤部位無關（P > 0.05）。見表 2。
2.3 乳腺浸潤性導管癌EMT相關蛋白的表達與預后的相關性
本組病例隨訪1～98個月，平均79個月，共隨訪到102例，隨訪率為86.4%（102/118），失訪率為13.6%（16/118）。有36例死亡，其中35例死于乳腺癌，1例死于其他因素。19例術后發生轉移，6例術后復發，同時發生復發和轉移的病例2例。1年、3年、5年總生存率分別為95.1%（97/102）、81.4%（83/102）及65.7%（67/102）。對102例乳腺浸潤性導管癌病例隨訪結果進行單因素分析，用log-rank檢驗及Kaplan-Meier生存曲線分析乳腺浸潤性導管癌中EMT相關蛋白表達與預后的關系，結果顯示：Vimentin（++）表達組、（+）表達組及（-）表達組5年總生存率分別為0（0/16）、59.0%（23/39）及93.6%（44/47），Vimentin陽性表達越強，無瘤生存時間越短（P < 0.05），見圖 4；E-cadherin（++）表達組、（+）表達組及（-）表達組5年總生存率分別為88.9%（16/18）、75.0%（27/36）及50.0%（24/48），E-cadherin陽性表達越強，無瘤生存時間越長（P < 0.05），見圖 5；MMP2（++）表達組、（+）表達組及（+）表達組5年總生存率分別為40.0%（8/20）、55.3%（26/47）及94.3%（33/35），MMP2陽性表達越強，無瘤生存時間越短（P < 0.05），見圖 6。
圖4
乳腺浸潤性導管癌Vimentin的表達對預后影響的生存曲線??圖 5??乳腺浸潤性導管癌E-cadherin的表達對預后影響的生存曲線??圖 6??乳腺浸潤性導管癌MMP2的表達對預后影響的生存曲線
3 討論
EMT是上皮細胞失去其本質特征、獲得間質表型與特性的一種生物學行為。發生EMT的細胞其E-cadherin等上皮標記表達減少或缺失，Vimentin等間質標記表達增加或增強[8-10]。研究[11-12]發現，多種蛋白和多條信號通路與乳腺癌的EMT相關，并在這一過程中發揮重要作用，在EMT發生過程中表達增加的蛋白有Vimentin、MMP2等，表達降低的蛋白有E-cadherin等。
3.1 EMT相關蛋白與乳腺浸潤性導管癌患者臨床病理特征的關系分析
3.1.1 Vimentin蛋白
Vimentin是一種細胞骨架蛋白，特異性地分布在間質細胞中，在上皮細胞中基本不表達。本研究結果發現，Vimentin蛋白表達隨著乳腺浸潤性導管癌淋巴結有轉移及TNM分期的升高而增加或增強，且呈正相關。結果提示，Vimentin是乳腺浸潤性導管癌浸潤轉移的生物學標志。
3.1.2 E-cadherin蛋白
E-cadherin是維持上皮細胞間的黏附分子之一，其對維持上皮細胞間的黏附、抑制腫瘤侵襲轉移具有重要的作用。E-cadherin是上皮表型的看護者，其表達降低或缺失，可使細胞之間的極性丟失，黏附力下降，使細胞表現出非上皮細胞的特征。本研究結果發現，E-cadherin蛋白表達隨著乳腺浸潤性導管癌腫瘤大小的增加、有轉移、組織學分級和TNM分期的升高而減弱或降低，且呈負相關。與Miladi-Abdennadher等[13]對70例結直腸癌樣本的研究報道和蘇云濤等[14]對242例乳腺浸潤性導管癌樣本的研究報道結果一致。結果提示，E-cadherin表達水平的減弱或降低導致細胞之間的黏附力下降，細胞容易分離，從而容易發生浸潤和轉移。
3.1.3 MMP2蛋白
MMP2是一種參與修飾和降解細胞外基質的蛋白酶家族中的成員，能夠促進上皮細胞與周圍組織的分離，在胚胎發育、組織修復和腫瘤的侵襲轉移過程中發揮著重要的作用。MMP2由腫瘤細胞和腫瘤間質細胞以酶原的形式分泌水解后激活，能特異性地降解層黏連蛋白和Ⅳ型膠原（基底膜的主要成分），還可降解纖連蛋白、明膠以及Ⅴ、Ⅵ、Ⅹ型膠原[15]。MMP2還可以使細胞間的黏附力下降，促進腫瘤細胞在血管中積聚以及穿出血管形成轉移病灶[16]，并且能夠通過刺激血管內皮細胞DNA的合成，促進血管生長因子的釋放，促進腫瘤新生毛細血管的生成[17]。此外，MMP2還能夠使腫瘤細胞分泌各種生長因子，增強腫瘤細胞的增殖[18]，誘導腫瘤細胞逃逸凋亡和免疫，從而促進腫瘤細胞的生長和轉移[19]。當細胞惡變時常常伴有MMP2的升高，在多種惡性腫瘤細胞中，發現MMP2表達的增高隨著腫瘤惡性程度的增高而增高，并且MMP2的表達與腫瘤的浸潤和轉移相關[20]。本研究結果發現，MMP2蛋白表達隨著乳腺浸潤性導管癌腫瘤大小的增加、有轉移、組織學分級和TNM分期的升高而增加或增強，且呈正相關。
上述對乳腺浸潤性導管癌EMT發生與患者的臨床病理因素（年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級、TNM分期）之間的相關性的研究結果與文獻[21-27]報道基本一致，臨床可以通過觀察乳腺浸潤性導管癌EMT現象有助于預測癌病理分級和臨床分期。
3.2 EMT相關蛋白與乳腺浸潤性導管癌患者預后關系的分析
乳腺浸潤性導管癌Vimentin表達（++）組、（+）組及（-）組5年總生存率分別為0（0/16）、59.0%（23/39）及93.6%（44/47），隨著Vimentin陽性表達的減弱或降低，患者無瘤生存時間和生存率而逐漸升高，即Vimentin的陽性表達越強，乳腺浸潤性導管癌患者無瘤生存時間越短。E-cadherin表達（++）組、（+）組及（-）組5年總生存率分別為88.9%（16/18）、75.0%（27/36）、50.0%（24/48），隨著E-cadherin的陽性表達的減弱或降低，患者無瘤生存時間和生存率而逐漸降低，即E-cadherin的陽性表達越強，乳腺浸潤性導管癌患者無瘤生存時間越長。MMP2表達（++）組、（+）組及（-）組5年總生存率分別為40%（8/20）、55.3%（26/47）、94.3%（33/35），隨著MMP2的陽性表達的減弱或降低，患者無瘤生存時間和生存率而逐漸升高，即MMP2的陽性表達越強，乳腺浸潤性導管癌患者無瘤生存時間越短。本研究結果表明，EMT現象與乳腺浸潤性導管癌患者的預后相關，其可以作為乳腺浸潤性導管癌的獨立預后因子。
綜上所述，臨床通過聯合檢測乳腺浸潤性導管癌EMT相關蛋白Vimentin、E-cadherin、MMP2可能能夠預測腫瘤病理分級和臨床分期以及有效預測浸潤性導管癌患者的預后。
乳腺癌已成為全世界范圍內威脅女性健康的主要殺手。據相關數據[1]顯示，我國女性每年新發乳腺癌達16.9萬，是女性第2位最常見惡性腫瘤，我國每年女性乳腺癌死亡約4.5萬，是女性第6位最常見的惡性腫瘤死亡原因。研究乳腺癌轉移的分子機制，從微觀的角度尋找可以判斷乳腺癌轉移潛力及影響轉移的相關因子，對提高乳腺癌的診治水平具有十分重要的意義。上皮間質轉化（epithelial mesenchymal transition，EMT）是指上皮細胞通過特定的程序轉化為具有間質細胞表型的生物學過程，是一個復雜的過程，首先上皮細胞的極性和細胞間的連接消失，緊接著出現間質細胞的特性，如間質細胞表型的表達、細胞的播散特性和能動性獲得增加，細胞向間質表型轉化[2]。EMT最早被發育生物學家發現，用來形容胚胎發育過程中，某些特定部位的上皮細胞所發生的形態學改變[3]。目前，其具體機制還不十分明確，可能與鈣連接素、生長因子、轉錄因子及微環境有關[4]。EMT在乳腺癌進展中的重要作用日益受到關注，發現與EMT相關的多條信號轉導通路和多種相關蛋白與乳腺癌相關，并在EMT過程中發揮重要的作用。本研究采用免疫組織化學方法檢測EMT相關蛋白的表達，探討其表達與乳腺浸潤性導管癌患者臨床病理特征及預后的關系。
1 資料與方法
1.1 研究對象
選取南通市瑞慈醫院病理科2002年11月至2010年8月期間的118例乳腺浸潤性導管癌患者的手術切除標本，術前均未接受放療或化療，患者均為女性，平均年齡51歲（32～84歲）。同時選取30例相應癌旁正常乳腺組織作對照。手術切除標本均經10%甲醛固定，常規石蠟包埋切片。
1.2 免疫組織化學染色方法檢測EMT相關蛋白Vimentin、E-cadherin和MMP2的蛋白表達
1.2.1 免疫組織化學染色方法
本研究所用的免疫組織化學試劑Vimentin、E-cadherin和MMP2均購置于北京中杉金橋生物技術有限公司。采用EliVisionTM plus免疫組織化學染色法[5]操作：①切片脫蠟水化，制成4μm厚連續切片；②抗原熱修復處理，入Citrate檸檬酸抗原修復液（0.01 mol/L，pH 6.0），微波高火煮沸10 min；③室溫自然冷卻，入內源性過氧化酶阻斷劑10 min；④經磷酸鹽緩沖液（0.1 mol/L，pH7.4）沖洗3次，每次2 min，加入單抗Vimentin、E-cadherin和MMP2，37℃恒溫箱孵育30 min；⑤磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次2 min，加二氨基聯苯胺四鹽酸（DAB）顯色；⑥蒸餾水沖洗后，蘇木精復染，磷酸鹽緩沖液代替單抗作陰性對照，以試劑盒提供的已知陽性切片作為陽性對照。
1.2.2 免疫組織化學染色結果判斷標準
Vimentin [6]陽性細胞著色定位于癌細胞質，腫瘤細胞無著色記為陰性（-），≤50%的腫瘤細胞胞質著色記為陽性（+），> 50%的腫瘤細胞胞質著色記為陽性（++）。E-cadherin [7]在正常的乳腺組織中表達于細胞膜，在腫瘤細胞中E-cadherin表達下降或消失，在腫瘤細胞胞膜無著色記為陰性（-），≤50%的腫瘤細胞胞膜著色記為陽性（+），> 50%的腫瘤細胞胞膜著色記為陽性（++）。MMP2陽性細胞著色定位于癌細胞胞質，腫瘤細胞無著色記為陰性（-），≤50%的腫瘤細胞胞質著色記為陽性（+），> 50%的腫瘤細胞胞質著色記為陽性（++）。
1.3 統計學方法
運用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計數資料采用雙側卡方檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析。對有隨訪結果的病例進行單因素分析用log-rank檢驗并做出Kaplan-Meier生存曲線。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 EMT相關蛋白的表達情況
EMT相關蛋白Vimentin、E-cadherin、MMP2在乳腺浸潤性導管癌組織中的免疫組織化學染色結果見圖 1～3。118例乳腺浸潤性導管癌中Vimentin的表達陽性率明顯高于癌旁正常乳腺組織（50.8%比10.0%，P < 0.05），E-cadherin的表達陽性率明顯低于癌旁正常乳腺組織（56.8%比93.3%，P < 0.05），MMP2的表達陽性率明顯高于癌旁正常乳腺組織（63.6%比6.7%，P < 0.05），見表 1。
圖1
Vimentin在乳腺浸潤性導管癌中不同程度的表達（Elivison??×200）。1A：Vimentin（-）；1B：Vimentin（+）；1C：Vimentin（++）??圖 2??E-cadherin在乳腺浸潤性導管癌中不同程度的表達（Elivison??×200）。2A：E-cadherin（-）；2B：E-cadherin（+）；2C：E-cadherin（++）??圖 3??MMP2在乳腺浸潤性導管癌中不同程度的表達（Elivison??×200）。3A：MMP2（-）；3B：MMP2（+）；3C：MMP2（++）
表1
EMT相關蛋白Vimentin、E-cadherin、MMP2在乳腺浸潤性導管癌組織和癌旁正常組織中的表達情況（例）
2.2 EMT相關蛋白的表達與乳腺浸潤性導管癌患者臨床病理因素的關系
2.2.1 Vimentin蛋白
Vimentin蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達與患者的淋巴結轉移及TNM分期呈正相關（分別rs=0.346，P < 0.05；rs=0.231，P < 0.05），與患者的年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學分級無關（P > 0.05）。見表 2。
表2
乳腺浸潤性導管癌組織中EMT相關蛋白的表達與患者臨床病理特征的關系（例）
2.2.2 E-cadherin蛋白
E-cadherin蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達與患者的腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級和TNM分期呈負相關（分別rs=-0.444，P < 0.05；rs=-0.493，P < 0.05；rs=-0.323，P < 0.05；rs=-0.474，P < 0.05），而與與患者的年齡、腫瘤部位無關（P > 0.05）。見表 2。
2.2.3 MMP2蛋白
MMP2蛋白在乳腺浸潤性導管癌組織中的陽性表達與腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級和TNM分期呈正相關（分別rs=0.361，P < 0.05；rs=0.434，P < 0.05；rs=0.396，P < 0.05；rs=0.376，P < 0.05），而與與患者的年齡、腫瘤部位無關（P > 0.05）。見表 2。
2.3 乳腺浸潤性導管癌EMT相關蛋白的表達與預后的相關性
本組病例隨訪1～98個月，平均79個月，共隨訪到102例，隨訪率為86.4%（102/118），失訪率為13.6%（16/118）。有36例死亡，其中35例死于乳腺癌，1例死于其他因素。19例術后發生轉移，6例術后復發，同時發生復發和轉移的病例2例。1年、3年、5年總生存率分別為95.1%（97/102）、81.4%（83/102）及65.7%（67/102）。對102例乳腺浸潤性導管癌病例隨訪結果進行單因素分析，用log-rank檢驗及Kaplan-Meier生存曲線分析乳腺浸潤性導管癌中EMT相關蛋白表達與預后的關系，結果顯示：Vimentin（++）表達組、（+）表達組及（-）表達組5年總生存率分別為0（0/16）、59.0%（23/39）及93.6%（44/47），Vimentin陽性表達越強，無瘤生存時間越短（P < 0.05），見圖 4；E-cadherin（++）表達組、（+）表達組及（-）表達組5年總生存率分別為88.9%（16/18）、75.0%（27/36）及50.0%（24/48），E-cadherin陽性表達越強，無瘤生存時間越長（P < 0.05），見圖 5；MMP2（++）表達組、（+）表達組及（+）表達組5年總生存率分別為40.0%（8/20）、55.3%（26/47）及94.3%（33/35），MMP2陽性表達越強，無瘤生存時間越短（P < 0.05），見圖 6。
圖4
乳腺浸潤性導管癌Vimentin的表達對預后影響的生存曲線??圖 5??乳腺浸潤性導管癌E-cadherin的表達對預后影響的生存曲線??圖 6??乳腺浸潤性導管癌MMP2的表達對預后影響的生存曲線
3 討論
EMT是上皮細胞失去其本質特征、獲得間質表型與特性的一種生物學行為。發生EMT的細胞其E-cadherin等上皮標記表達減少或缺失，Vimentin等間質標記表達增加或增強[8-10]。研究[11-12]發現，多種蛋白和多條信號通路與乳腺癌的EMT相關，并在這一過程中發揮重要作用，在EMT發生過程中表達增加的蛋白有Vimentin、MMP2等，表達降低的蛋白有E-cadherin等。
3.1 EMT相關蛋白與乳腺浸潤性導管癌患者臨床病理特征的關系分析
3.1.1 Vimentin蛋白
Vimentin是一種細胞骨架蛋白，特異性地分布在間質細胞中，在上皮細胞中基本不表達。本研究結果發現，Vimentin蛋白表達隨著乳腺浸潤性導管癌淋巴結有轉移及TNM分期的升高而增加或增強，且呈正相關。結果提示，Vimentin是乳腺浸潤性導管癌浸潤轉移的生物學標志。
3.1.2 E-cadherin蛋白
E-cadherin是維持上皮細胞間的黏附分子之一，其對維持上皮細胞間的黏附、抑制腫瘤侵襲轉移具有重要的作用。E-cadherin是上皮表型的看護者，其表達降低或缺失，可使細胞之間的極性丟失，黏附力下降，使細胞表現出非上皮細胞的特征。本研究結果發現，E-cadherin蛋白表達隨著乳腺浸潤性導管癌腫瘤大小的增加、有轉移、組織學分級和TNM分期的升高而減弱或降低，且呈負相關。與Miladi-Abdennadher等[13]對70例結直腸癌樣本的研究報道和蘇云濤等[14]對242例乳腺浸潤性導管癌樣本的研究報道結果一致。結果提示，E-cadherin表達水平的減弱或降低導致細胞之間的黏附力下降，細胞容易分離，從而容易發生浸潤和轉移。
3.1.3 MMP2蛋白
MMP2是一種參與修飾和降解細胞外基質的蛋白酶家族中的成員，能夠促進上皮細胞與周圍組織的分離，在胚胎發育、組織修復和腫瘤的侵襲轉移過程中發揮著重要的作用。MMP2由腫瘤細胞和腫瘤間質細胞以酶原的形式分泌水解后激活，能特異性地降解層黏連蛋白和Ⅳ型膠原（基底膜的主要成分），還可降解纖連蛋白、明膠以及Ⅴ、Ⅵ、Ⅹ型膠原[15]。MMP2還可以使細胞間的黏附力下降，促進腫瘤細胞在血管中積聚以及穿出血管形成轉移病灶[16]，并且能夠通過刺激血管內皮細胞DNA的合成，促進血管生長因子的釋放，促進腫瘤新生毛細血管的生成[17]。此外，MMP2還能夠使腫瘤細胞分泌各種生長因子，增強腫瘤細胞的增殖[18]，誘導腫瘤細胞逃逸凋亡和免疫，從而促進腫瘤細胞的生長和轉移[19]。當細胞惡變時常常伴有MMP2的升高，在多種惡性腫瘤細胞中，發現MMP2表達的增高隨著腫瘤惡性程度的增高而增高，并且MMP2的表達與腫瘤的浸潤和轉移相關[20]。本研究結果發現，MMP2蛋白表達隨著乳腺浸潤性導管癌腫瘤大小的增加、有轉移、組織學分級和TNM分期的升高而增加或增強，且呈正相關。
上述對乳腺浸潤性導管癌EMT發生與患者的臨床病理因素（年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級、TNM分期）之間的相關性的研究結果與文獻[21-27]報道基本一致，臨床可以通過觀察乳腺浸潤性導管癌EMT現象有助于預測癌病理分級和臨床分期。
3.2 EMT相關蛋白與乳腺浸潤性導管癌患者預后關系的分析
乳腺浸潤性導管癌Vimentin表達（++）組、（+）組及（-）組5年總生存率分別為0（0/16）、59.0%（23/39）及93.6%（44/47），隨著Vimentin陽性表達的減弱或降低，患者無瘤生存時間和生存率而逐漸升高，即Vimentin的陽性表達越強，乳腺浸潤性導管癌患者無瘤生存時間越短。E-cadherin表達（++）組、（+）組及（-）組5年總生存率分別為88.9%（16/18）、75.0%（27/36）、50.0%（24/48），隨著E-cadherin的陽性表達的減弱或降低，患者無瘤生存時間和生存率而逐漸降低，即E-cadherin的陽性表達越強，乳腺浸潤性導管癌患者無瘤生存時間越長。MMP2表達（++）組、（+）組及（-）組5年總生存率分別為40%（8/20）、55.3%（26/47）、94.3%（33/35），隨著MMP2的陽性表達的減弱或降低，患者無瘤生存時間和生存率而逐漸升高，即MMP2的陽性表達越強，乳腺浸潤性導管癌患者無瘤生存時間越短。本研究結果表明，EMT現象與乳腺浸潤性導管癌患者的預后相關，其可以作為乳腺浸潤性導管癌的獨立預后因子。
綜上所述，臨床通過聯合檢測乳腺浸潤性導管癌EMT相關蛋白Vimentin、E-cadherin、MMP2可能能夠預測腫瘤病理分級和臨床分期以及有效預測浸潤性導管癌患者的預后。
