引用本文： 姜廣斌, 劉磊, 孫萬邦, 楊吉成, 郭錦錦. 腺病毒介導的白細胞介素-24基因對Karpas299細胞增殖與凋亡影響的實驗研究. 中國普外基礎與臨床雜志, 2015, 22(3): 284-288. doi: 10.7507/1007-9424.20150077 復制
間變性大細胞淋巴瘤（anaplastic large-cell lymphoma，ALCL）是兒童非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）的一個亞型[1]。有報道[2]稱其在兒童NHL中所占的比例為10%～15%。ALCL的臨床表現以皮膚和軟組織腫塊多見，緩解率高，但復發率也高[3]。人白細胞介素-24（human interleukin-24，hIL-24）基因是一種新近發現的抑癌基因。研究[4]發現，白細胞介素-24（IL-24）基因可通過誘導細胞凋亡和調控細胞周期而發揮抗腫瘤的生物學作用。近十年來，隨著人們對腫瘤免疫、腫瘤病因、腫瘤發生發展分子機理等研究的深入，腫瘤的基因治療突顯了誘人的前景。IL-24基因作為一種新型的抑癌基因，其抗癌特性為NHL的治療帶來了新的希望。國內涉及腺病毒介導的白細胞介素-24基因（Ad-IL-24）對Karpas299細胞的抑制效應及其促凋亡作用的相關研究較少，故本實驗以ALCL Karpas299細胞為研究對象，研究了Ad-IL-24對Karpas299細胞生長及凋亡的影響，以期為ALCL的新型基因治療策略提供理論和實驗依據。
1 材料及方法
1.1 主要試劑及儀器
Ad-IL-24 〔該病毒也攜帶綠色熒光蛋白（GFP）基因〕、攜帶GFP基因的重組腺病毒（Ad-GFP，即空載體腺病毒）及QBI-293A細胞均由蘇州大學楊吉成教授提供，Karpas299細胞由遵義醫學院病理學教研室鄧飛教授惠贈。RPMI 1640培養液購于Gibco公司，胎牛血清購于Hcylone公司，細胞毒性與增殖檢測試劑盒（CCK-8試劑盒）購于東仁化學科技（上海）有限公司，膜聯蛋白V-異硫氰酸熒光素（Ann-exin V-FITC）細胞凋亡檢測試劑盒購于BD公司，Hoechst33342核熒光染液購于南京凱基生物有限公司。設備：1X71倒置熒光顯微鏡（日本奧林巴斯公司）、CyFlow Cube流式細胞儀（德國Partec公司）、DMI4000B倒置顯微鏡和Elx-800型全自動酶標儀（德國萊卡公司），以及ScientificTm8000 CO2培養箱（美國Thermo公司）。
1.2 方法
1.2.1 QBI-293A細胞和Karpas299細胞的培養
將QBI-293A細胞和Karpas299細胞分別放置于含10% FBS的RPMI 1640培養液中，在37 ℃、5% CO2培養箱中培養。在倒置顯微鏡下觀察細胞的生長形態，當細胞生長融合接近80.0%時，將細胞進行消化并傳代。2種細胞的消化操作略有不同。QBI-293A細胞：將瓶內舊培養液倒掉，加入0.25%胰酶0.2 mL，待胰酶鋪滿瓶底時輕微晃動瓶身1 min后放入培養箱中；在倒置顯微鏡下觀察，至細胞變圓、開始脫落時，將培養瓶置于超凈臺內，加入4.0～5.0 mL含10%胎牛血清的培養基以終止消化。用吸管輕柔吹打細胞以制成細胞懸液（密度約為1×105個/mL）。Karpas299細胞：用75%乙醇擦拭培養瓶外表后移入超凈臺內，將瓶內培養液和細胞吸入無菌離心管中離心（800 r/min，r=10 cm，10 min），使細胞與培養液分離；離心后倒掉上清液，于離心管內加入4.0～5.0 mL新鮮培養基，用吸管輕柔吹打細胞以制成細胞懸液（密度為1×105個/mL）。將制備的細胞懸液平均分裝于2個培養瓶中（各2.0～2.5 mL），再加入含10% FBS的RPMI 1640培養液至5.0 mL，置于37 ℃、5% CO2培養箱中進行培養，均傳7代。
1.2.2 Ad-IL-24和Ad-GFP的擴增及其效價的測定
將已經構建好的Ad-IL-24（Ad-IL-24組）和Ad-GFP（Ad-GFP組）按汪小華等[5]介紹的方法分別感染單層貼壁的QBI-293A細胞，經過多輪擴增以獲得高效價的病毒，并測定病毒效價，方法參考文獻[5]。另以不感染任何病毒的QBI-293A細胞作為空白對照組。3組細胞均于培養24 h時采用倒置熒光顯微鏡觀察細胞形態，并計數200個細胞中的GFP陽性細胞數，以確定感染效率。感染效率（%）=GFP陽性細胞數/200×100%。
1.2.3 流式細胞儀檢測Karpas299細胞的細胞凋亡率
取對數生長期的Karpas299細胞，制成細胞懸液，調整細胞密度為1×106個/mL，將其接種于6孔板中，每孔1.0 mL。將細胞分為3組：一組加入200.0 μLAd-IL-24原液以感染細胞（Ad-IL-24組），一組加入200.0 μL Ad-GFP原液以感染細胞（Ad-GFP組），另一組加入200.0 μL PBS溶液（空白對照組）。3組細胞均置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養。收集上述3組培養48 h后的Karpas299細胞制成細胞懸液，調整細胞密度為1×107個/mL，取1.0 mL細胞懸液加入500.0 μL Binding Buffer以懸浮細胞，再加入5.0 μL Annexin V-FITC和5.0 μL碘化丙啶（PI）混勻，室溫靜置，避光反應15 min。最后以流式細胞儀檢測3組Karpas299細胞的凋亡率。3組均設3個復孔，實驗重復3次。
1.2.4 Hoechst33342核熒光染色觀察細胞凋亡形態
取上述培養48 h后的3組Karpas299細胞懸液，用預溫的PBS溶液清洗3次，每次15 min，再以4%多聚甲醛于室溫下固定15 min。將Hoechst33342染液覆蓋于細胞表面，置于37 ℃、5% CO2培養箱內染色15 min后，置于倒置熒光顯微鏡下觀察細胞形態。
1.2.5 CCK-8法檢測Karpas299細胞的細胞增殖抑制率
3組Karpas299細胞分別于培養12、24及48 h時，加入10.0 μL CCK-8試劑，于孵箱孵育1 h后（37 ℃、5% CO2），以酶標儀測定3組細胞的吸光度值（A值），計算細胞增殖抑制率。計算公式為：細胞增殖抑制率（%）=（A空白對照組-A實驗組）/A空白對照組×100%（實驗組指上述3個組別）。3組各時點均設3個復孔，實驗重復3次。
1.3 統計學方法
采用SPSS 11.5軟件進行統計學分析。計量資料以均數±標準差（
2 結果
2.1 Ad-IL-24和Ad-GFP的擴增及其效價測定結果
將3組QBI-293A細胞培養24 h后，于倒置熒光顯微鏡下觀察。白光下空白對照組的細胞排列規則，密度均勻；Ad-GFP組及Ad-IL-24組的細胞變圓并脫落，呈網狀或者葡萄狀聚集，均出現細胞的病理效應（CPE），見圖 1。熒光下空白對照組未見熒光；Ad-GFP組可見大量熒光，感染效率為90.0%；Ad-IL-24組也可見大量熒光，感染效率為95.0%（圖 2）。Ad-IL-24和Ad-GFP的病毒效價最初并不一樣，但為保證實驗的準確性，故進行適當的調整使其一致，最終病毒效價均調整為1×108 pfu/mL。
圖1
示培養24 h時3組QBI-293A細胞的白光觀察結果（倒置熒光顯微鏡 ×100）。1A：空白對照組，細胞生長良好；1B：Ad-GFP組的QBI-293A細胞出現CPE（紅箭）；1C：Ad-IL-24組的QBI-293A細胞出現CPE（紅箭） ? ?圖 2 示培養24 h時3組QBI-293A細胞的熒光觀察結果（倒置熒光顯微鏡 ×100）。2A：空白對照組未見熒光細胞；2B：Ad-GFP組見大量熒光細胞；2C：Ad-IL-24組見大量熒光細胞 ? ?圖 3 示培養48 h時3組Karpas299細胞的凋亡率檢測結果。3A：空白對照組；3B：Ad-GFP組；3C：Ad-IL-24組 ? ?圖 4 示培養48 h時3組Karpas299細胞凋亡形態的熒光觀察結果（倒置熒光顯微鏡 ×200）。4A：空白對照組的細胞呈微弱的藍色熒光；4B：Ad-GFP組的細胞呈微弱的藍色熒光；4C：Ad-IL-24組的細胞呈強亮藍色熒光（紅箭）
2.2 3組Karpas299細胞的凋亡率結果
流式細胞儀的檢測結果顯示，空白對照組Karpas299細胞的細胞凋亡率為（1.1±0.5）%，Ad-GFP組為（3.1±0.9）%，Ad-IL-24組為（41.2±1.9）%。與空白對照組及Ad-GFP組相比較，Ad-IL-24組的細胞凋亡率較高（P<0.05），而空白對照組與Ad-GFP組間細胞凋亡率的差異無統計學意義（P>0.05），見圖 3。
2.3 3組Karpas299細胞的凋亡形態觀察結果
以Hoechst33342染液染色后，于倒置熒光顯微鏡下觀察，空白對照組與Ad-GFP組的Karpas299細胞均呈微弱的藍色熒光；Ad-IL-24組的Karpas299細胞出現典型的細胞凋亡形態改變，即細胞體積變小，染色質濃集和邊緣化，且呈強亮藍色熒光（圖 4）。
2.4 3組Karpas299細胞的細胞增殖抑制率結果
Ad-IL-24組和Ad-GFP組3個時點的細胞增殖抑制率結果見圖 5。由圖 5可見，各時點Ad-IL-24組和Ad-GFP組的細胞增殖抑制率均不為0，提示Ad-IL-24和Ad-GFP均對Karpas299細胞的生長發揮抑制作用；隨時間延長，Ad-IL-24組的細胞增殖抑制率呈上升趨勢，而Ad-GFP組的變化不大；同時點與Ad-GFP組比較，各時點Ad-IL-24組的細胞增殖抑制率均較高（P<0.05）。該結果提示，Ad-IL-24對Karpas299細胞的生長抑制呈時間依賴性，且其抑制效果優于Ad-GFP。
圖2
各時點Ad-GFP組和Ad-IL-24組Karpas299細胞的增殖抑制率結果。同時點與Ad-GFP組比較，* P<0.05
3 討論
WHO造血淋巴組織腫瘤分類小組明確將ALCL分為間變性淋巴瘤激酶（ALK）陽性與ALK陰性兩類[6]。ALK陽性ALCL好發于兒童與青少年，主要累及淋巴結或結外，臨床上具有侵襲行為，其存在t（2；5）（p23；q35）易位[7]。目前，淋巴瘤的標準治療方法為藥物化療，最常用的化療方案為CHOP方案（包括環磷酰胺、阿霉素、長春新堿及潑尼松），同時輔以放療[8]。而針對ALCL的主要治療方案為按照B-NHL的方案進行短期高強度化療聯合放療[9]，如CHOP+MTX方案，但放化療可導致嚴重的副作用，如引起粒細胞缺乏，導致吞噬細胞功能障礙而使患兒更易并發嚴重感染[10]。研究[11]發現，因兒童化療常使用免疫抑制劑而導致患兒更易感染，且惡性腫瘤性疾病是病原菌血培養陽性的危險因素。此外，臨床有ALCL患兒化療后致免疫力低下而死于感染的報道[12]。故亟待探索新的ALCL的治療方法。
IL-24基因作為一種新型的抑癌基因，最初在人黑色素瘤細胞中被發現，因此被命名為黑色素瘤分化相關基因7（mda-7）[13]。之后發現，mda-7基因的結構和序列與IL-10家族具有同源性[14]，但與IL-10在免疫功能上存在拮抗性，故2002年Caudell等[15]將其重新命名為IL-24基因。研究表明，Ad-IL-24誘導的細胞凋亡具有廣譜性和靶向性，能抑制腎癌[16]、子宮頸癌[17]、肝癌[18]、直腸癌[19]及前列腺癌[20]組織的生長。本課題組前期的研究[21-23]發現，IL-24對卵巢癌、乳腺癌、肺癌、子宮內膜癌等多種腫瘤細胞的生長均具有抑制作用，能誘導上述腫瘤細胞的凋亡，并引起凋亡相關基因的變化。本實驗以Karpas299細胞為研究對象，研究了Ad-IL-24對其生長的抑制效應及其促細胞凋亡作用。結果表明，Ad-IL-24對Karpas299的生長具有抑制作用，且呈時間依賴性；Ad-IL-24組的細胞增殖抑制率和細胞凋亡率均高于Ad-GFP組（P<0.05），提示Ad-IL-24可用于ALCL的治療。臨床上若將其與化療藥物聯合應用，則可以減少化療藥物的用量，從而達到在保證治療效果的同時，減輕化療所帶來的不良反應的目的。
誘導細胞凋亡是腫瘤治療的重要機理。IL-24基因作為一種新型的細胞因子基因，既能選擇性誘導腫瘤細胞凋亡[24]，又能參與機體的免疫調節和抑制腫瘤血管形成，在腫瘤的治療方面具有重要的研究價值。IL-24基因引起腫瘤細胞凋亡的途徑有多種。研究[25]發現，IL-24基因可通過上調胱天蛋白酶3（caspase3）、上調bax蛋白及下調bcl-2蛋白的表達來誘導細胞凋亡。Tamai等[26]建立人膠質瘤裸鼠動物模型后，在瘤內注射Ad-IL-24，之后采用Western blot法檢測到腫瘤組織中有絲裂素活化蛋白激酶（p38 MAPK）蛋白的表達，推測IL-24基因可誘導并活化雙鏈RNA依賴的蛋白激酶（PKR），活化后的PKR進一步磷酸化p38 MAPK，從而激活p38 MAPK途徑，誘導細胞凋亡。
本實驗結果表明，Ad-IL-24對Karpas299細胞的增殖具有抑制作用，且Ad-IL-24組的細胞增殖抑制率和細胞凋亡率均較Ad-GFP組高，表明Ad-IL-24可抑制Karpas299細胞的生長并誘導其凋亡，但其具體通過哪條途徑誘導凋亡還不得而知，這是我們進一步研究的方向。
間變性大細胞淋巴瘤（anaplastic large-cell lymphoma，ALCL）是兒童非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）的一個亞型[1]。有報道[2]稱其在兒童NHL中所占的比例為10%～15%。ALCL的臨床表現以皮膚和軟組織腫塊多見，緩解率高，但復發率也高[3]。人白細胞介素-24（human interleukin-24，hIL-24）基因是一種新近發現的抑癌基因。研究[4]發現，白細胞介素-24（IL-24）基因可通過誘導細胞凋亡和調控細胞周期而發揮抗腫瘤的生物學作用。近十年來，隨著人們對腫瘤免疫、腫瘤病因、腫瘤發生發展分子機理等研究的深入，腫瘤的基因治療突顯了誘人的前景。IL-24基因作為一種新型的抑癌基因，其抗癌特性為NHL的治療帶來了新的希望。國內涉及腺病毒介導的白細胞介素-24基因（Ad-IL-24）對Karpas299細胞的抑制效應及其促凋亡作用的相關研究較少，故本實驗以ALCL Karpas299細胞為研究對象，研究了Ad-IL-24對Karpas299細胞生長及凋亡的影響，以期為ALCL的新型基因治療策略提供理論和實驗依據。
1 材料及方法
1.1 主要試劑及儀器
Ad-IL-24 〔該病毒也攜帶綠色熒光蛋白（GFP）基因〕、攜帶GFP基因的重組腺病毒（Ad-GFP，即空載體腺病毒）及QBI-293A細胞均由蘇州大學楊吉成教授提供，Karpas299細胞由遵義醫學院病理學教研室鄧飛教授惠贈。RPMI 1640培養液購于Gibco公司，胎牛血清購于Hcylone公司，細胞毒性與增殖檢測試劑盒（CCK-8試劑盒）購于東仁化學科技（上海）有限公司，膜聯蛋白V-異硫氰酸熒光素（Ann-exin V-FITC）細胞凋亡檢測試劑盒購于BD公司，Hoechst33342核熒光染液購于南京凱基生物有限公司。設備：1X71倒置熒光顯微鏡（日本奧林巴斯公司）、CyFlow Cube流式細胞儀（德國Partec公司）、DMI4000B倒置顯微鏡和Elx-800型全自動酶標儀（德國萊卡公司），以及ScientificTm8000 CO2培養箱（美國Thermo公司）。
1.2 方法
1.2.1 QBI-293A細胞和Karpas299細胞的培養
將QBI-293A細胞和Karpas299細胞分別放置于含10% FBS的RPMI 1640培養液中，在37 ℃、5% CO2培養箱中培養。在倒置顯微鏡下觀察細胞的生長形態，當細胞生長融合接近80.0%時，將細胞進行消化并傳代。2種細胞的消化操作略有不同。QBI-293A細胞：將瓶內舊培養液倒掉，加入0.25%胰酶0.2 mL，待胰酶鋪滿瓶底時輕微晃動瓶身1 min后放入培養箱中；在倒置顯微鏡下觀察，至細胞變圓、開始脫落時，將培養瓶置于超凈臺內，加入4.0～5.0 mL含10%胎牛血清的培養基以終止消化。用吸管輕柔吹打細胞以制成細胞懸液（密度約為1×105個/mL）。Karpas299細胞：用75%乙醇擦拭培養瓶外表后移入超凈臺內，將瓶內培養液和細胞吸入無菌離心管中離心（800 r/min，r=10 cm，10 min），使細胞與培養液分離；離心后倒掉上清液，于離心管內加入4.0～5.0 mL新鮮培養基，用吸管輕柔吹打細胞以制成細胞懸液（密度為1×105個/mL）。將制備的細胞懸液平均分裝于2個培養瓶中（各2.0～2.5 mL），再加入含10% FBS的RPMI 1640培養液至5.0 mL，置于37 ℃、5% CO2培養箱中進行培養，均傳7代。
1.2.2 Ad-IL-24和Ad-GFP的擴增及其效價的測定
將已經構建好的Ad-IL-24（Ad-IL-24組）和Ad-GFP（Ad-GFP組）按汪小華等[5]介紹的方法分別感染單層貼壁的QBI-293A細胞，經過多輪擴增以獲得高效價的病毒，并測定病毒效價，方法參考文獻[5]。另以不感染任何病毒的QBI-293A細胞作為空白對照組。3組細胞均于培養24 h時采用倒置熒光顯微鏡觀察細胞形態，并計數200個細胞中的GFP陽性細胞數，以確定感染效率。感染效率（%）=GFP陽性細胞數/200×100%。
1.2.3 流式細胞儀檢測Karpas299細胞的細胞凋亡率
取對數生長期的Karpas299細胞，制成細胞懸液，調整細胞密度為1×106個/mL，將其接種于6孔板中，每孔1.0 mL。將細胞分為3組：一組加入200.0 μLAd-IL-24原液以感染細胞（Ad-IL-24組），一組加入200.0 μL Ad-GFP原液以感染細胞（Ad-GFP組），另一組加入200.0 μL PBS溶液（空白對照組）。3組細胞均置于37 ℃、5% CO2培養箱中培養。收集上述3組培養48 h后的Karpas299細胞制成細胞懸液，調整細胞密度為1×107個/mL，取1.0 mL細胞懸液加入500.0 μL Binding Buffer以懸浮細胞，再加入5.0 μL Annexin V-FITC和5.0 μL碘化丙啶（PI）混勻，室溫靜置，避光反應15 min。最后以流式細胞儀檢測3組Karpas299細胞的凋亡率。3組均設3個復孔，實驗重復3次。
1.2.4 Hoechst33342核熒光染色觀察細胞凋亡形態
取上述培養48 h后的3組Karpas299細胞懸液，用預溫的PBS溶液清洗3次，每次15 min，再以4%多聚甲醛于室溫下固定15 min。將Hoechst33342染液覆蓋于細胞表面，置于37 ℃、5% CO2培養箱內染色15 min后，置于倒置熒光顯微鏡下觀察細胞形態。
1.2.5 CCK-8法檢測Karpas299細胞的細胞增殖抑制率
3組Karpas299細胞分別于培養12、24及48 h時，加入10.0 μL CCK-8試劑，于孵箱孵育1 h后（37 ℃、5% CO2），以酶標儀測定3組細胞的吸光度值（A值），計算細胞增殖抑制率。計算公式為：細胞增殖抑制率（%）=（A空白對照組-A實驗組）/A空白對照組×100%（實驗組指上述3個組別）。3組各時點均設3個復孔，實驗重復3次。
1.3 統計學方法
采用SPSS 11.5軟件進行統計學分析。計量資料以均數±標準差（
2 結果
2.1 Ad-IL-24和Ad-GFP的擴增及其效價測定結果
將3組QBI-293A細胞培養24 h后，于倒置熒光顯微鏡下觀察。白光下空白對照組的細胞排列規則，密度均勻；Ad-GFP組及Ad-IL-24組的細胞變圓并脫落，呈網狀或者葡萄狀聚集，均出現細胞的病理效應（CPE），見圖 1。熒光下空白對照組未見熒光；Ad-GFP組可見大量熒光，感染效率為90.0%；Ad-IL-24組也可見大量熒光，感染效率為95.0%（圖 2）。Ad-IL-24和Ad-GFP的病毒效價最初并不一樣，但為保證實驗的準確性，故進行適當的調整使其一致，最終病毒效價均調整為1×108 pfu/mL。
圖1
示培養24 h時3組QBI-293A細胞的白光觀察結果（倒置熒光顯微鏡 ×100）。1A：空白對照組，細胞生長良好；1B：Ad-GFP組的QBI-293A細胞出現CPE（紅箭）；1C：Ad-IL-24組的QBI-293A細胞出現CPE（紅箭） ? ?圖 2 示培養24 h時3組QBI-293A細胞的熒光觀察結果（倒置熒光顯微鏡 ×100）。2A：空白對照組未見熒光細胞；2B：Ad-GFP組見大量熒光細胞；2C：Ad-IL-24組見大量熒光細胞 ? ?圖 3 示培養48 h時3組Karpas299細胞的凋亡率檢測結果。3A：空白對照組；3B：Ad-GFP組；3C：Ad-IL-24組 ? ?圖 4 示培養48 h時3組Karpas299細胞凋亡形態的熒光觀察結果（倒置熒光顯微鏡 ×200）。4A：空白對照組的細胞呈微弱的藍色熒光；4B：Ad-GFP組的細胞呈微弱的藍色熒光；4C：Ad-IL-24組的細胞呈強亮藍色熒光（紅箭）
2.2 3組Karpas299細胞的凋亡率結果
流式細胞儀的檢測結果顯示，空白對照組Karpas299細胞的細胞凋亡率為（1.1±0.5）%，Ad-GFP組為（3.1±0.9）%，Ad-IL-24組為（41.2±1.9）%。與空白對照組及Ad-GFP組相比較，Ad-IL-24組的細胞凋亡率較高（P<0.05），而空白對照組與Ad-GFP組間細胞凋亡率的差異無統計學意義（P>0.05），見圖 3。
2.3 3組Karpas299細胞的凋亡形態觀察結果
以Hoechst33342染液染色后，于倒置熒光顯微鏡下觀察，空白對照組與Ad-GFP組的Karpas299細胞均呈微弱的藍色熒光；Ad-IL-24組的Karpas299細胞出現典型的細胞凋亡形態改變，即細胞體積變小，染色質濃集和邊緣化，且呈強亮藍色熒光（圖 4）。
2.4 3組Karpas299細胞的細胞增殖抑制率結果
Ad-IL-24組和Ad-GFP組3個時點的細胞增殖抑制率結果見圖 5。由圖 5可見，各時點Ad-IL-24組和Ad-GFP組的細胞增殖抑制率均不為0，提示Ad-IL-24和Ad-GFP均對Karpas299細胞的生長發揮抑制作用；隨時間延長，Ad-IL-24組的細胞增殖抑制率呈上升趨勢，而Ad-GFP組的變化不大；同時點與Ad-GFP組比較，各時點Ad-IL-24組的細胞增殖抑制率均較高（P<0.05）。該結果提示，Ad-IL-24對Karpas299細胞的生長抑制呈時間依賴性，且其抑制效果優于Ad-GFP。
圖2
各時點Ad-GFP組和Ad-IL-24組Karpas299細胞的增殖抑制率結果。同時點與Ad-GFP組比較，* P<0.05
3 討論
WHO造血淋巴組織腫瘤分類小組明確將ALCL分為間變性淋巴瘤激酶（ALK）陽性與ALK陰性兩類[6]。ALK陽性ALCL好發于兒童與青少年，主要累及淋巴結或結外，臨床上具有侵襲行為，其存在t（2；5）（p23；q35）易位[7]。目前，淋巴瘤的標準治療方法為藥物化療，最常用的化療方案為CHOP方案（包括環磷酰胺、阿霉素、長春新堿及潑尼松），同時輔以放療[8]。而針對ALCL的主要治療方案為按照B-NHL的方案進行短期高強度化療聯合放療[9]，如CHOP+MTX方案，但放化療可導致嚴重的副作用，如引起粒細胞缺乏，導致吞噬細胞功能障礙而使患兒更易并發嚴重感染[10]。研究[11]發現，因兒童化療常使用免疫抑制劑而導致患兒更易感染，且惡性腫瘤性疾病是病原菌血培養陽性的危險因素。此外，臨床有ALCL患兒化療后致免疫力低下而死于感染的報道[12]。故亟待探索新的ALCL的治療方法。
IL-24基因作為一種新型的抑癌基因，最初在人黑色素瘤細胞中被發現，因此被命名為黑色素瘤分化相關基因7（mda-7）[13]。之后發現，mda-7基因的結構和序列與IL-10家族具有同源性[14]，但與IL-10在免疫功能上存在拮抗性，故2002年Caudell等[15]將其重新命名為IL-24基因。研究表明，Ad-IL-24誘導的細胞凋亡具有廣譜性和靶向性，能抑制腎癌[16]、子宮頸癌[17]、肝癌[18]、直腸癌[19]及前列腺癌[20]組織的生長。本課題組前期的研究[21-23]發現，IL-24對卵巢癌、乳腺癌、肺癌、子宮內膜癌等多種腫瘤細胞的生長均具有抑制作用，能誘導上述腫瘤細胞的凋亡，并引起凋亡相關基因的變化。本實驗以Karpas299細胞為研究對象，研究了Ad-IL-24對其生長的抑制效應及其促細胞凋亡作用。結果表明，Ad-IL-24對Karpas299的生長具有抑制作用，且呈時間依賴性；Ad-IL-24組的細胞增殖抑制率和細胞凋亡率均高于Ad-GFP組（P<0.05），提示Ad-IL-24可用于ALCL的治療。臨床上若將其與化療藥物聯合應用，則可以減少化療藥物的用量，從而達到在保證治療效果的同時，減輕化療所帶來的不良反應的目的。
誘導細胞凋亡是腫瘤治療的重要機理。IL-24基因作為一種新型的細胞因子基因，既能選擇性誘導腫瘤細胞凋亡[24]，又能參與機體的免疫調節和抑制腫瘤血管形成，在腫瘤的治療方面具有重要的研究價值。IL-24基因引起腫瘤細胞凋亡的途徑有多種。研究[25]發現，IL-24基因可通過上調胱天蛋白酶3（caspase3）、上調bax蛋白及下調bcl-2蛋白的表達來誘導細胞凋亡。Tamai等[26]建立人膠質瘤裸鼠動物模型后，在瘤內注射Ad-IL-24，之后采用Western blot法檢測到腫瘤組織中有絲裂素活化蛋白激酶（p38 MAPK）蛋白的表達，推測IL-24基因可誘導并活化雙鏈RNA依賴的蛋白激酶（PKR），活化后的PKR進一步磷酸化p38 MAPK，從而激活p38 MAPK途徑，誘導細胞凋亡。
本實驗結果表明，Ad-IL-24對Karpas299細胞的增殖具有抑制作用，且Ad-IL-24組的細胞增殖抑制率和細胞凋亡率均較Ad-GFP組高，表明Ad-IL-24可抑制Karpas299細胞的生長并誘導其凋亡，但其具體通過哪條途徑誘導凋亡還不得而知，這是我們進一步研究的方向。
